Чай китайский горький кудин: свойства, рецепты Статьи о чае

Опубликовано Автор: alexxlab

Содержание

как заваривать, польза и вред

С китайского название «кудин» так и переводится — «горькие гвозди». Неудивительно, ведь горечь – первый вкус, который мы чувствуем, когда делаем глоток этого чая. Не всякий сумеет распробовать кудин с первой (и даже с десятой) попытки. Несмотря на это, он считается одним из самых ценных напитков, дарующих крепкое здоровье и долголетие.

Помимо сильной иммуномодулирующей функции, кудин обладает поистине императорским набором полезных свойств

Говорят, что знаменитый китайский чай кудин стал таким, каким мы его знаем, в связи с трагической историей, детали которой давно уже стерлись в веках. Но если в двух словах, то это была история прекрасной девушки, что жила в провинции и собирала листья падуба для чая. Ее красота привлекла внимание местного чиновника, решившего, что девушка станет отличным подарком императору, и сборщица чая оказалась обречена на судьбу наложницы. Не желая мириться с этим, девушка сбросилась со скалы в том самом месте, где обычно собирала листья. Говорят, капли ее крови попали на кусты падуба и окрасили его почки в яркий красный цвет, а самим листьям подарили тот особенный горький вкус, который известен нам сегодня.

Падуб широколистный. Источник: greeninfo.ru

Что такое кудин?

Многие полагают, что кудин – один из сортов китайского чая, но это не так.

Практически весь китайский чай производится из листьев и/или почек растения камелия синенсис путем их ферментации. Кудин же представляет собой напиток из листьев падуба широколистного. Его парагвайский родственник служит основой для чая мате. Только у мате вкус нежный и сладковатый, а кудин известен своей яркой горечью.

Собирают листья падуба широколистного на склонах гор и в лесах китайских провинций Фуцзянь, Юньнань, Хэнань и Сычуань. А продается этот растительный чай чаще всего в виде тонких скрученных вручную «гвоздиков», реже бывает в спиралях, связанном, а также в рассыпном виде.

Несмотря на то, что кудин не является чаем в классическом понимании этого слова, он, как и листья камелии синенсис, содержит кофеин. Это важно помнить, поскольку обычно травяные чаи не имеют кофеина в своем составе, и их можно пить в любое время дня. С кудином все немножко иначе – он способен «зарядить» не хуже кофе, а потому с ним стоит быть осторожней.

Поклонники кудина сравнивают его вкус с грейпфрутом

Наш эксперт-титестер Наталья Прохоренко сравнивает вкус кудина со вкусом грейпфрута:

Сначала ты ощущаешь только горечь, но в послевкусии оказывается гораздо больше интересных оттенков, включая нежную тонкую сладость.

Как заваривать кудин и когда лучше пить?

Напиток допускает разные варианты приготовления, не утрачивая своих полезных свойств, но оптимальным считается заваривание по принципу зеленого чая: промытые кипятком листья (1 ч.л./1 «гвоздик» на 200-250 мл) следует залить водой около 80-85 градусов и настаивать не более 3 минут. Первую заварку лучше держать не дольше 1 минуты, затем увеличивать временной интервал. При таком подходе чай получается более нежным и менее горьким. Многие любители кудина утверждают, что самое трудное – поймать тот момент, когда полезные свойства листа уже перешли в настой, а сильная горечь – еще нет. Мы рекомендуем начинать с нескольких секунд (10-20), постепенно позволяя чаю настаиваться подольше.

Листья кудина выдерживают до 5 заварок. Не рекомендуется запивать этим напитком еду.

Наш эксперт советует употреблять кудин в чистом виде только в том случае, когда вам нужна «скорая медицинская помощь» – например, в начале простуды или при высокой температуре.

Когда я чувствую, что заболеваю или уже заболела, я завариваю кудин. Эффект, конечно, отличается от того, который дают антибиотики или жаропонижающее (когда выпил – и сразу хорошо), но в целом, если организм приучить к такому лечению, оно отлично действует. Однако с обычными лекарствами кудин стоит сочетать с осторожностью.

Если же у вас нет необходимости разом получить большую порцию полезных веществ, которые содержатся в этом напитке, лучше просто добавлять «гвоздики» кудина к другим чаям, в идеале – к пуэру.

Кстати еще одна легенда про кудин гласит, что рецепт этого напитка другой китайский император подарил своей возлюбленной в качестве эликсира молодости и здоровья. И отличный подарок ведь!

Интересное сочетание: пуэр и палочка кудина

Польза и вред чая кудин

Помимо сильной иммуномодулирующей функции, кудин действительно обладает поистине императорским набором полезных свойств. В том числе он:

  • Повышает жизненный тонус
  • Предотвращает образование тромбов и разжижает кровь
  • Действует как противовоспалительное и обеззараживающее средство
  • Имеет жаропонижающее действие
  • Используется для лечения кашля и катара верхних дыхательных путей
  • Улучшает пищеварению, уменьшает газообразование
  • Стимулирует работу сердечно сосудистой системы и укрепляет стенки сосудов
  • Имеет мочегонное действие
  • Нормализует давление и уровень сахара в крови
  • Выводит шлаки и токсины, очищает печень, сжигает жиры, способствует снижению веса
  • Улучшает память

Не рекомендован кудин беременным и кормящим женщинам (по той же причине, что крепкий чай или кофе), а также детям до 12 лет.

Китайский чай кудин: полезные свойства, противопоказания и советы врачей

В исторических рукописях китайских династий почти 2000 лет назад присутствует одно из первых упоминаний о чае кудин, его описании и полезных свойствах. В то время он назывался Гаолу и применялся только в лекарственных целях.


Что это такое

Настой изготавливается из побегов падуба – вечнозеленого растения с листьями до 25 сантиметров. Он относится к сильно ферментированным категориям Кху Ча.

Кустарник произрастает в южном и центральном Китае, урожай собирается круглогодично, отличается только ферментация сырья. Молодое состоит из верхних листиков и почек, его вкус более богат и не так горчит, а крупные побеги прессуют или обжаривают, чтобы на более долгий срок сохранить полезные свойства. Собирают, скручивают и сушат его только вручную. Готовое сырье для употребления выглядит как палочки или веретенца 7-8 см в длину.

Химический состав и калорийность китайского чая кудин

Целебные качества объясняются наличием жизненно важных микроэлементов. В их числе белки и аминокислоты, витамины группы В, С, Д, Е, мощные антиоксиданты (фитонутриенты). Он является источником витамина А, поскольку содержит каротин, в его составе присутствует калий, фосфор, цинк, селен, кальций, железо и магний. Падуб содержит никотиновую и аскорбиновую кислоту. Калорийность составляет около 16 кКал.

Отвар восстанавливает нормальное давление, положительно влияет работу сердца, укрепляет и тонизирует сосуды. Выводит не только токсины, но и помогает почкам справляться с продуктами распада белка (мочевиной и креатинином), участвует в регулировании метаболизма.

Полезные свойства горького чая Ку дин


Эту траву в Китае называют лекарством от ста болезней. Китайцы научились сочетать его с другими сортами, усиливать или ослаблять тот или иной эффект, добиваться максимальной пользы от употребления.

Некоторые его особенности:

  • разжижает кровь;
  • восстанавливает жировой и углеводный баланс;
  • действует как противомикробное и противовоспалительное вещество;
  • оказывает мочегонный и жаропонижающий эффект;
  • фосфор в составе благотворно влияет на нервную систему;
  • является мощным противовирусным средством и лекарством от кашля;
  • стимулирует выработку желудочного сока.

Употребление рекомендуется для повышения иммунитета. Стимулируются защитные функции организма, которые помогают быстрее справиться с вирусами и гриппом в осенне-зимний период.

Поскольку он ускоряет метаболизм, выводит токсичные вещества и оказывает мочегонный эффект, он помогает тем, кто борется с лишним весом. Падуб убирает отеки, при этом не допускает обезвоживания.

Он снимает головную боль, улучшает работу памяти и зрение. Даже в зрелом возрасте восстановит четкость мыслей, придаст бодрости, сил и снимет усталость. Имея горьковатый терпкий вкус, отвар повышает настроение и общий тонус. Он содержит больше активных ферментов, чем зеленый чай.

Удивительные качества продукта сочетаются в травяном настое. Природа наделила его способностью оказывать противовоспалительное и антибактериальное действие.

Чем полезен китайский горький зеленый чай Кудин

Одним из компонентов, который лидирует по количеству содержания в падубе, является аскорбиновая кислота. Фармакологические исследования показали, что горечь, которая есть во вкусе, улучшает аппетит и налаживает процессы пищеварения.

Листья растения применяют в виде примочек для глаз, когда работа связана с компьютером. Они помогают снять напряжение и усталость, успокаивают и улучшают глазное кровообращение.

Для взрослых

Китайская горьковатая трава воздействует на гормональный фон, повышая работоспособность и сексуальное влечение. Возбуждающий отвар усиливает мужскую потенцию, женщинам помогает справляться с болями и перепадами настроения в критические дни.

Для пожилых

С возрастом у людей увеличивается риск тромбозов, кровь становится гуще, нарушаются ритмы сердца. Нагрузка на органы повышается, замедляется обмен веществ, ухудшается память и зрения. Появляется лишний вес, одышка и хроническая усталость. Горькая трава приостанавливает процессы старения. Она способна отвратить активное развитие атеросклероза, улучшить настроение, стимулировать активность и жизненный тонус.

Употребление при беременности и кормлении грудью

Вынашивая ребенка, женщина испытывает сильные гормональные перегрузки, ее организм перестраивается и готовится к родам. Обостряются все чувства и реакции. Падуб дополнительно стимулирует нервную систему, поэтому он не рекомендуется для применения в это время. Повышение мышечного тонуса также может сказаться на вынашивании малыша и в период кормления грудью. Кормящим мамам может подойти только в слабо заваренном виде с молоком. Но употребление должно быть целесообразно и необходимо.


Пробовать напиток нельзя, если малышу не исполнилось 3 месяцев. Вводить его в рацион нужно осторожно, начиная с двух-трех глотков в утренние часы. Только понаблюдав днем за поведением и самочувствием ребенка, можно продолжать принимать отвар, но не чаще 1 раза в неделю. Кормящая мама может позволить себе не более 150 мл.

Влияние на детский организм

Врачи придерживаются мнения, что возраст для употребления должен быть не младше 12 лет. Кроме рекомендаций докторов, нужно отметить, что не каждый ребенок сможет выпить этот чай. У него очень специфический вкус, а горький привкус не нравится малышам.

Чтобы укрепить детский иммунитет, поддержать его в период обострения вирусных заболеваний, смягчить воздействие стресса, достаточно половины столовой ложки отвара один раз в день, утром натощак. Если ребенок нормально воспримет напиток, меру можно увеличить до ¼ стакана (50 мл).

Как он помогает избавиться от лишнего веса

Если через полчаса после еды каждый день пить стакан отвара, он поможет снизить вес, стабилизируя липидный обмен. Для пищеварения и помощи при запорах рекомендуется есть только что заваренные листья падуба. У растения есть свойство утолять жажду. А если выпить его вечером, то он поможет снизить аппетит. Известна возможность горькой травы к детоксикации и снятию внутренних отеков, поэтому эстетический эффект при принятии питья обеспечен. Он тонизирует работу желудка, положительно влияет на метаболизм, ускоряя процесс расщепления жиров.

Его мочегонное действие не вызывает обезвоживания, а выведение токсинов помогает от похмелья. Клинически доказано, что достигнуты успехи в лечении алкогольной и никотиновой зависимости при применении этого отвара. Его успешно используют при ожирении и нарушении обмена веществ. С древних времен считается, что он дает не только здоровье и долголетие, но и красоту.

Кудин в народной медицине

Прежде всего листья растения отлично показали себя для лечения кашля и простудных заболеваний. Настой может предупредить образование раковых опухолей, а также помогает организму бороться с воздействием радиации. Одновременно он оказывает влияние на несколько систем, поэтому так активно применяется в китайской медицине.

Как используется в косметологии

Отвар пригоден не только для питья, но и для применения в качестве омолаживающего косметического средства. Свои полезные свойства он сохранит и передаст коже, если протереть лицо и шею кубиком льда.

Для тела подойдет скраб с антицеллюлитным отшелушивающим эффектом. Для этого настой нужно смешать с солью и мягко втирать в проблемные участки кожи.

Процесс приготовления


Первое правило для качественного заваривания – это хорошая вода. Для таких целей не подойдет водопроводная.

Пошаговая инструкция:

  • подогреть воду до 70-80 градусов;
  • ополоснуть посуду горячей водой;
  • положить 1 веретено (или 3-5 грамм россыпью) на стакан объемом 200 мл;
  • сначала сполоснуть траву подогретой до нужной температуры водой, а потом настаивать 15-20 секунд, постепенно увеличивая время в следующие разы.

Этот чай сложный и нестандартный. Если его передержать или не соблюсти пропорцию, он станет невыносимо горьким, а его качества изменятся.

У церемонии есть правила, которые важно соблюдать, чтобы не навредить здоровью:

  • не пить слишком горячий или холодный напиток;
  • избегать крепкого отвара – высокая концентрация тонизирующих веществ негативно скажется на самочувствии;
  • не передерживать заварку, так ухудшаются вкус и полезность продукта;
  • не запивать им лекарства;
  • выливать вчерашнюю заварку, так как в ней нет полезных веществ.

Трава кудин: полезные свойства, вред и противопоказания при заболеваниях

Конечный результат воздействия на состояние человека может быть разный. Это связано с наличием хронических заболеваний, индивидуальной переносимостью и особенностями организма. Настой может как улучшить, так и ухудшить общее самочувствие.


При сахарном диабете

Противопоказаний нет. Листья падуба помогают нормализовать количество сахара в крови. Принимать его можно пациентам без инсулиновой зависимости. Рекомендуемая доза приема – 1 стакан, утром, за 40 минут до еды.

При панкреатите

Напиток оказывает длительное противовоспалительное и успокаивающее действие, способствует восстановлению нормального пищеварения.

При холецистите

Желчегонное действие полифенолов поможет при застое желчи в протоках. Но при обострениях он противопоказан. Воспаление желчного пузыря, как правило, сопровождается желчекаменной болезнью, а растение может спровоцировать болезненное движение камней, стимулируя активность работы органов. Поэтому по поводу его приема нужно посоветоваться с врачом.

Мнение диетологов и врачей о чае Кудин

Специалисты подтверждают богатый спектр полезных компонентов и качеств продукта:

  • он снижает температуру при простуде и гриппе;
  • помогает от боли в горле и кашля;
  • убивает бактерии, оказывает противовоспалительное воздействие;
  • нормализует давление и количество сахара в крови;
  • стабилизирует давление;
  • имеет мочегонное и желчегонное свойство;
  • хорошо влияет на пищеварение и обмен веществ.

Он не должен применяться в качестве основного препарата для лечения. Чтобы получить желаемый эффект, нужно сочетать с рекомендациями врача и образом жизни, который подразумевает:

  • рациональное питание;
  • режим сна и отдыха;
  • занятия спортом и прогулки;
  • позитивный жизненный настрой.

Возможный вред

Горькая слеза при умеренном употреблении и правильном приготовлении принесет пользу. Но в некоторых случаях возможен негативный эффект:

  • беременность и грудное вскармливание;
  • хронический гастрит;
  • проблемы с щитовидной железой;
  • дети до 12 лет;
  • индивидуальная непереносимость и аллергия.

На что ориентироваться при выборе и как хранить

Пить напиток в чистом виде нравится не всем. Однако с сортами можно экспериментировать, миксовать ароматы и вкусы. Горечь зависит от сорта: чем он выше, тем она больше ощущается. Это связано с тем, что состав у них разный. Молодые неогрубевшие листочки не успели напитаться горечью, зато дают небольшую крепость и теряют в насыщенности аромата. Чтобы сохранить сырье, его нужно герметично закрыть и хранить отдельно от ароматных специй, в темном месте.

Советы врачей о пользе и вреде чая кудин

Несмотря на то что при умеренном потреблении и правильном заваривании он не принесет вреда, врачи не рекомендуют включать его в рацион людям с высоким давлением, ограничить питье на период беременности и кормления малыша грудью.


С осторожностью специалисты относятся к тому, чтобы давать листья падуба детям, так как он может вызвать аллергию или расстройство желудка. Больным с проблемами ЖКТ и щитовидной железы он не рекомендуется, хотя и имеет благотворное влияние на пищеварение.

Заключение

Узнав, что такое китайский чай Кудин или «Горькая слеза», его полезные свойства и противопоказания, вы можете самостоятельно оценить необходимость его употребления для себя. Но если вы решите попробовать его, то покупку стоит совершить в проверенном магазине, таком как «Русская Чайная Компания».

полезные свойства китайского чая, как правильно заваривать, польза и вред, противопоказания, как пить, горькая слеза, зеленый для похудения, иглы кудина

Чай Кудин — способ жить долго и счастливо. Жители Китая славятся долголетием: в стране этот напиток на протяжении двух тысяч лет используют в качестве лекарственного средства. В период холодов при гриппе, простуде вместо таблеток и порошков пьют целебный настой.

Чай Кудин — универсальный помощник для поддержания организма при сахарном диабете, гипертензии, нарушении обмена веществ и других заболеваний. Натуральное происхождение лечебного напитка вызывает доверие в большей степени, чем некоторые известные синтетические препараты.

Известный вид Кудин чая собирают вручную с сорта Падуба на юге Китая,  чаще всего на острове Хайнань и в провинции Гуанси. После сбора листья сворачивают в палочки 5-7см длиной, веретена и просушивают. Крупные побеги подвергаются прессованию и копчению. Способ обработки помогает длительное время, без потери качества, хранить сырье.

Интересный факт. Падуб— низкорослое дерево с широкими, напоминающие дубовые, листьями. Растет в Китае горных районах с повышенной влажностью. Не всегда желающие туристы могут попасть на плантации растения. Дорога к местности  труднопроходима.

Но больше всего ценится лист шуй сю, который собирают ранней весной, отрывать желательно молодой верхний побег. Мелкие почки считаются мощными источниками здоровья. Существует поверье: китайский чай Кудин был доставлен наследником императорской семьи для избавления от всех болезней. Целительное снадобье могли пить только представители высших социальных слоев.

Внешний вид сухого листа Кудина напоминает сорт зеленого чая. Но похожи они только внешне в высушенном состоянии: свойства напитков различаются. Некоторые специалисты не называют отвар листьев падуба чаем. Часто зеленый Кудин выдают за молодой зеленый чай.

Химический состав, калорийность, микроэлементы и витамины чая

Вкус напитка, вяжущий, с тонким ароматом трав, оставляет во рту небольшую горчинку, которая переходит в сладость. Неслучайно в переводе Кудин означает «горькая трава», название напиток получил от китайского «kuding cha».

Интересно. По одной из легенд девушку, которая занималась сбором целебного растения, отправили к императору в качестве наложницы. Бедная красавица не захотела довольствоваться жизнью в гареме: сбросилась с высокой горы и разбилась насмерть. Капельки крови несчастной попали на зеленые побеги китайского чуда-лекаря. Поэтому побеги сменили цвет на красный, вкус напитка  стал более терпким. Так чай Кудин получил название «горькая слеза».

Калорийность ароматной палочки небольшая:16 ккал,  это равно количеству калорий в одной шоколадной конфетке. Кроме этого у листьев богатый состав: трава содержит около 18-ти наименований аминокислот.

Также присутствуют вещества:

  • водорастворимые витамины: C, B1(тиамин) и В2;
  • жирорастворимые: Е, К, D.
  • минералы: кальций и калий, фосфор, железо, фтор, магний;
  • микроэлементы: кремний, хром, селен;
  • эфирные масла, придающие напитку аромат;
  • дубильное вещество теотанин.

Справка. Содержание антиоксидантов в чае Кудин в 10 раз больше, чем в зеленом чае.

Полезные свойства чая

Разгадка секрета напитка для продления молодости и здоровья— целый букет необходимых организму микроэлементов и минералов.

Отвар обладает рядом полезных свойств:

  • общеукрепляющее;
  • жаропонижающее;
  • противоспалительное;
  • мочегонное;
  • противовирусное;
  • разжижает кровь;
  • помогает восстановить обмен веществ.

Действие натурального доктора необходимо взрослым для регулирования уровня сахара в крови, избавления от головных болей. Китайский чай помогает в восстановлении функций печени и стимулирует функции нервной системы. Активизирует работу желудка и кишечника, избавляет от изжоги, облегчает похмельный синдром и избавляет от перепадов настроения в период гормональных изменений организма. Избавит женщин от периодических болей в критические дни.

Неоценима польза настоя падуба для пожилых людей: Кудин поможет привести давление в норму, значительно улучшить работу мозга и память. Тем самым снизит риск появления инфаркта, инсульта, острой сердечной недостаточности, гипертонии. Употребление настоя из листьев падуба сделают человека бодрым, активным, а мысли— ясными. При приеме повышается степень концентрации внимания: это особо актуально в пожилом возрасте. Чай применяют также в лечении глазных заболеваний.

Детям в сезон простуд дают китайский чай для профилактики респираторных заболеваний, аскорбиновая кислота в составе заварки сокращает продолжительность гриппа и ОРВИ. В лечении простуды отвар используют для снижения температуры тела, при лечении ларингита и фарингита, снимает красноту глаз. Удивительно, сколько уникальных свойств собрано в одном растении. В Китае напиток называют лекарством от 100 недугов. Напиток и расслабляет мышцы и тонизирует организм: поэтому может применяться во многих случаях.

Как правильно заваривать и пить

Для превращения листочков в лекарство недостаточно просто купить  заготовку для настоя. Важно правильно заварить Кудин: подготовить воду не выше 60°С-70°С для молодых побегов и 80°С для взрослых скрученных листьев.

Первый вариант— метод пролива

Горсть от 3 до 5 г молодых побегов заливают горячей водой и сливают. Крупное веретено из падуба кладут в расчете— 0,5-1палочку на стакан воды, первую заварку убирают. Так можно уберечь организм от попадания инфекции. Сборка идет вручную, траву нужно очистить от грязи и пыли. Китайский чай очень нежный, и быстрый многократный пролив поможет сохранить целостность листа и аромат. Дополнительное заваривание необходимо также для устранения сильного терпкого вкуса: можно регулировать степень горечи по собственным предпочтениям. Каждая следующая заварка будет слабее. Заливать водой можно сырье до 5 раз.

Время каждой заварки нужно увеличивать: от 1 до 2 мин. Залить в первый раз, слить. Добавить воды во второй раз, подождать минуту, убрать жидкость. После следующей заливки ждать 2мин.

Можно брать меньшее количество сухой смеси растения либо кусочек «веретена» и подливать столько жидкости, сколько необходимо конкретному человеку. Например, берут кончик палочки и заливают четвертью стакана воды.

Второй вариант—метод настоя

Так же соблюдая соотношение заготовки и воды, температурного режима, необходимо выполнять правильную заварку Кудина:

  1. Залить сырье жидкостью.
  2. Слить первую порцию воды.
  3. Добавить горячую воду еще раз.
  4. Дать чаю настояться.

Настой не заваривается, как обычный чай. Не стоит применять кипяток и ждать долгое время для получения готового напитка. Листики очень быстро раскрываются в воде под действием высокой температуры. А настой палочки падуба становится очень горьким при длительной выдержке.

Интересно. В Китае чай обычно заваривается в стакане для того, чтобы виден был «танец чаинок» и цвет настоя.

Как пить китайский Кудин: небольшими глотками, не смешивать с лимоном, молоком и другой едой. Оптимальное время приема настоя: через час после принятия пищи, в зависимости от показаний можно принимать и за час до еды.  Важно относиться к напитку как к лекарственному средству и не превышать объем: в день пить 2-3 чашки чая. В охлажденном виде выпить Кудин разрешается, но держите приготовленный настой больше 3 часов, исчезает польза напитка.

Особенности применения напитка

В народной медицине целебный отвар падуба применение чая важно для восстановления потенции и для замедления процессов старения. Используют свойство горькой травы тонизировать организм. Горький Кудин—практичное проверенное средство для лечения кашля. Помогает справиться с последствием радиационных воздействий.

В косметологических процедурах прибегают к целительной горечи для регенерации кожного покрова. Из  приготовленного настоя делают кубики льда, протирают кожу лица, шеи и декольте. Скрабирующее средство из измельченных листьев чая с солью прекрасно увлажняет и подтягивает.

В борьбе с лишним весом – хорощий помощник. За основу берется свойство чая снимать отеки и выводить из организма шлаки. Для похудения заваривают зелень через 40-50 мин после еды, принимают не более одного стакана целебного настоя. Трава поможет усвоению пищи и ускорит обмен веществ.

Возможный вред и противопоказания

Запрещено пить чай Кудин при беременности и грудном вскармливании. Бодрящее действие напитка обусловлено наличием в нем кофеина. Активная стимуляция психической деятельности нежелательна для сохранения здоровья будущей матери и ребенка.

По отзывам специалистов, отвар не рекомендуют пить детям младше 12 лет. И при настаивании чая дают совет, не делать слишком насыщенный напиток: ребенок может оказаться от чая из-за горького вкуса.

Нужна консультация врача при мочекаменной болезни и нарушении оттока желчи. После трансплантации органов нежелательно употреблять лечебный настой китайского чая. Артериальная гипертония – заболевание, при котором нельзя пить китайское средство из побегов и листьев падуба.

Ценители культурных традиций Поднебесной знают, что настой из побегов лечебного падуба — это не чай в ботаническом смысле слова. Иголки Кудина обладают травяным ароматом и только внешне напоминают чайные листики. Из-за цвета многие называют китайский чай  разновидностью зеленого чая.

Важно использовать хорошо просушенное сырье, заваривать и пить отвар в рекомендуемых дозах. При серьезных случаях заболеваниях и аллергических реакциях на настой необходимо вовремя обратиться к специалисту.

Кудин и его полезные свойства

Кудин способен заменить целую домашнюю аптеку и стать вашим личным специалистом в борьбе с недугами. Он обладает огромным набором полезных свойств, превосходящим лю-бой известный человечеству фрукт. Его можно заваривать как самостоятельный напиток и использовать его как добавку, особенно он интересен в союзе с темным пуэром. При пра-вильном заваривании китайский чай Кудин будет иметь легкую горчинку и долгое, сочное, сладкое послевкусие.

Кудин (кит. kuding cha, горький гвоздь, горькая трава) производится из листьев субтропического вечнозелёного растения падуба широколистого, произрастающего на склонах гор и в смешанных лесах китайских южных провинций Юньнань, Сычуань, Хэнань и Фуцзянь. Кудин не относится ни к одной категории китайского чая. Растение падуба имеет мясистые листья и толстые гладкие ветви. Некоторые кусты достигают нескольких метров в высоту.

Листья кудина различается по виду сырья (почки красноватого оттенка, мелкие и зрелые листья) и скрутке. Собранное сырье скручивается вручную и на конечном этапе обработки просушивается. По скрутке кудин делится на скрученный, спиральный, связанный, листовой и прессованный. Высшей категорией растения считается Кудин Шуй Сю, сделанный из молодых нежных листочков и не подвергающихся ручной скрутке. Листья Кудина Ша Дин Син скручиваются вокруг черешка в продолговатые палочки длиной около 7 сантиметров.

История чая

Легенда о чае рассказывает историю молодой девушке А Сянь, которая жила в одной из деревень южной провинции Китая. Она собирала травы для лечебного зелья, но однажды была схвачена и доставлена к императорскому дворцу в качестве наложницы. А Сянь не могла смириться с такой судьбой и прыгнула с высокой скалы. Капли ее крови оросили зеленые почки Кудина. Растение навсегда приобрело красноватый оттенок, напоминая о трагичной истории прекрасной души.

Полезные свойства чая Кудин

В китайской народной медицине кудин известен уже более 2 тысяч лет, его называют напитком здоровья и долголетия. Полезные свойства листьев кудина бесконечны. Кудин снижает уровень холестерина, снижает риск появления сердечно-сосудистых заболеваний, сжигает жиры, способствует пищеварению, уменьшает скопления газов в кишечнике, избавляет от изжоги.

Листья кудина содержат 18 аминокислот, витамины C, B1,B2, E, кальций, калий, железо, магний, медь, цинк , натрий, марганец, селен.

Настой кудина оказывает жаропонижающее действие, применяется при простудных заболеваниях, кашле, лечении горла, снимает красноту глаз, обладает бактерицидными свойствами, улучшает память.

Кудин часто называют чаем для гипертоников и диабетиков. Дело в том, что употребление этого напитка позволяет нормализовать давление и уровень сахара в крови, причем, достаточно эффективно и быстро.

Кроме того, чай Кудин обладает отличным жаропонижающим действием, снимает похмельный синдром, выводит из организма шлаки и яды, оказывает противовоспалительное и мочегонное воздействие, повышает жизненный тонус, благотворно воздействует на органы пищеварения и способствует снижению веса. 

Как заваривать чай Кудин

Китайский чай Кудин обладает выраженной благородной горчинкой, которая при правильном заваривании переходит в яркое, сладкое послевкусие. Заваривать можно в любой посуде, даже просто в чашке. Чтобы правильно заварить Кудин, используйте остывшую кипяченую воду 75-80 градусов. Достаточно 1-ой спирали на 200-250 мл воды, если она очень длинная – половина. Первую заварку рекомендуется сразу же слить, чтобы очистить чайный лист от пыли. В дальнейшем настаивайте чай в течение 30-60 секунд, постепенно увеличивая время экспозиции при последующем заваривании. 

Противопоказания

Горькая слеза при умеренном употреблении и правильном приготовлении принесет пользу. Но в некоторых случаях возможен негативный эффект:

·      беременность и грудное вскармливание;

·      хронический гастрит;

·      проблемы с щитовидной железой;

·      дети до 12 лет;

·      индивидуальная непереносимость и аллергия.

полезные свойства и заваривание ❧ Подборка кудина в NewTea

Зеленые и красные чаи, пуэры и улуны сегодня популярны не только в Китае, но и среди ценителей этого напитка во всем мире. А вот другая китайская разновидность чая – кудин – известна куда меньше. Между тем, о целебных свойствах «горькой слезы» в Поднебесной знали еще два тысячелетия назад.

Чай молодости для любимой

Легенда гласит, что китайский император Тяньбао династии Тан подарил сосуд с чаем своей невесте, чтобы сохранить молодость и красоту избранницы. Говорят, кудин невесте понравился. О том, как сложились отношения пары, история умалчивает, а вот напиток стал в Китае очень популярным.

Неискушенные люди не отличат кудин от зеленого чая, ведь внешне заварка очень похожа на сухие чайные листья. Однако для приготовления настоя используются молодые листья падуба широколистного. Урожай вручную собирают весной, листочки сушат на солнце, а потом скручивают, тоже руками, а не машинным способом. Благодаря естественным процессам изготовления чая в листьях сохраняются все полезные вещества.

Так весело происходит сбор падуба в Поднебесной.

Секрет благотворного действия кудина

За характерный привкус и терпкость чай называют «горькой слезой», но ценится кудин больше за целебные свойства. По силе воздействия на организм напиток приравнивается к фитолекарствам. В плане пользы кудин на голову превосходит зеленые чаи.

Кудин продается в каждом чайном магазине Китая. Но это не чай. Его делают из молодых…

Состав напитка

Сила кудина – в редком сочетании полезных элементов. В высушенных листьях падуба содержатся:

  • витамины группы В, А, D, РР и Е;
  • флавоноиды: концентрация в 10 раз выше, чем в зеленых сортах чая;
  • эфирные масла;
  • аминокислоты;
  • минералы и микроэлементы;
  • танин.
Эти листики бережно сворачиваются в трубочками сборщицами. И снова распускаются уже в кипятке.

Полезное действие

Кудин пьют для улучшения самочувствия и при разных заболеваниях.

Как влияет чай из падуба на организм:

  • укрепляет сердце и стенки сосудов, препятствует появлению тромбов в крови;
  • тонизирует и снимает усталость;
  • нормализует уровень сахара в крови, поэтому показан диабетикам;
  • повышает иммунитет и сопротивляемость организма инфекциям;
  • мягко повышает артериальное давление, рекомендуется при гипотонии;
  • улучшает память и концентрацию внимания;
  • регулирует обменные процессы, способствует похудению;
  • помогает избавиться от простуды, понижает температуру;
  • чистит печень, выводит токсины и тяжелые металлы.

Несмотря на целый список «плюшек», употребление кудина способно произвести обратный эффект. Нежелательно пить этот чай беременным, ведь напиток повышает давление, что опасно во втором триместре.

Нюансы заваривания

Кудин похож на зеленый чай, но в приготовлении есть отличия. Дозировка заварки – по количеству стрелок (скрученных листочков). На одну порцию берут половину стрелки.

Заваренный кудин. Необычный мед из «Горькой слезы». Прекрасно дополнит напиток.

Шикарная версия нашего хита EC-21. Более практичен, чем его хитовый родственник. Черн…

Температура воды для заваривания должна быть не выше 60°С. Настой выдерживают 30 сек. и сразу же разливают в чашки. Если передержать, напиток получится слишком горьким. Одна порция заваривается до 5 раз.

Чай кудин – напиток, целебные свойства которого люди используют уже не одно тысячелетие.

Чай Кудин: 10 самых важных фактов

Чай кудин. Все о чае Кудин здесь. 

Какие полезные свойства у чая кудин?

Где купить кудин?

Как заваривать кудин?

Стоит ли пить кудин для похудения?

Горький ли чай кудин?

Как пить кудин?

Кудин (ку дин) – это вовсе не чай, хотя его можно найти практически в любом чайном магазине. Здесь мы собрали самые интересные факты об этом напитке. Теперь Вам не надо собирать информацию кусочками по интернету. Все здесь!

1.Производится кудин из листьев вечнозеленого субтропического растения под названием Падуб широколистный (llex latifolia). В китайском словаре падуб значится: ???, k?d?ngch?. Кудин в переводе с китайского означает «горькая трава».

2.Падуб произрастает преимущественно в южных провинциях Китая, на влажных, тенистых склонах гор, а также в смешанных лесах по берегам рек. Это невысокое, крепкое деревце с толстыми гладкими ветвями и крупными зелёными листьями с глянцеватым блеском. Цветы падуба мелкие, желтоватые, образуются в пазухах листьев весной, ягоды небольшие, круглые, желтого, оранжевого или красного цвета, созревают осенью и могут сохраняться на дереве всю зиму.

3.Падуб издавна ценился за свои декоративные и целебные качества. Им украшали дома в Древнем Риме в дохристианскую эпоху, а впоследствии падуб (или остролист) стал, наравне с омелой, символом Рождества. Друиды считали падуб символом солнца, а североамериканские индейцы готовили противоядия из листьев и черенков падуба чайного (Ilex vomitoria).

4.Сырьем для небезызвестного напитка матэ также служит один из видов падуба – падуб парагвайский (Ilex paraguariensis). Матэ готовят из его высушенных, измельченных листьев и молодых побегов.

5. Полезные свойства чая кудин. История применения кудина как лекарства в Китае насчитывает не одно столетие.

Кудин (или кхудин) китайцы относят к горьким чаям, кху ча. Горький вкус в традиционной китайской медицине соотносится с энергией инь, огнем, сердцем и тонким кишечником. Считается, что горький вкус устраняет излишний жар и огонь, применяется для лечения кашля и одышки, при заболеваниях желудка и кишечника, сопровождающихся тошнотой, рвотой и запорами. Также горечь способствует устранению застоя энергии (ци) в организме.

Проще говоря, чай ку дин обладает общеукрепляющим, тонизирующим, жаропонижающим, противовоспалительным, детоксикационным, диуретическим действием. Кроме того, кудин нормализует артериальное давление, углеводный и липидный обмен и способствует похудению, а еще обладает противоопухолевым эффектом.

6.Собирают кудин только вручную, небольшими партиями, весной. Затем сырье скручивают, прокаливают и сушат на солнце.

7.Кудин бывает скрученный, спиральный, связанный, листовой и даже прессованный.

8.Высший сорт чай кудин – Кудин Шуй Сю – производится из мелких молодых листочков, собранных на Желтой горе (Хуан шань) в провинции Сычуань. Именно его поставляли к императорскому двору.

9. Как пить и как заваривать чай Кудин? Кудин – отличное профилактическое средство, однако пить часто его не стоит, достаточно заваривать 2-3 раза в неделю, но заваривать правильно, чтобы не получить напиток полынной горечи.

Оптимальная температура воды – 80 градусов, лучше всего заваривать чай ку дин проливом, 1-2 иголочки на гайвань или чайничек. Первую заварку сливать не обязательно, но желательно, настаивать несколько секунд, увеличивая время по мере остывания воды. Кудин также можно заваривать в большом чайнике (3-4 иголочки) или просто в кружке (достаточно 1 иголочки). Главное – соблюсти температурный режим и не передержать заварку. Цвет готового настоя кудина желтовато-зеленый, аромат тонкий и благородный, во вкусе присутствует горечь и некоторая терпкость, послевкусие неизменно сладкое. Выдерживает многократное заваривание.

Получить подробную инструкцию с фотографиями

10. К сожалению, чай кудин частенько становится жертвой предубеждения. Многие, неправильно заварив его при первом знакомстве, более не желают это знакомство продолжать, а зря: кудин – отличный помощник в борьбе с целым спектром заболеваний, он наполняет тело легкостью, а сознание – ясностью. А еще кудин хорош в качестве добавки к шу пуэру.

 

 

Кудин — китайский чай

Кудин — «горький чай«, «горькая трава«, «горький гвоздь«, «лекарство от ста болезней» — так его называют на родине в Китае, хотя по сути этот напиток и не является чаем в биологическом смысле этого слова. Дело в том, что кудин производят из листа падуба широколистного, а не камелии китайской, как весь традиционный чай. Тем не менее, технология производства во многом напоминает чайное, да и способ употребления -завариванием горячей водой, поэтому условно этот напиток называют чаем. Падуб широколистный произрастает во многих провинциях Китая, потому и способов изготовления кудина существует несколько, в данном случае кудин пропечёный над углями.

Внешний вид кудина такой же специфический, как и его вкус и аромат — веретенообразно скрученные листья, подобные иглам или копьям, тёмного цвета — от бурозелёного до вороного. 

Аромат кудина тёплый, уютный, с деревенским настроением, напоминает баню по чёрному, в нём ощущаются ноты копчения, тёплого парного молока и хлева.

Стоп! Прежде чем заваривать кудин, стоит сразу оговориться, что «чай» этот не зря называют горьким — он действительно горький. Особенно если его заварить крутым кипятком — это не для слабонервных, горечь будет неимоверная, такая, что пить сможет только человек, прошедший специальную подготовку 😉 Но зачем же тогда пить напиток, который настолько неприятен? Во-первых, кудин чрезвычайно полезен, в нём содержится большое количество дубильных веществ, а также витаминов и микроэлементов, благодаря чему он и является лекарством от многих болезней. Во-вторых в китайской традиционной медицине считается, что горький вкус выгоняет из организма негативную энергию ци. Ну и, в-третьих, важно соблюдать несколько простых правил заваривания кудина. Если не хотите отбить охоту пить этот замечательный напиток раз и навсегда, лучше использовать для заваривания остывшую до 60-70 градусов воду, делать короткие проливы и не класть более одного «гвоздя» кудина на человека. Тогда полученный напиток будет не только полезным, но и приятным в употреблении, нежно-оливкого, чуть золотистого цвета. При такой концентрации, можно будет в полной мере насладиться благородным вкусом кудина — немного смолистым, подкопчёным, травянисто-терпким, слегка вяжущим, с нотами коры, и довольно мощной, яркой горчинкой, переходящей в освежающую сладость.

Многие любители чая уже знают, что при первых признаках простуды и больного горла, нужно срочно заваривать кудин и пить как лекарство! Если вы ещё не пробовали этот аутентичный напиток, рекомендуем испытать на себе его целительное воздействие, общеукрепляющий и заряжающий витаминами и природной энергией эффект, что будет так кстати в холодное время года!

Невероятно горький китайский чай, который останавливает зиму

Добро пожаловать в Rocket Fuel, новую серию, рассказывающую о волшебных напитках, от которых просыпается мир.

Погода на свитере наступает, и внезапно у всех нас возникает простуда, или сильная аллергия, или боль в горле, и наши утренние распорядки теперь имеют дополнительную цель: заставить нас чувствовать себя достаточно человечными, чтобы войти в мир бодрствования. Когда у вас голова простужена, и вы едва видите прямой, высушивающий рот кофе или даже заваривание привычного чая — этого недостаточно.Пришло время для чего-то более сильного.

Введите ядерный вариант: китайский травяной чай kuding cha . Это одно из самых горьких веществ, которое вы можете безопасно проглотить, и его скользкость по горлу ощущается как дистилляция дюжины капель от кашля, достаточно мощных, чтобы стереть даже воспоминания о боли в горле. Назовите это амаро с мужеством. Только не пытайтесь это сделать, пока не попробуете хотя бы несколько раз; кудинг Чай , мягко говоря, приобретенный вкус, но как только он начинает расти на вас, его трудно перестать пить.

Под его горечью, если вы можете себе представить что-нибудь под ней, скрываются нежные травянистые, травянистые качества и, в конце, глубокая, затяжная медовая сладость, которая укрощает большую часть этого горького привкуса. Это то, что дает вам чай кудинг, и почему он пользуется популярностью у небольшой субкультуры людей, которые пьют его не только в лечебных целях, но и в развлекательных целях. Сладкий чай, за который нужно страдать, имеет свои награды.

В стране, где названия чая могут склоняться к поэзии («железная богиня милосердия», «бровь долголетия»), чай kuding впечатляюще прост: буквально «чай с горьким гвоздем», описывающий не только вкус, но и иглу. -подобная форма его скрученных засохших листьев.Как и в случае со многими другими лекарственными травами, пьющие в провинциях Гуанси и Аньхуэй (и в других местах) приписывают этому растению падуб широкий спектр целебных свойств, родственник из Нового Света пьет йерба мате , гуаюса и . Яупон . Чай Kuding с небольшим содержанием кофеина, как утверждается, может улучшить кровообращение, помочь вам похудеть, регулировать температуру тела и, конечно же, вылечить простуду. Я скептически отношусь ко всем этим утверждениям, но нет никаких сомнений в том, что богатая текстура чая и глубокая горечь обладают способностью успокаивать горло, как ничто другое.Горечь — это недооцененный вкус в западном каноне, но это впечатляющая кнопка физиологической перезагрузки. Когда вы это глотаете, никакой душный холод не побеспокоит вас.

Если вы хотите присоединиться к подполью kuding , ищите его в магазинах китайских травников или в Интернете. Одного пера хватит на порцию; воткните его на дно большой кружки и залейте горячей водой (чем ближе к кипению и чем дольше вы варите, тем крепче будет ваш чай). Дайте перо развернуться на пару минут, затем сделайте глоток и примите горечь во всей красе.По мере того, как вы привыкните к его свойствам, попробуйте концентрировать дозу, употребляя меньше воды или больше чая. Горечь станет более интенсивной, и вместе с ней вы получите базовую сладость и успокаивающее действие на горло. Вот где чай kuding превращается из травяной причуды в средство от головокружения. К тому времени, когда вы сделаете снимки в качестве своей утренней рутины, вы поймете, что это получилось.

Needle Kuding Tea — Ku Ding Cha — Kuding plus Tea

Посмотрите видео ниже, в котором мы завариваем 3 иглы внутри заварочного устройства.Это слишком просто, но это правда.

Чай Кудинг (также известный как «Ку Дин Ча») — это лечебный чай, который тысячелетиями использовался в традиционной китайской медицине. Слово «Ку» означает горький, а китайский иероглиф «Дин» («丁»） означает «шип», как и форма этого чая. Игольчатый чай кудинг широко известен как «чай с горькими гвоздями». Листья, используемые для приготовления этот чай из вечнозеленого растения Ilex Kuding cha, которое выращивают в Китае.Длинные узкие листья скручены вместе, образуя характерные длинные палочки / шипы. Еще одна отличительная черта, как следует из названия, — горький вкус. Однако некоторые пьющие обнаруживают, что за горечью следует слегка сладковатый привкус.

При приготовлении чая Кудинг рекомендуется использовать всего 2 иглы / иглы, если вы впервые попробовали чай из-за его сильного горького вкуса. По мере того, как вы привыкаете к чаю, вы можете увеличить его количество до 3-4 игл. Начните с того, что согрейте чайную чашку и чайник горячей водой.Затем заварите чай Кудинг в кастрюле горячей водой в течение двух минут. Шипы можно использовать несколько раз — после второго заваривания нужно будет увеличить время заваривания.

В традиционной китайской медицине чай Кудин был известен своими многочисленными применениями и до сих пор популярен при таких заболеваниях, как улучшение памяти и сосредоточение внимания; успокаивающая суетливость; облегчает простуду, полезен для очистки головы и ринита; зуд в глазах; головные боли; облегчение синусита; и лечение бронхита.Также говорят, что он улучшает пищеварение; снизить артериальное давление и снизить уровень холестерина. Чай Кудинг содержит много антиоксидантов, поэтому полезен для детоксикации.

Не пейте чай Кудинг во время беременности, если вы недавно родили или кормите грудью; во время менструации; у вас низкое артериальное давление. Также не пейте 1 месяц до и после операции. В прошлом мы часто получали вопросы относительно чая Кудин и плодородия. Из-за сложности этой темы сложно дать общий ответ.Проконсультируйтесь с местным практикующим врачом или врачом китайской медицины.

Дополнительную информацию о здоровье можно найти здесь: Польза и побочные эффекты Kuding для здоровья

Чай Кудинг Цена

Вы могли заметить, что кудинг иногда может быть немного дороже. И из-за этого вы можете задаться вопросом, почему это растение так доступно в Teasenz. Поскольку мы находимся в Китае, наши эксперты по травам напрямую работают с поставщиками качественных продуктов. Это позволяет нам вырезать для вас несколько посредников.Более того, вы не будете наслаждаться самой низкой ценой на чай Кудинг, но также насладитесь этой травой как можно более свежей.

Связанные поисковые запросы: китайский кундин, чай кун дин, чай ваньчэн кудинг, чай кудинг плюс

Руководство по преимуществам чая Кудин (обновлено за 2019 год)

Руководство по пользе и побочным эффектам чая Kuding

Кудин — это растение, произрастающее в Китае. Согласно историческим документам, это растение применялось как лечебное растение более 2000 лет.Во времена династии Сун его преподносили правительственным чиновникам как дань уважения. Позже производство чая Кудинг (или Кудинг ча) увеличилось, и он стал популярной народной медициной. Чай также часто называют иглой кудинг, поскольку плоские листья часто скручиваются в игольчатые формы.

Чай Кудин и китайская медицина

Учитывая богатую историю этого растения, мы изучили пользу кудинга для здоровья. Практикующие врачи могут применять это растение при соблюдении следующих условий:

  • Избыточный нагрев
  • Головная боль
  • Красные глаза
  • Зубная боль
  • Тиннитус (звон в ушах)
  • Диарея
  • Головокружение
  • Угри

Кудинг Ча и народная медицина

Однако, когда врачи прописывают кудинг, он часто бывает в более концентрированной форме, например, в порошке.Если используются настоящие травы, обычно пациенту рекомендуют варить их в горячей воде в течение нескольких часов. В результате получается высококонцентрированный лечебный напиток, который обычно имеет очень горький вкус.

Хотите сами попробовать чай Кудинг? Затем купите чай Kuding в Интернете. На этой странице также есть видео, демонстрирующее, как его можно приготовить в заварочном устройстве для чая.

В немедицинском мире кудинг часто употребляют в качестве чая в Китае. Таким образом, эффект намного слабее, и поэтому он считается безопасным для длительного употребления без консультации с врачом.Кроме того, послевкусие более приятное и часто описывается как слегка сладкое и освежающее. Ниже также представлены некоторые другие китайские травяные чаи, которые доступны в нашем интернет-магазине:

Исследование преимуществ чая Kuding

Кожа и старение

В недавнем исследовании, опубликованном в 2019 году (Molecules), ученые пришли к выводу, что полифенолы в Кудинге могут защищать клетки кожи, коллаген и эластин, тем самым предотвращая повреждение кожи у мышей.

Похудание

В исследовании, опубликованном в 2017 году (Nature International Journal of Science), исследователи обнаружили, что кудинг подавляет прибавку в весе у мышей по сравнению с мышами, которых не лечили.Это говорит о том, что кудинг может входить в состав лекарств от ожирения. Авторы считают, что этот эффект является результатом не изменения аппетита, а увеличения расхода энергии, что должно стать предметом дальнейших исследований.

Исследование, проведенное в 2018 году в Эльзевире, также утверждает, что экстракт этанола в Кудинге может уменьшить ожирение и высокий уровень холестерина.

Чай и печень Kuding

В 2017 году исследование, опубликованное в журнале Food & Function Journal, показало, что полисахариды чая Кудинг могут быть полезны для печени.В этом исследовании мыши с высоким содержанием фруктозы вызывали повреждение печени. Когда мышей также кормили кудингом, это показало, что он может облегчить повреждение печени и дисфункцию эндотелия сосудов.

Чай Кудинг и язва

В исследовании 2018 года, опубликованном в журнале Food & Function Journal, у мышей было вызвано повреждение желудка. После лечения мышей полифенолами чая кудинг исследование показало, что кудинг оказывает профилактическое действие при травмах желудка.

Диабет, холестерин и артериальное давление

Чай Кудинг содержит полезные компоненты, включая аминокислоты, полифенолы, флавоноиды, цинк и несколько витаминов.Как народная медицина кудинг ча известна по следующей поговорке «降 三 高» (цзян сан гао), что буквально означает «снизь до трех». Это относится к тому факту, что эта трава может помочь снизить высокий уровень сахара в крови (диабет), высокое кровяное давление и высокий уровень холестерина.

Угри и неприятный запах изо рта

Кроме того, антибактериальные свойства кудинга также делают его популярным и эффективным средством против прыщей и неприятного запаха изо рта.

Плодородие

Эта трава иногда может также помочь улучшить фертильность, но это будет зависеть от индивидуальных условий.Здесь мы можем сделать общие заявления. По этому поводу вам следует проконсультироваться с местным врачом китайской медицины.

Сколько и когда пить чай Кудинг?

Правильное количество Кудинга, которое подойдет вам, действительно дайверы, на человека. Обычно люди начинают с замачивания 2-3 игл Кудинг в горячей воде каждое утро и день. Листья можно снова заварить и употреблять, пока не перестанет аромат. Если у вас нет подходящих инструментов, например кружки для заварки, чай может стать горьким.Просто добавьте еще воды, чтобы уменьшить горечь.

Как только некоторые симптомы уменьшатся, можно уменьшить потребление, приготовив кудинг-ча только один раз в день (утром или днем) в профилактических целях.

Побочные эффекты чая Кудинг

Этот травяной напиток является эффективным китайским лекарством и в чистом виде обычно считается безопасным, но следует учитывать несколько побочных эффектов чая кудинг:

Беременность

Поскольку кудинг является охлаждающей травой, его следует избегать во время беременности и в период кормления грудью.

Кофеин

Этой травы следует избегать, если вы очень чувствительны к кофеину (хотя она содержит кофеин в минимальных количествах, что даже меньше, чем в обычном чае).

Другое

  • следует избегать людям, страдающим пониженным давлением.
  • следует избегать за 1 месяц до и после операции.
  • Вышеупомянутое, в основном, относится к чистой ку-динг-ча. На рынке есть некоторые продукты кудинга, смешанные с другими ингредиентами.Для этого вам нужно внимательно прочитать упаковку.

Экстракт чая Кудинг

предотвращает метаболические нарушения, вызванные диетой с высоким содержанием жиров, у мышей C57BL / 6 через β-антагонизм X-рецепторов печени (LXR)

Введение

Ожирение является мировой проблемой, и его распространенность быстро растет [1]. Ожирение вызвано накоплением избыточных калорий в виде триглицеридов в жировой ткани и аномально в других тканях [2], что связано с инсулинорезистентностью, диабетом 2 типа, гипертонией, гиперлипидемией, сердечно-сосудистыми заболеваниями, инсультом и неалкогольным стеатогепатитом [3] , [4].Предотвращение и лечение ожирения принесут большую пользу пациентам с этим заболеванием. В настоящее время существует только один препарат, одобренный Управлением по контролю за продуктами и лекарствами (Орлистат) для длительного использования при лечении ожирения. Поэтому срочно требуются новые терапевтические подходы к лечению ожирения [3].

Рецепторы Х печени (LXR) являются членами семейства ядерных рецепторов факторов транскрипции. Были идентифицированы две изоформы LXR, LXRα и LXRβ, и они являются важными регуляторами гомеостаза липидов и холестерина.Мыши с нокаутом LXRα здоровы, если их кормят диетой с низким содержанием жиров. Однако у мышей с нокаутом LXRα вырабатывается высокий уровень холестерина в печени и увеличивается жировая прослойка печени при питании диетой с высоким содержанием жиров [5]. Мыши с нокаутом LXRβ не подвержены влиянию диеты с высоким содержанием жиров, что позволяет предположить, что LXRα и LXRβ играют разные роли [6].

LXR являются потенциальными мишенями для лечения ожирения, дислипидемии и атеросклероза. Предыдущая работа показала, что синтетический агонист LXR GW3965 снижает уровень холестерина как в сыворотке, так и в печени, подавляет развитие атеросклероза на моделях мышей [7], [8] и улучшает толерантность к глюкозе у мышей с ожирением, вызванным диетой, и у мышей, устойчивых к инсулину, за счет регулирующие гены, участвующие в метаболизме глюкозы в печени и жировой ткани [9].Однако GW3965 увеличивает уровень триглицеридов в плазме и печени мышей. С другой стороны, антагонисты LXR, такие как 5α, 6α-эпоксихолестерин-3-сульфат, блокируют образование бляшек атеросклероза, подавляя функцию LXR [10]. Разработка новых сильнодействующих и эффективных агонистов и антагонистов LXR без побочных эффектов может быть полезной для клинического использования.

Зеленый чай и чай кудинг — два самых популярных напитка в Китае. Зеленый чай хорошо изучен на предмет его различных преимуществ для здоровья, но данных о биологической активности горького чая мало.Чай Кудин использовался в Китае более 2000 лет в качестве напитка. В традиционной китайской медицине чай кудинг также используется в формулах для лечения ожирения, гипертонии, сердечно-сосудистых заболеваний, гиперлипидемии и различных других заболеваний. Недавно несколько клинических исследований были сосредоточены на его влиянии на снижение липидов, снижение массы тела и снижение уровня глюкозы в крови у пациентов с метаболическими синдромами. Исследования на животных показали, что фенольные компоненты и фенилэтаноидные гликозиды чая кудинг обладают значительной антиоксидантной активностью in vitro [11], [12].Кроме того, чай кудинг также значительно снижает окклюзию и реперфузию средней мозговой артерии (MCAO / реперфузия), вызывает инфаркт и неврологический дефицит и потерю нервных клеток, а также ингибирует фосфорилирование митоген-активированной протеинкиназы и циклооксигеназы-2. Он также увеличивает уровни антиапоптотического белка в головном мозге крыс с MCAO / реперфузией [13]. Общие сапонины из чая ilex kuding улучшают аномальные гемореологические параметры у мышей ApoE — / — , вызванные диетой с высоким содержанием жиров [14].Тритерпеноидные сапонины из листьев чая ilex kuding ингибируют индуцированное ЛПНП образование пенистых клеток и снижают внутриклеточное содержание общего холестерина и триглицеридов [15]. Однако убедительных экспериментальных данных, подтверждающих влияние чая кудинг на ожирение и гиперлипидемию, нет. Здесь мы показываем, что экстракты чая кудинг предотвращают развитие ожирения, гиперлипидемии и толерантности к глюкозе у мышей C57BL / 6, получавших диету с высоким содержанием жиров, и ингибируют трансактивность LXRβ.

Материалы и методы

Анализ отпечатков пальцев с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой (ОФ-ВЭЖХ)

Для анализа профилей отпечатков пальцев ЭК (5 мг) растворяли в метаноле (1 мл).Отфильтрованные экстракты анализировали с использованием системы жидкостного хроматографа Agilent 1200 с УФ-детектором при λ max 270 нм. Хроматографическое разделение выполняли на обращенно-фазовой колонке Discovery C-18 (250 × 4,6 мм, 5 мкм) с вводимым объемом 10 мкл метанола (в качестве растворителя A) и воды (в качестве растворителя B). Градиент был установлен следующим образом: 0 ~ 10 мин, 5% B; 20 мин, 30% B; 25 мин, 50% B; 40 мин, 90% B; 45 мин, 95% B (скорость потока 1 мл / мин).

Урсоловая кислота и лупеол (чистота> 98%) были приобретены в Шанхайском научно-исследовательском центре стандартизации китайских лекарственных средств (Шанхай, Китай).Соединения контролировали при 210 нм с использованием колонки Discovery C18 с метанолом или ацетонитрилом (в качестве растворителя A) и водой, содержащей 0,1% фосфорной кислоты (в качестве растворителя B) в подвижной фазе, при скорости потока 1,0 мл / мин при 30 ° C. на 60 мин. Чтобы обнаружить урсоловую кислоту, градиентное элюирование ВЭЖХ составляло 48% A (ацетонитрил) и 52% B (фосфорная кислота, pH 2,5) при 0 мин, 75% A и 25% B через 40 мин, 85% A и 15% B. в 60 мин. Постоянную подвижную фазу метанол: вода (98 ± 2, об. / Об.) Использовали для обнаружения лупеола.

Культура клеток

Клетки 3T3-L1 выращивали и поддерживали в среде DMEM, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки (Hyclone, Logan, UT). Для дифференцировки адипоцитов клетки выращивали в 12-луночных планшетах до полного слияния в течение 2 дней, а затем среду для дифференцировки (DM), содержащую 10 мкг / мл инсулина (Sigma, Сент-Луис, Миссури), 0,5 мкМ дексаметазона (Sigma, Сент-Луис). , Миссури) и 0,8 мМ изобутилметилксантина (IBMX, Sigma, Сент-Луис, Миссури) добавляли к культуре. Через 4 дня среду заменяли на DMEM с 10% фетальной бычьей сывороткой для дифференциации при 37 ° C в 10% CO 2 .ЭК растворяли в ДМСО и добавляли к среде в указанных концентрациях. ДМСО добавляли к клеткам в качестве необработанного контроля.

Окрашивание масляным красным О

Клетки дважды промывали PBS, фиксировали 10% формалином при комнатной температуре в течение 10 минут, а затем окрашивали масляным красным О (Sigma, Сент-Луис, Миссури) при 60 ° C в течение 10 минут. минут. Затем были сделаны снимки с помощью микроскопа Olympus (Токио, Япония).

Количественная ПЦР в реальном времени

Тотальную РНК экстрагировали с использованием спин-колонки (Qiagen, Hilden, Германия) в соответствии с инструкциями производителя, и РНК обрабатывали ДНКазой I для удаления загрязнения геномной ДНК.Первая цепь кДНК была синтезирована с использованием набора для синтеза кДНК (Fermentas, Madison, WI), а уровни экспрессии генов были проанализированы с помощью количественной ОТ-ПЦР в реальном времени с использованием системы ABI Stepone Plus Real Time PCR (Applied Biosystems, Карлсбад, Калифорния) . Праймеры, использованные в экспериментах, показаны на. Уровни мРНК всех генов нормализовали с использованием β-актина в качестве внутреннего контроля.

Таблица 1

Последовательности праймеров, используемых в ПЦР в реальном времени.

Gene Прямой праймер Обратный праймер
β-Актин TGTCCACCTTCCAGCAGATGT AGCTCAGTAACAGTCCGCCTAGA
LXRα GAGTGTCGACTTCGCAAATGC CCTCTTCTTGCCGCTTCAGT
LXRβ CAGGCTTGCAGGTGGAATTC ATGGCGATAAGCAAGGCATACT
ABCA1 GGCAATGAGTGTGCCAGAGTTA TAGTCACATGTGGCACCGTTTT
ABCG1 TCCCCACCTGTAAGTAATTGCA TCGGACCCTTATCATTCTCTACAGA
ApoE GAACCGCTTCTGGGATTACCT TCAGTGCCGTCAGTTCTTGTG
Cyp7a1 GTGGTAGTGAGCTGTTGCATATGG CACAGCCCAGGTATGGAATCA
SREBP1 GGCTATTCCGTGAACATCTCCTA ATCCAAGGGCATCTGAGAACTC
FAS CTGAGATCCCAGCACTTCTTGA GCCTCCGAAGCCAAATGAG
LPL ATCGGAGAACTGCTCATGATGA CGGATCCTCTCGATGACGAA
C / EBPβ GGGGTTGTTGATGTTTTTGG CGAAACGGAAAAGGTTCTCA
PPARα AGGCTGTAAGGGCTTCTTTCG GGCATTTGTTCCGGTTCTTC
PPARγ CGCTGATGCACTGCCTATGA AGAGGTCCACAGAGCTGATTCC
PPARβ / δ AGTGACCTGGCGCTCTTCAT CGCAGAATGGTGTCCTGGAT
C / EBPα CGCAAGAGCCGAGATAAAGC CACGGCTCAGCTGTTCCA
AP2 CATGGCCAAGCCCAACAT CGCCCAGTTTGAAGGAAATC
ACC GAATCTCCTGGTGACAATGCTTATT GGTCTTGCTGAGTTGGGTTAGCT
ACO CAGCACTGGTCTCCGTCATG CTCCGGACTACCATCCAAGATG
УЦП-2 GGGCACTGCAAGCATGTGTA TCAGATTCCTGGGCAAGTCACT

Трансфекция культивируемых клеток и репортерные анализы

Репортерный анализ проводили, как описано ранее [16], [17].Вкратце, клетки 293Т выращивали в 24-луночном планшете для трансфекции. Экспрессионная плазмида pCMXGal-рецептор, активируемый пролифератором пероксисом мыши (PPAR) α, γ, β / δ, LXRα и LXRβ-LBD, и репортерный вектор Gal4 Mh200 × 4-TK-Luc были подарками доктора Р. Эванса [18] и д-р Саез [19], [20]. Когда плазмиды экспрессии котрансфицировали репортерной конструкцией, 1 мкг соответствующей плазмиды объединяли с 1 мкг репортерной плазмиды и 0,1 мкг репортера pREP7 (реллина люцифераза) для нормализации эффективности трансфекции.Все трансфекции включали 2,1 мкг общих плазмид и 5 мкл FuGENE HD (Roche, Германия) на мл DMEM. Раствор для трансфекции добавляли к клеткам 293T на 24 часа, а затем удаляли и добавляли 10 мкМ PPARγ, PPARα, PPARβ / δ и агониста LXR розиглитазона, WY14643, GW0742 и GW3965 или EK перед сбором клеток для определения активности люциферазы. 24 часа спустя. Анализы репортера люциферазы проводили с использованием системы анализа репортера двойной люциферазы (Promega, Сан-Луис-Обиспо, Калифорния), и эффективность трансфекции нормализовали в соответствии с активностью люциферазы реллина.Все эксперименты по трансфекции независимо выполняли трижды.

Животные и химический анализ сыворотки

Протоколы на животных, использованные в этом исследовании, были одобрены Шанхайским университетом традиционной китайской медицины для исследований на животных (утвержденный Nember: 11002). Самки мышей C57BL / 6 были приобретены в лаборатории SLAC (Шанхай, Китай). Всех мышей содержали при контролируемой температуре (22–23 ° C) и при 12-часовом световом цикле и 12-часовом темноте. Для профилактического эксперимента мышей C57BL / 6 аналогичного возраста и веса тела случайным образом разделили на разные группы и затем поместили на диету с высоким содержанием жиров (60% калорий, полученных из жира, Research Diets, Нью-Брансуик, Нью-Джерси; D12492) или на диете с высоким содержанием жиров, смешанной с 0.05% EK, или на низкокалорийной диете в качестве эквивалентной контрольной диеты (10% калорий, полученных из жиров, Research Diets; D12450B). Исследование диеты было начато в возрасте 6 недель и продолжалось в течение 11 недель. Для терапевтического эксперимента мышей помещали на диету с высоким содержанием жиров на 3 месяца, а затем мышей с ожирением группировали случайным образом. EK вводили через желудочный зонд в течение 2 недель в дозе 50 мг / день / кг (HF + EK), в то время как контрольным мышам давали воду через желудочный зонд (HF). Нормальных контрольных мышей содержали на обычной диете в течение всего эксперимента (Chow).Двадцать четыре часа приема пищи измеряли путем регистрации разницы в весе между кормом, помещенным в клетку, и оставшимся по истечении 24 часов как в обработанных группах, так и в контроле. Экспериментальные диеты не привели к каким-либо изменениям в суточном потреблении пищи по сравнению с контролем. Уровни триглицеридов (TG) в сыворотке крови, общего холестерина (TC), холестерина HDL (HDL-c) и холестерина LDL (LDL-c) исследовали с использованием автоматического анализатора Hitachi 7020 (Hitachi, Токио, Япония) с 100 мкл сердечной крови. сыворотка.

Анализ содержания липидов в печени и кале

Образцы печени взвешивали и гомогенизировали в буфере для лизиса тканей (20 мМ Трис · HCl pH 7,5, 150 мМ NaCl, 1% тритон) и экстрагировали равным объемом хлороформа. Слои хлороформа сушили и растворяли в изопропиловом спирте для измерения уровней липидов, как описано выше. Фекальные липиды также экстрагировали и измеряли, как описано выше.

Окрашивание гематоксилином и эозином (H&E)

Для окрашивания H&E ткань фиксировали в 10% формальдегиде, заливали в состав ОКТ и разрезали на 10 мкм срез в соответствии со стандартным протоколом.Срезы окрашивали гематоксилином и эозином и исследовали под световым микроскопом.

Растровая электронная микроскопия

Растровая электронная микроскопия использовалась для исследования структуры жировой ткани в соответствии с ранее описанными протоколами [21]. Изображения были получены с помощью растрового электронного микроскопа Philip XL-30.

Тест на внутрибрюшинную толерантность к глюкозе

После 2 недель лечения мышей C57BL / 6 не кормили в течение ночи в течение 12 часов. Образцы крови собирали из хвостовой вены для определения исходных значений глюкозы (0 минут) перед инъекцией глюкозы (1 г / кг веса тела).Дополнительные образцы крови собирали через равные промежутки времени (15, 30, 60 и 90 минут) для измерения глюкозы.

Статистический анализ

Анализ данных проводился с использованием статистической программы SPSS12.0 для Windows. Все данные были представлены как средние значения ± стандартная ошибка. Статистический анализ был выполнен с помощью одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA). Различия считались достоверными при P <0,05.

Результаты

Профилирование EK по отпечатку пальца

Для анализа компонентов этанольного экстракта чая кудинг мы проанализировали отпечаток EK с помощью ВЭЖХ.На рисунке S1A показано, что EK содержит несколько пиков, согласующихся с предыдущими выводами. Далее мы сравнили элементы ЭК с известными соединениями урсоловую кислоту и лупеол. Рисунок S1B показывает, что существует пик поглощения на 41,147 мин времени удерживания, который совпадает с пиком урсоловой кислоты (Рисунок S1C). Точно так же пик ЭК при времени удерживания 17,379 мин (фигура S1D) идентичен лупеолу (фигура S1E). Эти результаты согласуются с предыдущим отчетом [22].

EK ингибирует дифференцировку адипоцитов 3T3-L1

Поскольку чай кудинг использовался для профилактики и лечения ожирения и гиперлипидемии, мы наблюдали эффекты EK на дифференцировку адипоцитов 3T3-L1.Мы использовали инсулин, дексаметазон и изобутилметилксантин (среда для дифференцировки, DM), чтобы вызвать дифференцировку преадипоцитов 3T3-L1. Во время индукции СД в среду добавляли ЭК с 0 по 6 день дифференцировки. Результаты показали, что этанольный экстракт чая кудинг значительно ингибировал дифференцировку адипоцитов 3T3-L1, тогда как водный экстракт чая кудинг не влиял на дифференцировку адипоцитов 3T3-L1 (), что указывает на потенциальный агент для лечения ожирения и дислипидемии. могут быть жирорастворимые компоненты.В результате мы использовали этанольный экстракт в следующих экспериментах.

Этаноловый экстракт чая кудинг ингибирует дифференцировку адипоцитов 3T3-L1.

Водный экстракт и этанольный экстракт добавляли в среду в концентрации 20 мкг / мл. ДМСО использовали в качестве контроля транспортного средства. Клетки окрашивали масляным красным О на 6 день дифференцировки. GM: питательная среда; DM: среда дифференциации.

EK ингибирует более позднюю стадию дифференцировки адипоцитов 3T3-L1

Дифференцировка адипоцитов 3T3-L1 включает два этапа: 4-дневная индукция и 5-7-дневная дифференцировка, оба из которых контролируются различными молекулярными событиями [23], [24], активация фактора транскрипции и экспрессия липогенного гена соответственно.Чтобы проверить, какой процесс дифференцировки адипоцитов ингибирует ЭК, ​​ЭК добавляли в культуральную среду на разных этапах. Когда EK добавлялся во время индукции и удалялся во время дифференцировки, дифференцировка явно не изменялась (). Интересно, что когда EK добавляли после завершения индукции, дифференцировка значительно подавлялась (), указывая на то, что EK может нарушать более поздние стадии процессов дифференцировки адипоцитов 3T3-L1.

EK ингибирует дифференцировку адипоцитов 3T3-L1, индуцированную СД.

(A): EK использовали в начале индукции DM клеток 3T3-L1 и удаляли во время дифференцировки. (B): ЭК использовался только во время дифференцировки клеток 3T3-L1. Клетки окрашивали масляным красным О на 6 день дифференцировки. (C): результаты ОТ-ПЦР в реальном времени уровней экспрессии гена в адипоцитах 3T3-L1. Клетку дифференцировали в течение 6 дней, а затем клетку обрабатывали EK в концентрации 20 мкг / мл в течение 24 часов. DM: среда дифференциации. β-актин использовали в качестве внутреннего контроля.Данные представлены как средние значения ± стандартная ошибка для 4 процедур. * Р <0,05.

Чтобы подтвердить это, была проведена количественная ПЦР для проверки изменений экспрессии генов родственных генов в адипоцитах 3T3-L1, обработанных EK. Результаты показали, что ЭК значительно ингибирует экспрессию маркера адипоцитов PPARγ и aP2. Экспрессия синтазы жирных кислот (FAS) также снижалась после лечения EK. Однако лечение ЭК не изменило экспрессию генов АСС, CD36 и UCP2 ().

EK блокирует ожирение и гиперлипидемию, вызванное диетой с высоким содержанием жиров, у мышей C57BL / 6

Далее мы исследовали влияние EK на увеличение массы тела, вызванное диетой с высоким содержанием жиров, у мышей C57BL / 6.После 5 недель лечения масса тела мышей, получавших диету с высоким содержанием жиров, значительно увеличилась по сравнению с массой тела мышей, получавших стандартную диету (кормление). При добавлении EK набор массы тела был намного меньше, чем у контрольных мышей HF (). Поскольку подавление увеличения массы тела может быть вызвано меньшим количеством потребляемой пищи, мы исследовали количество потребляемой пищи у мышей. EK не подавлял потребление пищи по сравнению с таковым у контрольных мышей HF (), указывая на то, что снижение массы тела у мышей, получавших EK, не было результатом более низкого потребления калорий.Затем мы проверили содержание ТГ в кале, чтобы оценить, ингибирует ли ЭК абсорбцию липидов в кишечнике. Результаты показали, что лечение ЭК не повлияло на содержание ТГ в кале (), что позволяет предположить, что роль ЭК в блокировании увеличения массы тела не является результатом ингибирования всасывания липидов. Затем мы исследовали массу адипоцитов с помощью сканирующего электронного микроскопа. Размер как белых адипоцитов, так и коричневых адипоцитов был значительно уменьшен по сравнению с контрольными адипоцитами при диете HF (), что указывает на то, что EK защищает от индуцированного HF увеличения жировой массы.

EK улучшает метаболические нарушения у мышей C57BL / 6 с ожирением, вызванным диетой с высоким содержанием жиров.

(A): Увеличение массы тела. (B): Количество потребляемой пищи. (C): Содержание ТГ в кале. (D): изображения белых и коричневых адипоцитов под растровым электронным микроскопом. (E): Уровни общего холестерина (TC), триглицеридов (TG), холестерина липопротеинов низкой плотности (LDL-c) и холестерина липопротеинов высокой плотности (HDL-c) в сыворотке крови. (F): Влияние EK на толерантность к глюкозе у мышей, получавших HFD, как определено тестом на толерантность к глюкозе (GTT).Н.Ш .: Никакого значения. Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка. N = 7 для всех групп. * Р <0,05.

Ожирение тесно связано с гиперлипидемией и инсулинорезистентностью, поэтому мы проверили уровень липидов сыворотки и уровень глюкозы в крови натощак на мышах. Анализ липидов сыворотки показал, что лечение ЭК привело к снижению уровней LDL-c в условиях диеты HF, но уровни TG, TC и HDL-c существенно не изменились (). Уровни глюкозы натощак были ниже, чем у контрольных мышей HF (0 мин). Затем мы исследовали, может ли лечение ЭК повлиять на толерантность к глюкозе, используя тест толерантности к глюкозе.Уровни глюкозы в крови измеряли с интервалами 15, 30, 60 и 90 минут после внутрибрюшинных инъекций глюкозы 1 г / кг. Как показано на фиг.3, уровни глюкозы у мышей, получавших HF-диету, были заметно выше, чем у мышей, получавших диету. Лечение EK значительно снижало уровни глюкозы во все моменты времени, предполагая, что EK улучшает толерантность к глюкозе у мышей C57BL / 6, получавших диету с HF.

EK предотвращает накопление липидов в печени мышей C57BL / 6

Чтобы оценить влияние EK на стеатоз печени, вызванный диетой с высоким содержанием жиров, мы исследовали содержание жира и липидный профиль в печени мышей, получавших EK.Окрашивание HE показало, что мыши, получавшие диету с высоким содержанием жиров в течение 5 недель, имели морфологию тканей гепатоцитов, аналогичную мышам, получавшим стандартную диету (). Окрашивание масляным красным О показало, что липиды накапливались в печени мышей HF по сравнению с таковыми у мышей контрольной группы (), и что обработка EK заметно предотвращала накопление липидов в печени (). Для подтверждения этих результатов было проанализировано содержание ТГ и ТС в печени. Уровни TG у мышей, получавших HF-диету, были заметно выше, чем у контрольных мышей, тогда как лечение EK значительно предотвращало накопление TG в печени, вызванное диетой с высоким содержанием жиров ().Общее содержание ОХ в печени достоверно не изменилось во всех группах (). Результаты показывают, что ЭК может предотвращать накопление липидов и блокировать развитие стеатоза печени, вызванного диетой с высоким содержанием жиров у мышей.

EK улучшает накопление липидов в печени мышей C57BL / 6, индуцированных диетой с высоким содержанием жиров.

(A-C): окрашивание H&E (× 200) печени из стандартной диеты (A), диеты HF (B) и мышей HF + EK (C). (D-F): Окрашивание масляным красным О (× 400) срезов печени из стандартной диеты (D), диеты HF (E) и мышей HF + EK (F).Срезы контрастировали гематоксилином. Приведены количественные результаты по содержанию ТГ (G) и TC (H) в печени. Мышей кормили диетой с высоким содержанием жиров в течение 5 недель, и EK измельчали ​​и добавляли в рацион в концентрации 0,05% (вес / вес). Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка. N = 7 для всех групп. * Р <0,05.

EK улучшает метаболические нарушения у тучных мышей

Затем мы проверили, может ли EK влиять на метаболические нарушения у тучных мышей. После 3 месяцев кормления диетой с высоким содержанием жиров у мышей C57BL / 6 развилась высокая масса тела, уровень липидов сыворотки и уровень глюкозы в крови.Затем мышей разделили на две группы и лечили 50 мг / кг / день ЭК в течение 2 недель. Лечение ЭК не привело к значительному снижению массы тела (), и количество потребляемой пищи также не изменилось (). Однако лечение ЭК привело к уменьшению размера белых адипоцитов у мышей с ожирением по сравнению с таковыми у контрольных мышей ().

EK улучшает метаболические нарушения у мышей C57BL / 6 с ожирением.

(A): Масса тела до и после лечения. (B): Количество потребляемой пищи. (C): изображения белых адипоцитов с использованием сканирующей электронной микроскопии.(D): Уровни общего холестерина (TC), триглицеридов (TG), холестерина липопротеинов низкой плотности (LDL-c) и холестерина липопротеидов высокой плотности (HDL-c) в сыворотке крови. (E): толерантность к глюкозе у мышей, получавших HFD, как определено тестом на толерантность к глюкозе (GTT). Мышам вводили глюкозу в дозе 1 мг / кг для внутрибрюшинного теста на толерантность к глюкозе, и уровни глюкозы проверяли с регулярными интервалами в 15, 30, 60 и 90 минут. Н.Ш .: Никакого значения. Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка. N = 7 для всех групп. * Р <0.05.

Анализ липидов сыворотки показал, что уровни TC, TG, LDL-c и HDL-c у тучных мышей были значительно увеличены по сравнению с таковыми у мышей, получавших стандартную диету. Лечение ЭК заметно снизило содержание ТГ, но не изменило уровни общего холестерина, ЛПНП и ЛПВП в сыворотке (), что свидетельствует о различных эффектах ЭК на липидный профиль при профилактике и лечении мышей с ожирением.

Кроме того, мы проверили уровни глюкозы в крови натощак и толерантность к глюкозе у мышей, получавших EK. показывает, что уровни глюкозы натощак у мышей, получавших EK, были снижены по сравнению с таковыми у необработанных мышей, а уровни глюкозы также улучшились через 30 и 60 минут после внутрибрюшинных инъекций глюкозы, предполагая, что EK может улучшить толерантность к глюкозе.Взятые вместе, эти результаты показывают, что ЭК может облегчить метаболические нарушения у мышей с ожирением, вызванным диетой.

EK ингибирует экспрессию липогенного гена в печени мыши

Чтобы проверить эффекты EK in vivo, мы исследовали экспрессию гена в печени мышей, получавших EK. Как показано на фиг.1, уровни мРНК факторов транскрипции, таких как PPARγ, CEB / Pα, и липогенных генов, таких как ацил-CoA-оксидаза (ACO), ацетил-кофермент A-карбоксилаза (ACC) и aP2, были снижены в печени, обработанной EK, что позволяет предположить, что на экспрессию липогенных генов влияет лечение ЭК.

EK подавляет экспрессию липогенных генов в печени мышей.

Дифференцировка адипоцитов 3T3-L1, индуцированная СД. Результаты ОТ-ПЦР в реальном времени уровней экспрессии генов PPARγ, PPARα, PPARδ / ß, C / EBPα, C / EBPβ, UCP2, ACO, ACC и aP2 в печени мышей, обработанных EK, сравнивали с таковыми у контрольных мышей HF из профилактическое лечение. β-актин использовали в качестве внутреннего контроля. Данные представлены как средние значения ± стандартная ошибка для 5 мышей на группу. * Р <0,05.

Чай Kuding содержит лиганд антагониста LXRβ

Факторы транскрипции ядерных рецепторов являются важными регуляторами гомеостаза липидов и глюкозы.Основываясь на подавлении ожирения и гиперлипидемии, мы проверили, действует ли ЭК на PPARγ, α, β / δ и LXRα и LXRβ, которые являются лекарственными мишенями для метаболических синдромов [25], [26]. Мы не наблюдали ингибирующих эффектов ЭК на трансактивность PPARγ, α, β / δ (данные не показаны) или LXRα (). Однако трансактивность LXRβ, индуцированная GW3965, значительно ингибировалась EK дозозависимым образом (), что позволяет предположить, что EK может содержать лиганд антагониста LXRβ.

EK Анализ активности транскрипции ядерных рецепторов.

(A, B): транс-активности LXRα и LXRβ. Плазмиды экспрессии pCMXGal-мышиный LXRα и LXRβ-LBD котрансфицировали репортерным вектором Gal4 Mh200 × 4-TK-Luc в клетку 293T в течение 24 часов. Затем клетку обрабатывали 10 мкМ агониста LXR GW3965 и / или 5–20 мкг / мл ЭК в течение еще 24 часов. ДМСО использовали в качестве контроля транспортного средства. Относительные активности люциферазы измеряли путем сравнения с активностями люциферазы реллина. Результаты представляют как минимум три независимых эксперимента, а данные представлены как средние значения ± стандартная ошибка среднего.* Р <0,05. (C) Уровни экспрессии генов-мишеней LXR в печени мышей, обработанных EK, сравнивали с таковыми у контрольных мышей HF, получавших профилактическое лечение, и β-актин использовали в качестве внутреннего контроля. Данные представлены как средние значения ± стандартная ошибка для 5 мышей на группу. * Р <0,05.

LXR регулирует метаболизм липидов и глюкозы посредством активации экспрессии набора целевых генов, включая синтазу жирных кислот (FAS), белок-1c, связывающий регуляторный элемент стерола (SREBP-1c), липопротеинлипазу (LPL), ATP- переносчик связывающей кассеты A1 (ABCA1), переносчик АТФ-связывающей кассеты G1 (ABCG1) и сам LXR [27].Затем мы оценили эффект in vivo EK на экспрессию генов, связанных с активностью LXRβ, путем анализа уровней экспрессии мРНК в тканях печени, выделенных от мышей, получавших EK, и контрольных мышей HF. Уровни LXRα / β, ApoE, ABCA1 и SREBP1 также подавлялись в печени мышей, получавших EK (), что указывает на то, что некоторые компоненты чая кудинг могут действовать как антагонисты LXRβ.

Обсуждение

В этом исследовании мы приводим доказательства того, что чай кудинг может предотвратить и облегчить метаболические нарушения у мышей, получавших диету с высоким содержанием жиров.Наши результаты ясно показали, что лечение ЭК блокирует увеличение массы тела, гиперлипидемию и инсулинорезистентность у мышей, вызванных диетой с сердечной недостаточностью. Химические и гистологические данные показали, что лечение ЭК привело к значительному снижению накопления липидов в печени мышей DIO, предполагая, что ЭК оказывает защитное действие против развития метаболических нарушений, таких как ожирение, дислипидемия, диабет и стеатоз печени у мышей. Мы также обнаружили, что ЭК может улучшить метаболические нарушения у мышей с ожирением.Кроме того, мы определили, что ЭК избирательно подавляет трансактивность фактора транскрипции ядерного рецептора LXRβ. Таким образом, результаты этого исследования предполагают, что защитный эффект ЭК против метаболических нарушений, вероятно, связан с его ингибирующим действием на LXRβ.

Чай Кудин — популярный напиток в Китае. Как и зеленый чай, чай кудинг используется в медицинских составах для облегчения нарушений обмена веществ, таких как ожирение. В последние годы сообщалось, что чай кудинг обладает различными биологическими эффектами [28].Было показано, что чай кудинг снижает уровни ТГ, ОХ и ЛПНП в сыворотке у пациентов с дислипидемией [29], [30] и улучшает кровяное давление у пациентов с гипертонией I фазы, а также предотвращает прогрессирование атеросклероза [31], [32].

У мышей C57BL / 6 могут развиваться метаболические синдромы при употреблении диеты с высоким содержанием жиров. В текущем исследовании у мышей, получавших диету с высоким содержанием жиров в течение 5 недель, были значительно увеличены масса тела, уровни TC, TG, LDL-c и TG в печени, толерантность к глюкозе. Лечение ЭК привело к значительному снижению прибавки в весе и ОС в сыворотке, а также к улучшению толерантности к глюкозе и накоплению липидов в печени, что позволяет предположить, что ЭК может предотвратить развитие метаболических синдромов.

Увеличение веса является следствием увеличения массы и количества адипоцитов, вызванного избыточными калориями, хранящимися в виде ТГ [33], в то время как потеря веса обычно вызывается уменьшением массы и количества адипоцитов за счет подавления потребления энергии или чрезмерного сжигания избытка. калорий. Конкретные механизмы, с помощью которых ЭК защищает от увеличения веса, еще предстоит определить. Есть несколько вероятных возможностей, основанных на данных, полученных в результате наших исследований. Поскольку сокращение потребления пищи может значительно повлиять на массу тела, уровень глюкозы и липидов в крови, мы рассмотрели возможность того, что эффект ЭК может быть результатом уменьшения потребления пищи.Однако мы не наблюдали разницы в количестве потребляемой пищи между мышами, получавшими HF, и мышами, получавшими EK. Сообщалось, что зеленый чай подавляет всасывание липидов в кишечнике [34] — [36]. Однако наши данные показали, что чай кудинг не оказывает ингибирующего действия на всасывание липидов. Таким образом, вероятно, что снижение уровня липидов и массы тела не может быть связано со снижением всасывания липидов на кишечном уровне. Взятые вместе, наши данные показывают, что защитные механизмы ЭК против увеличения массы тела не зависят от снижения потребления энергии и всасывания липидов в кишечнике.

В нашем терапевтическом эксперименте у мышей с ожирением, получавших EK, наблюдались более низкие уровни ТГ и глюкозы натощак в сыворотке, чем у контрольных мышей с ожирением. Однако у мышей не наблюдается значительной потери массы тела, снижения общего содержания холестерина или холестерина ЛПНП. Это несоответствие может быть вызвано двумя причинами. Во-первых, было доказано, что удаление лишнего жира намного труднее, чем предотвращение набора жира. Во-вторых, в профилактической терапии мы лечили мышей в течение 5 недель, но мышей лечили только в течение двух недель для терапевтического лечения.Таким образом, результаты настоящего исследования не подтверждают влияние чая кудинг на снижение веса в клинических испытаниях, о которых сообщали предыдущие исследователи. Толерантность к глюкозе улучшилась при профилактическом лечении, но была менее эффективной при терапевтическом лечении. Это может быть результатом уменьшения жировой ткани, поскольку отложение ТГ в клетках отвечает за развитие инсулинорезистентности [37] — [39].

По сравнению с водным экстрактом чая кудинг, этанольный экстракт ингибировал дифференцировку адипоцитов адипоцитов 3T3-L1, что позволяет предположить, что жирорастворимые компоненты чая кудинг могут действовать на адипоциты.Химический анализ показал, что этанольный экстракт чая кудинг содержит 11 основных соединений: лупеол, 11-кето-α-амирин пальмитат, α-амирин пальмитат, 12-урсен-3,28-диол, урсоловую кислоту, 3β-гидроксилюп- 20 (29) -ен-30-ал, 3β-гидрокси-20-оксо-30-норлупан, танацетен, β-ситостерин, н-бегеновая кислота и н-гексакозан [22]. Среди них урсоловая кислота изучена на предмет ее воздействия на метаболические нарушения. Например, урсоловая кислота усиливает связывание PPAR-α с PPRE, регулирует экспрессию генов метаболизма липидов и значительно снижает внутриклеточные концентрации триглицеридов и холестерина в гепатоцитах [40], а также снижает массу тела, висцеральное ожирение, уровни глюкозы в крови и плазме. липидов, а также увеличение лептина в плазме у мышей, получавших диету с высоким содержанием жиров [41] — [43].Сообщалось также, что лупеол снижает уровень глюкозы в крови у экспериментальных животных с диабетом [44], [45]. Однако в экстракте, используемом в текущем исследовании, он содержит только 6,48% урсоловой кислоты (около 1/20 использовалось в предыдущих исследованиях), что позволяет предположить, что урсоловая кислота не единственный эффективный компонент. Активные вещества в чае кудинг должны быть исследованы на предмет их роли при метаболических заболеваниях. Или система кишечной проницаемости может быть использована для выяснения механизма воздействия чая кудинг на адипоцит 3T3L1.

Опубликованные данные о механизме действия чая кудинг ограничены, но исследования показывают, что чай кудинг может улучшить метаболические нарушения с помощью нескольких механизмов.Наши данные предполагают, что чай кудинг может предотвращать метаболические нарушения, избирательно воздействуя на ядерные рецепторы факторов транскрипции LXRβ. Семейство LXR представляет собой активируемые лигандом факторы транскрипции, включая LXRα и LXRβ. LXRα экспрессируется главным образом в печени, жировой ткани и макрофагах, тогда как LXRβ экспрессируется повсеместно [5], [6]. Потенциал LXR в качестве мишени для лекарств при гиперлипидемии, AS, диабете, гипертонии и воспалении был ранее показан [46], [47]. Дальнейшее исследование эффектов EK на мышей с нокаутом LXRβ подтвердит сигнальный путь EK.И, вероятно, это позволит идентифицировать ингибирование LXRβ как терапию метаболических заболеваний in vivo.

Предыдущие исследования показали, что агонисты LXR могут снижать уровни TC в сыворотке, но повышать уровни TG в печени и сыворотке, что исключает агонисты LXR в качестве терапии метаболических заболеваний. Разработка селективных агонистов или антагонистов LXR может избежать нецелевых эффектов [19]. Недавно было подтверждено, что два встречающихся в природе соединения, реин и нарингенин, являются антагонистами LXRα / β и LXRα соответственно, и также было показано, что они обладают свойствами снижения гиперлипидемии [48], [49].Kanaya et al. Сообщили, что белые шампиньоны обладают защитным действием против стеатоза печени за счет ингибирования передачи сигналов LXR [50]. Мы показываем, что ЭК селективно ингибирует трансактивность LXRβ в присутствии агониста LXRβ GW3965, предполагая, что ЭК содержит антагонист LXRβ, который конкурентно связывается с LXRβ. Метаболический эффект ингибирования LXRβ с помощью ЭК также проявляется в экспрессии генов. Экспрессия мРНК LXRβ нацелена на гены, которые контролируют окисление жирных кислот, регулируют синтез жирных кислот и холестерина, такие как ABCA1, ABCG1, LPL и ApoE, и значительно ингибируется в печени и жировой ткани мышей, получавших EK.Идентификация этого специфического лиганда LXRβ может привести к новой терапии метаболических заболеваний.

В заключение мы приводим доказательства того, что ЭК защищает от развития ожирения, гиперлипидемии и инсулинорезистентности у мышей, получавших диету с высоким содержанием жиров. Эти данные свидетельствуют о том, что ЭК можно использовать в качестве потенциальной диетической стратегии для предотвращения метаболических нарушений, таких как ожирение, гиперлипидемия, диабет и атеросклероз. Потенциал использования натуральных пищевых добавок для регулирования массы тела и липидного обмена является привлекательным.Поскольку этот традиционный напиток безопасен и дешев, его следует рассматривать как диетическое средство для лечения метаболических синдромов. Это особенно важно, потому что потеря веса и лечение неалкогольной жировой болезни печени малоэффективны в долгосрочной перспективе. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы определить механизмы, с помощью которых этот компонент защищает от ожирения и связанных с ним симптомов.

Экстракт чая Кудинг предотвращает метаболические нарушения, вызванные диетой с высоким содержанием жиров, у мышей C57BL / 6 через β-антагонизм X-рецепторов печени (LXR)

Введение

Ожирение — проблема во всем мире, и ее распространенность быстро растет [1].Ожирение вызвано накоплением избыточных калорий в виде триглицеридов в жировой ткани и аномально в других тканях [2], что связано с инсулинорезистентностью, диабетом 2 типа, гипертонией, гиперлипидемией, сердечно-сосудистыми заболеваниями, инсультом и неалкогольным стеатогепатитом [3] , [4]. Предотвращение и лечение ожирения принесут большую пользу пациентам с этим заболеванием. В настоящее время существует только один препарат, одобренный Управлением по контролю за продуктами и лекарствами (Орлистат) для длительного использования при лечении ожирения. Поэтому срочно требуются новые терапевтические подходы к лечению ожирения [3].

Рецепторы Х печени (LXR) являются членами семейства ядерных рецепторов факторов транскрипции. Были идентифицированы две изоформы LXR, LXRα и LXRβ, и они являются важными регуляторами гомеостаза липидов и холестерина. Мыши с нокаутом LXRα здоровы, если их кормят диетой с низким содержанием жиров. Однако у мышей с нокаутом LXRα вырабатывается высокий уровень холестерина в печени и увеличивается жировая прослойка печени при питании диетой с высоким содержанием жиров [5]. Мыши с нокаутом LXRβ не подвержены влиянию диеты с высоким содержанием жиров, что позволяет предположить, что LXRα и LXRβ играют разные роли [6].

LXR являются потенциальными мишенями для лечения ожирения, дислипидемии и атеросклероза. Предыдущая работа показала, что синтетический агонист LXR GW3965 снижает уровень холестерина как в сыворотке, так и в печени, подавляет развитие атеросклероза на моделях мышей [7], [8] и улучшает толерантность к глюкозе у мышей с ожирением, вызванным диетой, и у мышей, устойчивых к инсулину, за счет регулирующие гены, участвующие в метаболизме глюкозы в печени и жировой ткани [9]. Однако GW3965 увеличивает уровень триглицеридов в плазме и печени мышей.С другой стороны, антагонисты LXR, такие как 5α, 6α-эпоксихолестерин-3-сульфат, блокируют образование бляшек атеросклероза, подавляя функцию LXR [10]. Разработка новых сильнодействующих и эффективных агонистов и антагонистов LXR без побочных эффектов может быть полезной для клинического использования.

Зеленый чай и чай кудинг — два самых популярных напитка в Китае. Зеленый чай хорошо изучен на предмет его различных преимуществ для здоровья, но данных о биологической активности горького чая мало.Чай Кудин использовался в Китае более 2000 лет в качестве напитка. В традиционной китайской медицине чай кудинг также используется в формулах для лечения ожирения, гипертонии, сердечно-сосудистых заболеваний, гиперлипидемии и различных других заболеваний. Недавно несколько клинических исследований были сосредоточены на его влиянии на снижение липидов, снижение массы тела и снижение уровня глюкозы в крови у пациентов с метаболическими синдромами. Исследования на животных показали, что фенольные компоненты и фенилэтаноидные гликозиды чая кудинг обладают значительной антиоксидантной активностью in vitro [11], [12].Кроме того, чай кудинг также значительно снижает окклюзию и реперфузию средней мозговой артерии (MCAO / реперфузия), вызывает инфаркт и неврологический дефицит и потерю нервных клеток, а также ингибирует фосфорилирование митоген-активированной протеинкиназы и циклооксигеназы-2. Он также увеличивает уровни антиапоптотического белка в головном мозге крыс с MCAO / реперфузией [13]. Общие сапонины из чая ilex kuding улучшают аномальные гемореологические параметры у мышей ApoE — / — , вызванные диетой с высоким содержанием жиров [14].Тритерпеноидные сапонины из листьев чая ilex kuding ингибируют индуцированное ЛПНП образование пенистых клеток и снижают внутриклеточное содержание общего холестерина и триглицеридов [15]. Однако убедительных экспериментальных данных, подтверждающих влияние чая кудинг на ожирение и гиперлипидемию, нет. Здесь мы показываем, что экстракты чая кудинг предотвращают развитие ожирения, гиперлипидемии и толерантности к глюкозе у мышей C57BL / 6, получавших диету с высоким содержанием жиров, и ингибируют трансактивность LXRβ.

Материалы и методы

Анализ отпечатков пальцев с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой (ОФ-ВЭЖХ)

Для анализа профилей отпечатков пальцев ЭК (5 мг) растворяли в метаноле (1 мл).Отфильтрованные экстракты анализировали с использованием системы жидкостного хроматографа Agilent 1200 с УФ-детектором при λ max 270 нм. Хроматографическое разделение выполняли на обращенно-фазовой колонке Discovery C-18 (250 × 4,6 мм, 5 мкм) с вводимым объемом 10 мкл метанола (в качестве растворителя A) и воды (в качестве растворителя B). Градиент был установлен следующим образом: 0 ~ 10 мин, 5% B; 20 мин, 30% B; 25 мин, 50% B; 40 мин, 90% B; 45 мин, 95% B (скорость потока 1 мл / мин).

Урсоловая кислота и лупеол (чистота> 98%) были приобретены в Шанхайском научно-исследовательском центре стандартизации китайских лекарственных средств (Шанхай, Китай).Соединения контролировали при 210 нм с использованием колонки Discovery C18 с метанолом или ацетонитрилом (в качестве растворителя A) и водой, содержащей 0,1% фосфорной кислоты (в качестве растворителя B) в подвижной фазе, при скорости потока 1,0 мл / мин при 30 ° C. на 60 мин. Чтобы обнаружить урсоловую кислоту, градиентное элюирование ВЭЖХ составляло 48% A (ацетонитрил) и 52% B (фосфорная кислота, pH 2,5) при 0 мин, 75% A и 25% B через 40 мин, 85% A и 15% B. в 60 мин. Постоянную подвижную фазу метанол: вода (98 ± 2, об. / Об.) Использовали для обнаружения лупеола.

Культура клеток

Клетки 3T3-L1 выращивали и поддерживали в среде DMEM, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки (Hyclone, Logan, UT). Для дифференцировки адипоцитов клетки выращивали в 12-луночных планшетах до полного слияния в течение 2 дней, а затем среду для дифференцировки (DM), содержащую 10 мкг / мл инсулина (Sigma, Сент-Луис, Миссури), 0,5 мкМ дексаметазона (Sigma, Сент-Луис). , Миссури) и 0,8 мМ изобутилметилксантина (IBMX, Sigma, Сент-Луис, Миссури) добавляли к культуре. Через 4 дня среду заменяли на DMEM с 10% фетальной бычьей сывороткой для дифференциации при 37 ° C в 10% CO 2 .ЭК растворяли в ДМСО и добавляли к среде в указанных концентрациях. ДМСО добавляли к клеткам в качестве необработанного контроля.

Окрашивание масляным красным О

Клетки дважды промывали PBS, фиксировали 10% формалином при комнатной температуре в течение 10 минут, а затем окрашивали масляным красным О (Sigma, Сент-Луис, Миссури) при 60 ° C в течение 10 минут. минут. Затем были сделаны снимки с помощью микроскопа Olympus (Токио, Япония).

Количественная ПЦР в реальном времени

Тотальную РНК экстрагировали с использованием спин-колонки (Qiagen, Hilden, Германия) в соответствии с инструкциями производителя, и РНК обрабатывали ДНКазой I для удаления загрязнения геномной ДНК.Первая цепь кДНК была синтезирована с использованием набора для синтеза кДНК (Fermentas, Madison, WI), а уровни экспрессии генов были проанализированы с помощью количественной ОТ-ПЦР в реальном времени с использованием системы ABI Stepone Plus Real Time PCR (Applied Biosystems, Карлсбад, Калифорния) . Праймеры, использованные в экспериментах, показаны на. Уровни мРНК всех генов нормализовали с использованием β-актина в качестве внутреннего контроля.

Таблица 1

Последовательности праймеров, используемых в ПЦР в реальном времени.

Gene Прямой праймер Обратный праймер
β-Актин TGTCCACCTTCCAGCAGATGT AGCTCAGTAACAGTCCGCCTAGA
LXRα GAGTGTCGACTTCGCAAATGC CCTCTTCTTGCCGCTTCAGT
LXRβ CAGGCTTGCAGGTGGAATTC ATGGCGATAAGCAAGGCATACT
ABCA1 GGCAATGAGTGTGCCAGAGTTA TAGTCACATGTGGCACCGTTTT
ABCG1 TCCCCACCTGTAAGTAATTGCA TCGGACCCTTATCATTCTCTACAGA
ApoE GAACCGCTTCTGGGATTACCT TCAGTGCCGTCAGTTCTTGTG
Cyp7a1 GTGGTAGTGAGCTGTTGCATATGG CACAGCCCAGGTATGGAATCA
SREBP1 GGCTATTCCGTGAACATCTCCTA ATCCAAGGGCATCTGAGAACTC
FAS CTGAGATCCCAGCACTTCTTGA GCCTCCGAAGCCAAATGAG
LPL ATCGGAGAACTGCTCATGATGA CGGATCCTCTCGATGACGAA
C / EBPβ GGGGTTGTTGATGTTTTTGG CGAAACGGAAAAGGTTCTCA
PPARα AGGCTGTAAGGGCTTCTTTCG GGCATTTGTTCCGGTTCTTC
PPARγ CGCTGATGCACTGCCTATGA AGAGGTCCACAGAGCTGATTCC
PPARβ / δ AGTGACCTGGCGCTCTTCAT CGCAGAATGGTGTCCTGGAT
C / EBPα CGCAAGAGCCGAGATAAAGC CACGGCTCAGCTGTTCCA
AP2 CATGGCCAAGCCCAACAT CGCCCAGTTTGAAGGAAATC
ACC GAATCTCCTGGTGACAATGCTTATT GGTCTTGCTGAGTTGGGTTAGCT
ACO CAGCACTGGTCTCCGTCATG CTCCGGACTACCATCCAAGATG
УЦП-2 GGGCACTGCAAGCATGTGTA TCAGATTCCTGGGCAAGTCACT

Трансфекция культивируемых клеток и репортерные анализы

Репортерный анализ проводили, как описано ранее [16], [17].Вкратце, клетки 293Т выращивали в 24-луночном планшете для трансфекции. Экспрессионная плазмида pCMXGal-рецептор, активируемый пролифератором пероксисом мыши (PPAR) α, γ, β / δ, LXRα и LXRβ-LBD, и репортерный вектор Gal4 Mh200 × 4-TK-Luc были подарками доктора Р. Эванса [18] и д-р Саез [19], [20]. Когда плазмиды экспрессии котрансфицировали репортерной конструкцией, 1 мкг соответствующей плазмиды объединяли с 1 мкг репортерной плазмиды и 0,1 мкг репортера pREP7 (реллина люцифераза) для нормализации эффективности трансфекции.Все трансфекции включали 2,1 мкг общих плазмид и 5 мкл FuGENE HD (Roche, Германия) на мл DMEM. Раствор для трансфекции добавляли к клеткам 293T на 24 часа, а затем удаляли и добавляли 10 мкМ PPARγ, PPARα, PPARβ / δ и агониста LXR розиглитазона, WY14643, GW0742 и GW3965 или EK перед сбором клеток для определения активности люциферазы. 24 часа спустя. Анализы репортера люциферазы проводили с использованием системы анализа репортера двойной люциферазы (Promega, Сан-Луис-Обиспо, Калифорния), и эффективность трансфекции нормализовали в соответствии с активностью люциферазы реллина.Все эксперименты по трансфекции независимо выполняли трижды.

Животные и химический анализ сыворотки

Протоколы на животных, использованные в этом исследовании, были одобрены Шанхайским университетом традиционной китайской медицины для исследований на животных (утвержденный Nember: 11002). Самки мышей C57BL / 6 были приобретены в лаборатории SLAC (Шанхай, Китай). Всех мышей содержали при контролируемой температуре (22–23 ° C) и при 12-часовом световом цикле и 12-часовом темноте. Для профилактического эксперимента мышей C57BL / 6 аналогичного возраста и веса тела случайным образом разделили на разные группы и затем поместили на диету с высоким содержанием жиров (60% калорий, полученных из жира, Research Diets, Нью-Брансуик, Нью-Джерси; D12492) или на диете с высоким содержанием жиров, смешанной с 0.05% EK, или на низкокалорийной диете в качестве эквивалентной контрольной диеты (10% калорий, полученных из жиров, Research Diets; D12450B). Исследование диеты было начато в возрасте 6 недель и продолжалось в течение 11 недель. Для терапевтического эксперимента мышей помещали на диету с высоким содержанием жиров на 3 месяца, а затем мышей с ожирением группировали случайным образом. EK вводили через желудочный зонд в течение 2 недель в дозе 50 мг / день / кг (HF + EK), в то время как контрольным мышам давали воду через желудочный зонд (HF). Нормальных контрольных мышей содержали на обычной диете в течение всего эксперимента (Chow).Двадцать четыре часа приема пищи измеряли путем регистрации разницы в весе между кормом, помещенным в клетку, и оставшимся по истечении 24 часов как в обработанных группах, так и в контроле. Экспериментальные диеты не привели к каким-либо изменениям в суточном потреблении пищи по сравнению с контролем. Уровни триглицеридов (TG) в сыворотке крови, общего холестерина (TC), холестерина HDL (HDL-c) и холестерина LDL (LDL-c) исследовали с использованием автоматического анализатора Hitachi 7020 (Hitachi, Токио, Япония) с 100 мкл сердечной крови. сыворотка.

Анализ содержания липидов в печени и кале

Образцы печени взвешивали и гомогенизировали в буфере для лизиса тканей (20 мМ Трис · HCl pH 7,5, 150 мМ NaCl, 1% тритон) и экстрагировали равным объемом хлороформа. Слои хлороформа сушили и растворяли в изопропиловом спирте для измерения уровней липидов, как описано выше. Фекальные липиды также экстрагировали и измеряли, как описано выше.

Окрашивание гематоксилином и эозином (H&E)

Для окрашивания H&E ткань фиксировали в 10% формальдегиде, заливали в состав ОКТ и разрезали на 10 мкм срез в соответствии со стандартным протоколом.Срезы окрашивали гематоксилином и эозином и исследовали под световым микроскопом.

Растровая электронная микроскопия

Растровая электронная микроскопия использовалась для исследования структуры жировой ткани в соответствии с ранее описанными протоколами [21]. Изображения были получены с помощью растрового электронного микроскопа Philip XL-30.

Тест на внутрибрюшинную толерантность к глюкозе

После 2 недель лечения мышей C57BL / 6 не кормили в течение ночи в течение 12 часов. Образцы крови собирали из хвостовой вены для определения исходных значений глюкозы (0 минут) перед инъекцией глюкозы (1 г / кг веса тела).Дополнительные образцы крови собирали через равные промежутки времени (15, 30, 60 и 90 минут) для измерения глюкозы.

Статистический анализ

Анализ данных проводился с использованием статистической программы SPSS12.0 для Windows. Все данные были представлены как средние значения ± стандартная ошибка. Статистический анализ был выполнен с помощью одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA). Различия считались достоверными при P <0,05.

Результаты

Профилирование EK по отпечатку пальца

Для анализа компонентов этанольного экстракта чая кудинг мы проанализировали отпечаток EK с помощью ВЭЖХ.На рисунке S1A показано, что EK содержит несколько пиков, согласующихся с предыдущими выводами. Далее мы сравнили элементы ЭК с известными соединениями урсоловую кислоту и лупеол. Рисунок S1B показывает, что существует пик поглощения на 41,147 мин времени удерживания, который совпадает с пиком урсоловой кислоты (Рисунок S1C). Точно так же пик ЭК при времени удерживания 17,379 мин (фигура S1D) идентичен лупеолу (фигура S1E). Эти результаты согласуются с предыдущим отчетом [22].

EK ингибирует дифференцировку адипоцитов 3T3-L1

Поскольку чай кудинг использовался для профилактики и лечения ожирения и гиперлипидемии, мы наблюдали эффекты EK на дифференцировку адипоцитов 3T3-L1.Мы использовали инсулин, дексаметазон и изобутилметилксантин (среда для дифференцировки, DM), чтобы вызвать дифференцировку преадипоцитов 3T3-L1. Во время индукции СД в среду добавляли ЭК с 0 по 6 день дифференцировки. Результаты показали, что этанольный экстракт чая кудинг значительно ингибировал дифференцировку адипоцитов 3T3-L1, тогда как водный экстракт чая кудинг не влиял на дифференцировку адипоцитов 3T3-L1 (), что указывает на потенциальный агент для лечения ожирения и дислипидемии. могут быть жирорастворимые компоненты.В результате мы использовали этанольный экстракт в следующих экспериментах.

Этаноловый экстракт чая кудинг ингибирует дифференцировку адипоцитов 3T3-L1.

Водный экстракт и этанольный экстракт добавляли в среду в концентрации 20 мкг / мл. ДМСО использовали в качестве контроля транспортного средства. Клетки окрашивали масляным красным О на 6 день дифференцировки. GM: питательная среда; DM: среда дифференциации.

EK ингибирует более позднюю стадию дифференцировки адипоцитов 3T3-L1

Дифференцировка адипоцитов 3T3-L1 включает два этапа: 4-дневная индукция и 5-7-дневная дифференцировка, оба из которых контролируются различными молекулярными событиями [23], [24], активация фактора транскрипции и экспрессия липогенного гена соответственно.Чтобы проверить, какой процесс дифференцировки адипоцитов ингибирует ЭК, ​​ЭК добавляли в культуральную среду на разных этапах. Когда EK добавлялся во время индукции и удалялся во время дифференцировки, дифференцировка явно не изменялась (). Интересно, что когда EK добавляли после завершения индукции, дифференцировка значительно подавлялась (), указывая на то, что EK может нарушать более поздние стадии процессов дифференцировки адипоцитов 3T3-L1.

EK ингибирует дифференцировку адипоцитов 3T3-L1, индуцированную СД.

(A): EK использовали в начале индукции DM клеток 3T3-L1 и удаляли во время дифференцировки. (B): ЭК использовался только во время дифференцировки клеток 3T3-L1. Клетки окрашивали масляным красным О на 6 день дифференцировки. (C): результаты ОТ-ПЦР в реальном времени уровней экспрессии гена в адипоцитах 3T3-L1. Клетку дифференцировали в течение 6 дней, а затем клетку обрабатывали EK в концентрации 20 мкг / мл в течение 24 часов. DM: среда дифференциации. β-актин использовали в качестве внутреннего контроля.Данные представлены как средние значения ± стандартная ошибка для 4 процедур. * Р <0,05.

Чтобы подтвердить это, была проведена количественная ПЦР для проверки изменений экспрессии генов родственных генов в адипоцитах 3T3-L1, обработанных EK. Результаты показали, что ЭК значительно ингибирует экспрессию маркера адипоцитов PPARγ и aP2. Экспрессия синтазы жирных кислот (FAS) также снижалась после лечения EK. Однако лечение ЭК не изменило экспрессию генов АСС, CD36 и UCP2 ().

EK блокирует ожирение и гиперлипидемию, вызванное диетой с высоким содержанием жиров, у мышей C57BL / 6

Далее мы исследовали влияние EK на увеличение массы тела, вызванное диетой с высоким содержанием жиров, у мышей C57BL / 6.После 5 недель лечения масса тела мышей, получавших диету с высоким содержанием жиров, значительно увеличилась по сравнению с массой тела мышей, получавших стандартную диету (кормление). При добавлении EK набор массы тела был намного меньше, чем у контрольных мышей HF (). Поскольку подавление увеличения массы тела может быть вызвано меньшим количеством потребляемой пищи, мы исследовали количество потребляемой пищи у мышей. EK не подавлял потребление пищи по сравнению с таковым у контрольных мышей HF (), указывая на то, что снижение массы тела у мышей, получавших EK, не было результатом более низкого потребления калорий.Затем мы проверили содержание ТГ в кале, чтобы оценить, ингибирует ли ЭК абсорбцию липидов в кишечнике. Результаты показали, что лечение ЭК не повлияло на содержание ТГ в кале (), что позволяет предположить, что роль ЭК в блокировании увеличения массы тела не является результатом ингибирования всасывания липидов. Затем мы исследовали массу адипоцитов с помощью сканирующего электронного микроскопа. Размер как белых адипоцитов, так и коричневых адипоцитов был значительно уменьшен по сравнению с контрольными адипоцитами при диете HF (), что указывает на то, что EK защищает от индуцированного HF увеличения жировой массы.

EK улучшает метаболические нарушения у мышей C57BL / 6 с ожирением, вызванным диетой с высоким содержанием жиров.

(A): Увеличение массы тела. (B): Количество потребляемой пищи. (C): Содержание ТГ в кале. (D): изображения белых и коричневых адипоцитов под растровым электронным микроскопом. (E): Уровни общего холестерина (TC), триглицеридов (TG), холестерина липопротеинов низкой плотности (LDL-c) и холестерина липопротеинов высокой плотности (HDL-c) в сыворотке крови. (F): Влияние EK на толерантность к глюкозе у мышей, получавших HFD, как определено тестом на толерантность к глюкозе (GTT).Н.Ш .: Никакого значения. Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка. N = 7 для всех групп. * Р <0,05.

Ожирение тесно связано с гиперлипидемией и инсулинорезистентностью, поэтому мы проверили уровень липидов сыворотки и уровень глюкозы в крови натощак на мышах. Анализ липидов сыворотки показал, что лечение ЭК привело к снижению уровней LDL-c в условиях диеты HF, но уровни TG, TC и HDL-c существенно не изменились (). Уровни глюкозы натощак были ниже, чем у контрольных мышей HF (0 мин). Затем мы исследовали, может ли лечение ЭК повлиять на толерантность к глюкозе, используя тест толерантности к глюкозе.Уровни глюкозы в крови измеряли с интервалами 15, 30, 60 и 90 минут после внутрибрюшинных инъекций глюкозы 1 г / кг. Как показано на фиг.3, уровни глюкозы у мышей, получавших HF-диету, были заметно выше, чем у мышей, получавших диету. Лечение EK значительно снижало уровни глюкозы во все моменты времени, предполагая, что EK улучшает толерантность к глюкозе у мышей C57BL / 6, получавших диету с HF.

EK предотвращает накопление липидов в печени мышей C57BL / 6

Чтобы оценить влияние EK на стеатоз печени, вызванный диетой с высоким содержанием жиров, мы исследовали содержание жира и липидный профиль в печени мышей, получавших EK.Окрашивание HE показало, что мыши, получавшие диету с высоким содержанием жиров в течение 5 недель, имели морфологию тканей гепатоцитов, аналогичную мышам, получавшим стандартную диету (). Окрашивание масляным красным О показало, что липиды накапливались в печени мышей HF по сравнению с таковыми у мышей контрольной группы (), и что обработка EK заметно предотвращала накопление липидов в печени (). Для подтверждения этих результатов было проанализировано содержание ТГ и ТС в печени. Уровни TG у мышей, получавших HF-диету, были заметно выше, чем у контрольных мышей, тогда как лечение EK значительно предотвращало накопление TG в печени, вызванное диетой с высоким содержанием жиров ().Общее содержание ОХ в печени достоверно не изменилось во всех группах (). Результаты показывают, что ЭК может предотвращать накопление липидов и блокировать развитие стеатоза печени, вызванного диетой с высоким содержанием жиров у мышей.

EK улучшает накопление липидов в печени мышей C57BL / 6, индуцированных диетой с высоким содержанием жиров.

(A-C): окрашивание H&E (× 200) печени из стандартной диеты (A), диеты HF (B) и мышей HF + EK (C). (D-F): Окрашивание масляным красным О (× 400) срезов печени из стандартной диеты (D), диеты HF (E) и мышей HF + EK (F).Срезы контрастировали гематоксилином. Приведены количественные результаты по содержанию ТГ (G) и TC (H) в печени. Мышей кормили диетой с высоким содержанием жиров в течение 5 недель, и EK измельчали ​​и добавляли в рацион в концентрации 0,05% (вес / вес). Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка. N = 7 для всех групп. * Р <0,05.

EK улучшает метаболические нарушения у тучных мышей

Затем мы проверили, может ли EK влиять на метаболические нарушения у тучных мышей. После 3 месяцев кормления диетой с высоким содержанием жиров у мышей C57BL / 6 развилась высокая масса тела, уровень липидов сыворотки и уровень глюкозы в крови.Затем мышей разделили на две группы и лечили 50 мг / кг / день ЭК в течение 2 недель. Лечение ЭК не привело к значительному снижению массы тела (), и количество потребляемой пищи также не изменилось (). Однако лечение ЭК привело к уменьшению размера белых адипоцитов у мышей с ожирением по сравнению с таковыми у контрольных мышей ().

EK улучшает метаболические нарушения у мышей C57BL / 6 с ожирением.

(A): Масса тела до и после лечения. (B): Количество потребляемой пищи. (C): изображения белых адипоцитов с использованием сканирующей электронной микроскопии.(D): Уровни общего холестерина (TC), триглицеридов (TG), холестерина липопротеинов низкой плотности (LDL-c) и холестерина липопротеидов высокой плотности (HDL-c) в сыворотке крови. (E): толерантность к глюкозе у мышей, получавших HFD, как определено тестом на толерантность к глюкозе (GTT). Мышам вводили глюкозу в дозе 1 мг / кг для внутрибрюшинного теста на толерантность к глюкозе, и уровни глюкозы проверяли с регулярными интервалами в 15, 30, 60 и 90 минут. Н.Ш .: Никакого значения. Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка. N = 7 для всех групп. * Р <0.05.

Анализ липидов сыворотки показал, что уровни TC, TG, LDL-c и HDL-c у тучных мышей были значительно увеличены по сравнению с таковыми у мышей, получавших стандартную диету. Лечение ЭК заметно снизило содержание ТГ, но не изменило уровни общего холестерина, ЛПНП и ЛПВП в сыворотке (), что свидетельствует о различных эффектах ЭК на липидный профиль при профилактике и лечении мышей с ожирением.

Кроме того, мы проверили уровни глюкозы в крови натощак и толерантность к глюкозе у мышей, получавших EK. показывает, что уровни глюкозы натощак у мышей, получавших EK, были снижены по сравнению с таковыми у необработанных мышей, а уровни глюкозы также улучшились через 30 и 60 минут после внутрибрюшинных инъекций глюкозы, предполагая, что EK может улучшить толерантность к глюкозе.Взятые вместе, эти результаты показывают, что ЭК может облегчить метаболические нарушения у мышей с ожирением, вызванным диетой.

EK ингибирует экспрессию липогенного гена в печени мыши

Чтобы проверить эффекты EK in vivo, мы исследовали экспрессию гена в печени мышей, получавших EK. Как показано на фиг.1, уровни мРНК факторов транскрипции, таких как PPARγ, CEB / Pα, и липогенных генов, таких как ацил-CoA-оксидаза (ACO), ацетил-кофермент A-карбоксилаза (ACC) и aP2, были снижены в печени, обработанной EK, что позволяет предположить, что на экспрессию липогенных генов влияет лечение ЭК.

EK подавляет экспрессию липогенных генов в печени мышей.

Дифференцировка адипоцитов 3T3-L1, индуцированная СД. Результаты ОТ-ПЦР в реальном времени уровней экспрессии генов PPARγ, PPARα, PPARδ / ß, C / EBPα, C / EBPβ, UCP2, ACO, ACC и aP2 в печени мышей, обработанных EK, сравнивали с таковыми у контрольных мышей HF из профилактическое лечение. β-актин использовали в качестве внутреннего контроля. Данные представлены как средние значения ± стандартная ошибка для 5 мышей на группу. * Р <0,05.

Чай Kuding содержит лиганд антагониста LXRβ

Факторы транскрипции ядерных рецепторов являются важными регуляторами гомеостаза липидов и глюкозы.Основываясь на подавлении ожирения и гиперлипидемии, мы проверили, действует ли ЭК на PPARγ, α, β / δ и LXRα и LXRβ, которые являются лекарственными мишенями для метаболических синдромов [25], [26]. Мы не наблюдали ингибирующих эффектов ЭК на трансактивность PPARγ, α, β / δ (данные не показаны) или LXRα (). Однако трансактивность LXRβ, индуцированная GW3965, значительно ингибировалась EK дозозависимым образом (), что позволяет предположить, что EK может содержать лиганд антагониста LXRβ.

EK Анализ активности транскрипции ядерных рецепторов.

(A, B): транс-активности LXRα и LXRβ. Плазмиды экспрессии pCMXGal-мышиный LXRα и LXRβ-LBD котрансфицировали репортерным вектором Gal4 Mh200 × 4-TK-Luc в клетку 293T в течение 24 часов. Затем клетку обрабатывали 10 мкМ агониста LXR GW3965 и / или 5–20 мкг / мл ЭК в течение еще 24 часов. ДМСО использовали в качестве контроля транспортного средства. Относительные активности люциферазы измеряли путем сравнения с активностями люциферазы реллина. Результаты представляют как минимум три независимых эксперимента, а данные представлены как средние значения ± стандартная ошибка среднего.* Р <0,05. (C) Уровни экспрессии генов-мишеней LXR в печени мышей, обработанных EK, сравнивали с таковыми у контрольных мышей HF, получавших профилактическое лечение, и β-актин использовали в качестве внутреннего контроля. Данные представлены как средние значения ± стандартная ошибка для 5 мышей на группу. * Р <0,05.

LXR регулирует метаболизм липидов и глюкозы посредством активации экспрессии набора целевых генов, включая синтазу жирных кислот (FAS), белок-1c, связывающий регуляторный элемент стерола (SREBP-1c), липопротеинлипазу (LPL), ATP- переносчик связывающей кассеты A1 (ABCA1), переносчик АТФ-связывающей кассеты G1 (ABCG1) и сам LXR [27].Затем мы оценили эффект in vivo EK на экспрессию генов, связанных с активностью LXRβ, путем анализа уровней экспрессии мРНК в тканях печени, выделенных от мышей, получавших EK, и контрольных мышей HF. Уровни LXRα / β, ApoE, ABCA1 и SREBP1 также подавлялись в печени мышей, получавших EK (), что указывает на то, что некоторые компоненты чая кудинг могут действовать как антагонисты LXRβ.

Обсуждение

В этом исследовании мы приводим доказательства того, что чай кудинг может предотвратить и облегчить метаболические нарушения у мышей, получавших диету с высоким содержанием жиров.Наши результаты ясно показали, что лечение ЭК блокирует увеличение массы тела, гиперлипидемию и инсулинорезистентность у мышей, вызванных диетой с сердечной недостаточностью. Химические и гистологические данные показали, что лечение ЭК привело к значительному снижению накопления липидов в печени мышей DIO, предполагая, что ЭК оказывает защитное действие против развития метаболических нарушений, таких как ожирение, дислипидемия, диабет и стеатоз печени у мышей. Мы также обнаружили, что ЭК может улучшить метаболические нарушения у мышей с ожирением.Кроме того, мы определили, что ЭК избирательно подавляет трансактивность фактора транскрипции ядерного рецептора LXRβ. Таким образом, результаты этого исследования предполагают, что защитный эффект ЭК против метаболических нарушений, вероятно, связан с его ингибирующим действием на LXRβ.

Чай Кудин — популярный напиток в Китае. Как и зеленый чай, чай кудинг используется в медицинских составах для облегчения нарушений обмена веществ, таких как ожирение. В последние годы сообщалось, что чай кудинг обладает различными биологическими эффектами [28].Было показано, что чай кудинг снижает уровни ТГ, ОХ и ЛПНП в сыворотке у пациентов с дислипидемией [29], [30] и улучшает кровяное давление у пациентов с гипертонией I фазы, а также предотвращает прогрессирование атеросклероза [31], [32].

У мышей C57BL / 6 могут развиваться метаболические синдромы при употреблении диеты с высоким содержанием жиров. В текущем исследовании у мышей, получавших диету с высоким содержанием жиров в течение 5 недель, были значительно увеличены масса тела, уровни TC, TG, LDL-c и TG в печени, толерантность к глюкозе. Лечение ЭК привело к значительному снижению прибавки в весе и ОС в сыворотке, а также к улучшению толерантности к глюкозе и накоплению липидов в печени, что позволяет предположить, что ЭК может предотвратить развитие метаболических синдромов.

Увеличение веса является следствием увеличения массы и количества адипоцитов, вызванного избыточными калориями, хранящимися в виде ТГ [33], в то время как потеря веса обычно вызывается уменьшением массы и количества адипоцитов за счет подавления потребления энергии или чрезмерного сжигания избытка. калорий. Конкретные механизмы, с помощью которых ЭК защищает от увеличения веса, еще предстоит определить. Есть несколько вероятных возможностей, основанных на данных, полученных в результате наших исследований. Поскольку сокращение потребления пищи может значительно повлиять на массу тела, уровень глюкозы и липидов в крови, мы рассмотрели возможность того, что эффект ЭК может быть результатом уменьшения потребления пищи.Однако мы не наблюдали разницы в количестве потребляемой пищи между мышами, получавшими HF, и мышами, получавшими EK. Сообщалось, что зеленый чай подавляет всасывание липидов в кишечнике [34] — [36]. Однако наши данные показали, что чай кудинг не оказывает ингибирующего действия на всасывание липидов. Таким образом, вероятно, что снижение уровня липидов и массы тела не может быть связано со снижением всасывания липидов на кишечном уровне. Взятые вместе, наши данные показывают, что защитные механизмы ЭК против увеличения массы тела не зависят от снижения потребления энергии и всасывания липидов в кишечнике.

В нашем терапевтическом эксперименте у мышей с ожирением, получавших EK, наблюдались более низкие уровни ТГ и глюкозы натощак в сыворотке, чем у контрольных мышей с ожирением. Однако у мышей не наблюдается значительной потери массы тела, снижения общего содержания холестерина или холестерина ЛПНП. Это несоответствие может быть вызвано двумя причинами. Во-первых, было доказано, что удаление лишнего жира намного труднее, чем предотвращение набора жира. Во-вторых, в профилактической терапии мы лечили мышей в течение 5 недель, но мышей лечили только в течение двух недель для терапевтического лечения.Таким образом, результаты настоящего исследования не подтверждают влияние чая кудинг на снижение веса в клинических испытаниях, о которых сообщали предыдущие исследователи. Толерантность к глюкозе улучшилась при профилактическом лечении, но была менее эффективной при терапевтическом лечении. Это может быть результатом уменьшения жировой ткани, поскольку отложение ТГ в клетках отвечает за развитие инсулинорезистентности [37] — [39].

По сравнению с водным экстрактом чая кудинг, этанольный экстракт ингибировал дифференцировку адипоцитов адипоцитов 3T3-L1, что позволяет предположить, что жирорастворимые компоненты чая кудинг могут действовать на адипоциты.Химический анализ показал, что этанольный экстракт чая кудинг содержит 11 основных соединений: лупеол, 11-кето-α-амирин пальмитат, α-амирин пальмитат, 12-урсен-3,28-диол, урсоловую кислоту, 3β-гидроксилюп- 20 (29) -ен-30-ал, 3β-гидрокси-20-оксо-30-норлупан, танацетен, β-ситостерин, н-бегеновая кислота и н-гексакозан [22]. Среди них урсоловая кислота изучена на предмет ее воздействия на метаболические нарушения. Например, урсоловая кислота усиливает связывание PPAR-α с PPRE, регулирует экспрессию генов метаболизма липидов и значительно снижает внутриклеточные концентрации триглицеридов и холестерина в гепатоцитах [40], а также снижает массу тела, висцеральное ожирение, уровни глюкозы в крови и плазме. липидов, а также увеличение лептина в плазме у мышей, получавших диету с высоким содержанием жиров [41] — [43].Сообщалось также, что лупеол снижает уровень глюкозы в крови у экспериментальных животных с диабетом [44], [45]. Однако в экстракте, используемом в текущем исследовании, он содержит только 6,48% урсоловой кислоты (около 1/20 использовалось в предыдущих исследованиях), что позволяет предположить, что урсоловая кислота не единственный эффективный компонент. Активные вещества в чае кудинг должны быть исследованы на предмет их роли при метаболических заболеваниях. Или система кишечной проницаемости может быть использована для выяснения механизма воздействия чая кудинг на адипоцит 3T3L1.

Опубликованные данные о механизме действия чая кудинг ограничены, но исследования показывают, что чай кудинг может улучшить метаболические нарушения с помощью нескольких механизмов.Наши данные предполагают, что чай кудинг может предотвращать метаболические нарушения, избирательно воздействуя на ядерные рецепторы факторов транскрипции LXRβ. Семейство LXR представляет собой активируемые лигандом факторы транскрипции, включая LXRα и LXRβ. LXRα экспрессируется главным образом в печени, жировой ткани и макрофагах, тогда как LXRβ экспрессируется повсеместно [5], [6]. Потенциал LXR в качестве мишени для лекарств при гиперлипидемии, AS, диабете, гипертонии и воспалении был ранее показан [46], [47]. Дальнейшее исследование эффектов EK на мышей с нокаутом LXRβ подтвердит сигнальный путь EK.И, вероятно, это позволит идентифицировать ингибирование LXRβ как терапию метаболических заболеваний in vivo.

Предыдущие исследования показали, что агонисты LXR могут снижать уровни TC в сыворотке, но повышать уровни TG в печени и сыворотке, что исключает агонисты LXR в качестве терапии метаболических заболеваний. Разработка селективных агонистов или антагонистов LXR может избежать нецелевых эффектов [19]. Недавно было подтверждено, что два встречающихся в природе соединения, реин и нарингенин, являются антагонистами LXRα / β и LXRα соответственно, и также было показано, что они обладают свойствами снижения гиперлипидемии [48], [49].Kanaya et al. Сообщили, что белые шампиньоны обладают защитным действием против стеатоза печени за счет ингибирования передачи сигналов LXR [50]. Мы показываем, что ЭК селективно ингибирует трансактивность LXRβ в присутствии агониста LXRβ GW3965, предполагая, что ЭК содержит антагонист LXRβ, который конкурентно связывается с LXRβ. Метаболический эффект ингибирования LXRβ с помощью ЭК также проявляется в экспрессии генов. Экспрессия мРНК LXRβ нацелена на гены, которые контролируют окисление жирных кислот, регулируют синтез жирных кислот и холестерина, такие как ABCA1, ABCG1, LPL и ApoE, и значительно ингибируется в печени и жировой ткани мышей, получавших EK.Идентификация этого специфического лиганда LXRβ может привести к новой терапии метаболических заболеваний.

В заключение мы приводим доказательства того, что ЭК защищает от развития ожирения, гиперлипидемии и инсулинорезистентности у мышей, получавших диету с высоким содержанием жиров. Эти данные свидетельствуют о том, что ЭК можно использовать в качестве потенциальной диетической стратегии для предотвращения метаболических нарушений, таких как ожирение, гиперлипидемия, диабет и атеросклероз. Потенциал использования натуральных пищевых добавок для регулирования массы тела и липидного обмена является привлекательным.Поскольку этот традиционный напиток безопасен и дешев, его следует рассматривать как диетическое средство для лечения метаболических синдромов. Это особенно важно, потому что потеря веса и лечение неалкогольной жировой болезни печени малоэффективны в долгосрочной перспективе. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы определить механизмы, с помощью которых этот компонент защищает от ожирения и связанных с ним симптомов.

Экстракт чая Кудинг предотвращает метаболические нарушения, вызванные диетой с высоким содержанием жиров, у мышей C57BL / 6 через β-антагонизм X-рецепторов печени (LXR)

Введение

Ожирение — проблема во всем мире, и ее распространенность быстро растет [1].Ожирение вызвано накоплением избыточных калорий в виде триглицеридов в жировой ткани и аномально в других тканях [2], что связано с инсулинорезистентностью, диабетом 2 типа, гипертонией, гиперлипидемией, сердечно-сосудистыми заболеваниями, инсультом и неалкогольным стеатогепатитом [3] , [4]. Предотвращение и лечение ожирения принесут большую пользу пациентам с этим заболеванием. В настоящее время существует только один препарат, одобренный Управлением по контролю за продуктами и лекарствами (Орлистат) для длительного использования при лечении ожирения. Поэтому срочно требуются новые терапевтические подходы к лечению ожирения [3].

Рецепторы Х печени (LXR) являются членами семейства ядерных рецепторов факторов транскрипции. Были идентифицированы две изоформы LXR, LXRα и LXRβ, и они являются важными регуляторами гомеостаза липидов и холестерина. Мыши с нокаутом LXRα здоровы, если их кормят диетой с низким содержанием жиров. Однако у мышей с нокаутом LXRα вырабатывается высокий уровень холестерина в печени и увеличивается жировая прослойка печени при питании диетой с высоким содержанием жиров [5]. Мыши с нокаутом LXRβ не подвержены влиянию диеты с высоким содержанием жиров, что позволяет предположить, что LXRα и LXRβ играют разные роли [6].

LXR являются потенциальными мишенями для лечения ожирения, дислипидемии и атеросклероза. Предыдущая работа показала, что синтетический агонист LXR GW3965 снижает уровень холестерина как в сыворотке, так и в печени, подавляет развитие атеросклероза на моделях мышей [7], [8] и улучшает толерантность к глюкозе у мышей с ожирением, вызванным диетой, и у мышей, устойчивых к инсулину, за счет регулирующие гены, участвующие в метаболизме глюкозы в печени и жировой ткани [9]. Однако GW3965 увеличивает уровень триглицеридов в плазме и печени мышей.С другой стороны, антагонисты LXR, такие как 5α, 6α-эпоксихолестерин-3-сульфат, блокируют образование бляшек атеросклероза, подавляя функцию LXR [10]. Разработка новых сильнодействующих и эффективных агонистов и антагонистов LXR без побочных эффектов может быть полезной для клинического использования.

Зеленый чай и чай кудинг — два самых популярных напитка в Китае. Зеленый чай хорошо изучен на предмет его различных преимуществ для здоровья, но данных о биологической активности горького чая мало.Чай Кудин использовался в Китае более 2000 лет в качестве напитка. В традиционной китайской медицине чай кудинг также используется в формулах для лечения ожирения, гипертонии, сердечно-сосудистых заболеваний, гиперлипидемии и различных других заболеваний. Недавно несколько клинических исследований были сосредоточены на его влиянии на снижение липидов, снижение массы тела и снижение уровня глюкозы в крови у пациентов с метаболическими синдромами. Исследования на животных показали, что фенольные компоненты и фенилэтаноидные гликозиды чая кудинг обладают значительной антиоксидантной активностью in vitro [11], [12].Кроме того, чай кудинг также значительно снижает окклюзию и реперфузию средней мозговой артерии (MCAO / реперфузия), вызывает инфаркт и неврологический дефицит и потерю нервных клеток, а также ингибирует фосфорилирование митоген-активированной протеинкиназы и циклооксигеназы-2. Он также увеличивает уровни антиапоптотического белка в головном мозге крыс с MCAO / реперфузией [13]. Общие сапонины из чая ilex kuding улучшают аномальные гемореологические параметры у мышей ApoE — / — , вызванные диетой с высоким содержанием жиров [14].Тритерпеноидные сапонины из листьев чая ilex kuding ингибируют индуцированное ЛПНП образование пенистых клеток и снижают внутриклеточное содержание общего холестерина и триглицеридов [15]. Однако убедительных экспериментальных данных, подтверждающих влияние чая кудинг на ожирение и гиперлипидемию, нет. Здесь мы показываем, что экстракты чая кудинг предотвращают развитие ожирения, гиперлипидемии и толерантности к глюкозе у мышей C57BL / 6, получавших диету с высоким содержанием жиров, и ингибируют трансактивность LXRβ.

Материалы и методы

Анализ отпечатков пальцев с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой (ОФ-ВЭЖХ)

Для анализа профилей отпечатков пальцев ЭК (5 мг) растворяли в метаноле (1 мл).Отфильтрованные экстракты анализировали с использованием системы жидкостного хроматографа Agilent 1200 с УФ-детектором при λ max 270 нм. Хроматографическое разделение выполняли на обращенно-фазовой колонке Discovery C-18 (250 × 4,6 мм, 5 мкм) с вводимым объемом 10 мкл метанола (в качестве растворителя A) и воды (в качестве растворителя B). Градиент был установлен следующим образом: 0 ~ 10 мин, 5% B; 20 мин, 30% B; 25 мин, 50% B; 40 мин, 90% B; 45 мин, 95% B (скорость потока 1 мл / мин).

Урсоловая кислота и лупеол (чистота> 98%) были приобретены в Шанхайском научно-исследовательском центре стандартизации китайских лекарственных средств (Шанхай, Китай).Соединения контролировали при 210 нм с использованием колонки Discovery C18 с метанолом или ацетонитрилом (в качестве растворителя A) и водой, содержащей 0,1% фосфорной кислоты (в качестве растворителя B) в подвижной фазе, при скорости потока 1,0 мл / мин при 30 ° C. на 60 мин. Чтобы обнаружить урсоловую кислоту, градиентное элюирование ВЭЖХ составляло 48% A (ацетонитрил) и 52% B (фосфорная кислота, pH 2,5) при 0 мин, 75% A и 25% B через 40 мин, 85% A и 15% B. в 60 мин. Постоянную подвижную фазу метанол: вода (98 ± 2, об. / Об.) Использовали для обнаружения лупеола.

Культура клеток

Клетки 3T3-L1 выращивали и поддерживали в среде DMEM, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки (Hyclone, Logan, UT). Для дифференцировки адипоцитов клетки выращивали в 12-луночных планшетах до полного слияния в течение 2 дней, а затем среду для дифференцировки (DM), содержащую 10 мкг / мл инсулина (Sigma, Сент-Луис, Миссури), 0,5 мкМ дексаметазона (Sigma, Сент-Луис). , Миссури) и 0,8 мМ изобутилметилксантина (IBMX, Sigma, Сент-Луис, Миссури) добавляли к культуре. Через 4 дня среду заменяли на DMEM с 10% фетальной бычьей сывороткой для дифференциации при 37 ° C в 10% CO 2 .ЭК растворяли в ДМСО и добавляли к среде в указанных концентрациях. ДМСО добавляли к клеткам в качестве необработанного контроля.

Окрашивание масляным красным О

Клетки дважды промывали PBS, фиксировали 10% формалином при комнатной температуре в течение 10 минут, а затем окрашивали масляным красным О (Sigma, Сент-Луис, Миссури) при 60 ° C в течение 10 минут. минут. Затем были сделаны снимки с помощью микроскопа Olympus (Токио, Япония).

Количественная ПЦР в реальном времени

Тотальную РНК экстрагировали с использованием спин-колонки (Qiagen, Hilden, Германия) в соответствии с инструкциями производителя, и РНК обрабатывали ДНКазой I для удаления загрязнения геномной ДНК.Первая цепь кДНК была синтезирована с использованием набора для синтеза кДНК (Fermentas, Madison, WI), а уровни экспрессии генов были проанализированы с помощью количественной ОТ-ПЦР в реальном времени с использованием системы ABI Stepone Plus Real Time PCR (Applied Biosystems, Карлсбад, Калифорния) . Праймеры, использованные в экспериментах, показаны на. Уровни мРНК всех генов нормализовали с использованием β-актина в качестве внутреннего контроля.

Таблица 1

Последовательности праймеров, используемых в ПЦР в реальном времени.

Gene Прямой праймер Обратный праймер
β-Актин TGTCCACCTTCCAGCAGATGT AGCTCAGTAACAGTCCGCCTAGA
LXRα GAGTGTCGACTTCGCAAATGC CCTCTTCTTGCCGCTTCAGT
LXRβ CAGGCTTGCAGGTGGAATTC ATGGCGATAAGCAAGGCATACT
ABCA1 GGCAATGAGTGTGCCAGAGTTA TAGTCACATGTGGCACCGTTTT
ABCG1 TCCCCACCTGTAAGTAATTGCA TCGGACCCTTATCATTCTCTACAGA
ApoE GAACCGCTTCTGGGATTACCT TCAGTGCCGTCAGTTCTTGTG
Cyp7a1 GTGGTAGTGAGCTGTTGCATATGG CACAGCCCAGGTATGGAATCA
SREBP1 GGCTATTCCGTGAACATCTCCTA ATCCAAGGGCATCTGAGAACTC
FAS CTGAGATCCCAGCACTTCTTGA GCCTCCGAAGCCAAATGAG
LPL ATCGGAGAACTGCTCATGATGA CGGATCCTCTCGATGACGAA
C / EBPβ GGGGTTGTTGATGTTTTTGG CGAAACGGAAAAGGTTCTCA
PPARα AGGCTGTAAGGGCTTCTTTCG GGCATTTGTTCCGGTTCTTC
PPARγ CGCTGATGCACTGCCTATGA AGAGGTCCACAGAGCTGATTCC
PPARβ / δ AGTGACCTGGCGCTCTTCAT CGCAGAATGGTGTCCTGGAT
C / EBPα CGCAAGAGCCGAGATAAAGC CACGGCTCAGCTGTTCCA
AP2 CATGGCCAAGCCCAACAT CGCCCAGTTTGAAGGAAATC
ACC GAATCTCCTGGTGACAATGCTTATT GGTCTTGCTGAGTTGGGTTAGCT
ACO CAGCACTGGTCTCCGTCATG CTCCGGACTACCATCCAAGATG
УЦП-2 GGGCACTGCAAGCATGTGTA TCAGATTCCTGGGCAAGTCACT

Трансфекция культивируемых клеток и репортерные анализы

Репортерный анализ проводили, как описано ранее [16], [17].Вкратце, клетки 293Т выращивали в 24-луночном планшете для трансфекции. Экспрессионная плазмида pCMXGal-рецептор, активируемый пролифератором пероксисом мыши (PPAR) α, γ, β / δ, LXRα и LXRβ-LBD, и репортерный вектор Gal4 Mh200 × 4-TK-Luc были подарками доктора Р. Эванса [18] и д-р Саез [19], [20]. Когда плазмиды экспрессии котрансфицировали репортерной конструкцией, 1 мкг соответствующей плазмиды объединяли с 1 мкг репортерной плазмиды и 0,1 мкг репортера pREP7 (реллина люцифераза) для нормализации эффективности трансфекции.Все трансфекции включали 2,1 мкг общих плазмид и 5 мкл FuGENE HD (Roche, Германия) на мл DMEM. Раствор для трансфекции добавляли к клеткам 293T на 24 часа, а затем удаляли и добавляли 10 мкМ PPARγ, PPARα, PPARβ / δ и агониста LXR розиглитазона, WY14643, GW0742 и GW3965 или EK перед сбором клеток для определения активности люциферазы. 24 часа спустя. Анализы репортера люциферазы проводили с использованием системы анализа репортера двойной люциферазы (Promega, Сан-Луис-Обиспо, Калифорния), и эффективность трансфекции нормализовали в соответствии с активностью люциферазы реллина.Все эксперименты по трансфекции независимо выполняли трижды.

Животные и химический анализ сыворотки

Протоколы на животных, использованные в этом исследовании, были одобрены Шанхайским университетом традиционной китайской медицины для исследований на животных (утвержденный Nember: 11002). Самки мышей C57BL / 6 были приобретены в лаборатории SLAC (Шанхай, Китай). Всех мышей содержали при контролируемой температуре (22–23 ° C) и при 12-часовом световом цикле и 12-часовом темноте. Для профилактического эксперимента мышей C57BL / 6 аналогичного возраста и веса тела случайным образом разделили на разные группы и затем поместили на диету с высоким содержанием жиров (60% калорий, полученных из жира, Research Diets, Нью-Брансуик, Нью-Джерси; D12492) или на диете с высоким содержанием жиров, смешанной с 0.05% EK, или на низкокалорийной диете в качестве эквивалентной контрольной диеты (10% калорий, полученных из жиров, Research Diets; D12450B). Исследование диеты было начато в возрасте 6 недель и продолжалось в течение 11 недель. Для терапевтического эксперимента мышей помещали на диету с высоким содержанием жиров на 3 месяца, а затем мышей с ожирением группировали случайным образом. EK вводили через желудочный зонд в течение 2 недель в дозе 50 мг / день / кг (HF + EK), в то время как контрольным мышам давали воду через желудочный зонд (HF). Нормальных контрольных мышей содержали на обычной диете в течение всего эксперимента (Chow).Двадцать четыре часа приема пищи измеряли путем регистрации разницы в весе между кормом, помещенным в клетку, и оставшимся по истечении 24 часов как в обработанных группах, так и в контроле. Экспериментальные диеты не привели к каким-либо изменениям в суточном потреблении пищи по сравнению с контролем. Уровни триглицеридов (TG) в сыворотке крови, общего холестерина (TC), холестерина HDL (HDL-c) и холестерина LDL (LDL-c) исследовали с использованием автоматического анализатора Hitachi 7020 (Hitachi, Токио, Япония) с 100 мкл сердечной крови. сыворотка.

Анализ содержания липидов в печени и кале

Образцы печени взвешивали и гомогенизировали в буфере для лизиса тканей (20 мМ Трис · HCl pH 7,5, 150 мМ NaCl, 1% тритон) и экстрагировали равным объемом хлороформа. Слои хлороформа сушили и растворяли в изопропиловом спирте для измерения уровней липидов, как описано выше. Фекальные липиды также экстрагировали и измеряли, как описано выше.

Окрашивание гематоксилином и эозином (H&E)

Для окрашивания H&E ткань фиксировали в 10% формальдегиде, заливали в состав ОКТ и разрезали на 10 мкм срез в соответствии со стандартным протоколом.Срезы окрашивали гематоксилином и эозином и исследовали под световым микроскопом.

Растровая электронная микроскопия

Растровая электронная микроскопия использовалась для исследования структуры жировой ткани в соответствии с ранее описанными протоколами [21]. Изображения были получены с помощью растрового электронного микроскопа Philip XL-30.

Тест на внутрибрюшинную толерантность к глюкозе

После 2 недель лечения мышей C57BL / 6 не кормили в течение ночи в течение 12 часов. Образцы крови собирали из хвостовой вены для определения исходных значений глюкозы (0 минут) перед инъекцией глюкозы (1 г / кг веса тела).Дополнительные образцы крови собирали через равные промежутки времени (15, 30, 60 и 90 минут) для измерения глюкозы.

Статистический анализ

Анализ данных проводился с использованием статистической программы SPSS12.0 для Windows. Все данные были представлены как средние значения ± стандартная ошибка. Статистический анализ был выполнен с помощью одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA). Различия считались достоверными при P <0,05.

Результаты

Профилирование EK по отпечатку пальца

Для анализа компонентов этанольного экстракта чая кудинг мы проанализировали отпечаток EK с помощью ВЭЖХ.На рисунке S1A показано, что EK содержит несколько пиков, согласующихся с предыдущими выводами. Далее мы сравнили элементы ЭК с известными соединениями урсоловую кислоту и лупеол. Рисунок S1B показывает, что существует пик поглощения на 41,147 мин времени удерживания, который совпадает с пиком урсоловой кислоты (Рисунок S1C). Точно так же пик ЭК при времени удерживания 17,379 мин (фигура S1D) идентичен лупеолу (фигура S1E). Эти результаты согласуются с предыдущим отчетом [22].

EK ингибирует дифференцировку адипоцитов 3T3-L1

Поскольку чай кудинг использовался для профилактики и лечения ожирения и гиперлипидемии, мы наблюдали эффекты EK на дифференцировку адипоцитов 3T3-L1.Мы использовали инсулин, дексаметазон и изобутилметилксантин (среда для дифференцировки, DM), чтобы вызвать дифференцировку преадипоцитов 3T3-L1. Во время индукции СД в среду добавляли ЭК с 0 по 6 день дифференцировки. Результаты показали, что этанольный экстракт чая кудинг значительно ингибировал дифференцировку адипоцитов 3T3-L1, тогда как водный экстракт чая кудинг не влиял на дифференцировку адипоцитов 3T3-L1 (), что указывает на потенциальный агент для лечения ожирения и дислипидемии. могут быть жирорастворимые компоненты.В результате мы использовали этанольный экстракт в следующих экспериментах.

Этаноловый экстракт чая кудинг ингибирует дифференцировку адипоцитов 3T3-L1.

Водный экстракт и этанольный экстракт добавляли в среду в концентрации 20 мкг / мл. ДМСО использовали в качестве контроля транспортного средства. Клетки окрашивали масляным красным О на 6 день дифференцировки. GM: питательная среда; DM: среда дифференциации.

EK ингибирует более позднюю стадию дифференцировки адипоцитов 3T3-L1

Дифференцировка адипоцитов 3T3-L1 включает два этапа: 4-дневная индукция и 5-7-дневная дифференцировка, оба из которых контролируются различными молекулярными событиями [23], [24], активация фактора транскрипции и экспрессия липогенного гена соответственно.Чтобы проверить, какой процесс дифференцировки адипоцитов ингибирует ЭК, ​​ЭК добавляли в культуральную среду на разных этапах. Когда EK добавлялся во время индукции и удалялся во время дифференцировки, дифференцировка явно не изменялась (). Интересно, что когда EK добавляли после завершения индукции, дифференцировка значительно подавлялась (), указывая на то, что EK может нарушать более поздние стадии процессов дифференцировки адипоцитов 3T3-L1.

EK ингибирует дифференцировку адипоцитов 3T3-L1, индуцированную СД.

(A): EK использовали в начале индукции DM клеток 3T3-L1 и удаляли во время дифференцировки. (B): ЭК использовался только во время дифференцировки клеток 3T3-L1. Клетки окрашивали масляным красным О на 6 день дифференцировки. (C): результаты ОТ-ПЦР в реальном времени уровней экспрессии гена в адипоцитах 3T3-L1. Клетку дифференцировали в течение 6 дней, а затем клетку обрабатывали EK в концентрации 20 мкг / мл в течение 24 часов. DM: среда дифференциации. β-актин использовали в качестве внутреннего контроля.Данные представлены как средние значения ± стандартная ошибка для 4 процедур. * Р <0,05.

Чтобы подтвердить это, была проведена количественная ПЦР для проверки изменений экспрессии генов родственных генов в адипоцитах 3T3-L1, обработанных EK. Результаты показали, что ЭК значительно ингибирует экспрессию маркера адипоцитов PPARγ и aP2. Экспрессия синтазы жирных кислот (FAS) также снижалась после лечения EK. Однако лечение ЭК не изменило экспрессию генов АСС, CD36 и UCP2 ().

EK блокирует ожирение и гиперлипидемию, вызванное диетой с высоким содержанием жиров, у мышей C57BL / 6

Далее мы исследовали влияние EK на увеличение массы тела, вызванное диетой с высоким содержанием жиров, у мышей C57BL / 6.После 5 недель лечения масса тела мышей, получавших диету с высоким содержанием жиров, значительно увеличилась по сравнению с массой тела мышей, получавших стандартную диету (кормление). При добавлении EK набор массы тела был намного меньше, чем у контрольных мышей HF (). Поскольку подавление увеличения массы тела может быть вызвано меньшим количеством потребляемой пищи, мы исследовали количество потребляемой пищи у мышей. EK не подавлял потребление пищи по сравнению с таковым у контрольных мышей HF (), указывая на то, что снижение массы тела у мышей, получавших EK, не было результатом более низкого потребления калорий.Затем мы проверили содержание ТГ в кале, чтобы оценить, ингибирует ли ЭК абсорбцию липидов в кишечнике. Результаты показали, что лечение ЭК не повлияло на содержание ТГ в кале (), что позволяет предположить, что роль ЭК в блокировании увеличения массы тела не является результатом ингибирования всасывания липидов. Затем мы исследовали массу адипоцитов с помощью сканирующего электронного микроскопа. Размер как белых адипоцитов, так и коричневых адипоцитов был значительно уменьшен по сравнению с контрольными адипоцитами при диете HF (), что указывает на то, что EK защищает от индуцированного HF увеличения жировой массы.

EK улучшает метаболические нарушения у мышей C57BL / 6 с ожирением, вызванным диетой с высоким содержанием жиров.

(A): Увеличение массы тела. (B): Количество потребляемой пищи. (C): Содержание ТГ в кале. (D): изображения белых и коричневых адипоцитов под растровым электронным микроскопом. (E): Уровни общего холестерина (TC), триглицеридов (TG), холестерина липопротеинов низкой плотности (LDL-c) и холестерина липопротеинов высокой плотности (HDL-c) в сыворотке крови. (F): Влияние EK на толерантность к глюкозе у мышей, получавших HFD, как определено тестом на толерантность к глюкозе (GTT).Н.Ш .: Никакого значения. Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка. N = 7 для всех групп. * Р <0,05.

Ожирение тесно связано с гиперлипидемией и инсулинорезистентностью, поэтому мы проверили уровень липидов сыворотки и уровень глюкозы в крови натощак на мышах. Анализ липидов сыворотки показал, что лечение ЭК привело к снижению уровней LDL-c в условиях диеты HF, но уровни TG, TC и HDL-c существенно не изменились (). Уровни глюкозы натощак были ниже, чем у контрольных мышей HF (0 мин). Затем мы исследовали, может ли лечение ЭК повлиять на толерантность к глюкозе, используя тест толерантности к глюкозе.Уровни глюкозы в крови измеряли с интервалами 15, 30, 60 и 90 минут после внутрибрюшинных инъекций глюкозы 1 г / кг. Как показано на фиг.3, уровни глюкозы у мышей, получавших HF-диету, были заметно выше, чем у мышей, получавших диету. Лечение EK значительно снижало уровни глюкозы во все моменты времени, предполагая, что EK улучшает толерантность к глюкозе у мышей C57BL / 6, получавших диету с HF.

EK предотвращает накопление липидов в печени мышей C57BL / 6

Чтобы оценить влияние EK на стеатоз печени, вызванный диетой с высоким содержанием жиров, мы исследовали содержание жира и липидный профиль в печени мышей, получавших EK.Окрашивание HE показало, что мыши, получавшие диету с высоким содержанием жиров в течение 5 недель, имели морфологию тканей гепатоцитов, аналогичную мышам, получавшим стандартную диету (). Окрашивание масляным красным О показало, что липиды накапливались в печени мышей HF по сравнению с таковыми у мышей контрольной группы (), и что обработка EK заметно предотвращала накопление липидов в печени (). Для подтверждения этих результатов было проанализировано содержание ТГ и ТС в печени. Уровни TG у мышей, получавших HF-диету, были заметно выше, чем у контрольных мышей, тогда как лечение EK значительно предотвращало накопление TG в печени, вызванное диетой с высоким содержанием жиров ().Общее содержание ОХ в печени достоверно не изменилось во всех группах (). Результаты показывают, что ЭК может предотвращать накопление липидов и блокировать развитие стеатоза печени, вызванного диетой с высоким содержанием жиров у мышей.

EK улучшает накопление липидов в печени мышей C57BL / 6, индуцированных диетой с высоким содержанием жиров.

(A-C): окрашивание H&E (× 200) печени из стандартной диеты (A), диеты HF (B) и мышей HF + EK (C). (D-F): Окрашивание масляным красным О (× 400) срезов печени из стандартной диеты (D), диеты HF (E) и мышей HF + EK (F).Срезы контрастировали гематоксилином. Приведены количественные результаты по содержанию ТГ (G) и TC (H) в печени. Мышей кормили диетой с высоким содержанием жиров в течение 5 недель, и EK измельчали ​​и добавляли в рацион в концентрации 0,05% (вес / вес). Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка. N = 7 для всех групп. * Р <0,05.

EK улучшает метаболические нарушения у тучных мышей

Затем мы проверили, может ли EK влиять на метаболические нарушения у тучных мышей. После 3 месяцев кормления диетой с высоким содержанием жиров у мышей C57BL / 6 развилась высокая масса тела, уровень липидов сыворотки и уровень глюкозы в крови.Затем мышей разделили на две группы и лечили 50 мг / кг / день ЭК в течение 2 недель. Лечение ЭК не привело к значительному снижению массы тела (), и количество потребляемой пищи также не изменилось (). Однако лечение ЭК привело к уменьшению размера белых адипоцитов у мышей с ожирением по сравнению с таковыми у контрольных мышей ().

EK улучшает метаболические нарушения у мышей C57BL / 6 с ожирением.

(A): Масса тела до и после лечения. (B): Количество потребляемой пищи. (C): изображения белых адипоцитов с использованием сканирующей электронной микроскопии.(D): Уровни общего холестерина (TC), триглицеридов (TG), холестерина липопротеинов низкой плотности (LDL-c) и холестерина липопротеидов высокой плотности (HDL-c) в сыворотке крови. (E): толерантность к глюкозе у мышей, получавших HFD, как определено тестом на толерантность к глюкозе (GTT). Мышам вводили глюкозу в дозе 1 мг / кг для внутрибрюшинного теста на толерантность к глюкозе, и уровни глюкозы проверяли с регулярными интервалами в 15, 30, 60 и 90 минут. Н.Ш .: Никакого значения. Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка. N = 7 для всех групп. * Р <0.05.

Анализ липидов сыворотки показал, что уровни TC, TG, LDL-c и HDL-c у тучных мышей были значительно увеличены по сравнению с таковыми у мышей, получавших стандартную диету. Лечение ЭК заметно снизило содержание ТГ, но не изменило уровни общего холестерина, ЛПНП и ЛПВП в сыворотке (), что свидетельствует о различных эффектах ЭК на липидный профиль при профилактике и лечении мышей с ожирением.

Кроме того, мы проверили уровни глюкозы в крови натощак и толерантность к глюкозе у мышей, получавших EK. показывает, что уровни глюкозы натощак у мышей, получавших EK, были снижены по сравнению с таковыми у необработанных мышей, а уровни глюкозы также улучшились через 30 и 60 минут после внутрибрюшинных инъекций глюкозы, предполагая, что EK может улучшить толерантность к глюкозе.Взятые вместе, эти результаты показывают, что ЭК может облегчить метаболические нарушения у мышей с ожирением, вызванным диетой.

EK ингибирует экспрессию липогенного гена в печени мыши

Чтобы проверить эффекты EK in vivo, мы исследовали экспрессию гена в печени мышей, получавших EK. Как показано на фиг.1, уровни мРНК факторов транскрипции, таких как PPARγ, CEB / Pα, и липогенных генов, таких как ацил-CoA-оксидаза (ACO), ацетил-кофермент A-карбоксилаза (ACC) и aP2, были снижены в печени, обработанной EK, что позволяет предположить, что на экспрессию липогенных генов влияет лечение ЭК.

EK подавляет экспрессию липогенных генов в печени мышей.

Дифференцировка адипоцитов 3T3-L1, индуцированная СД. Результаты ОТ-ПЦР в реальном времени уровней экспрессии генов PPARγ, PPARα, PPARδ / ß, C / EBPα, C / EBPβ, UCP2, ACO, ACC и aP2 в печени мышей, обработанных EK, сравнивали с таковыми у контрольных мышей HF из профилактическое лечение. β-актин использовали в качестве внутреннего контроля. Данные представлены как средние значения ± стандартная ошибка для 5 мышей на группу. * Р <0,05.

Чай Kuding содержит лиганд антагониста LXRβ

Факторы транскрипции ядерных рецепторов являются важными регуляторами гомеостаза липидов и глюкозы.Основываясь на подавлении ожирения и гиперлипидемии, мы проверили, действует ли ЭК на PPARγ, α, β / δ и LXRα и LXRβ, которые являются лекарственными мишенями для метаболических синдромов [25], [26]. Мы не наблюдали ингибирующих эффектов ЭК на трансактивность PPARγ, α, β / δ (данные не показаны) или LXRα (). Однако трансактивность LXRβ, индуцированная GW3965, значительно ингибировалась EK дозозависимым образом (), что позволяет предположить, что EK может содержать лиганд антагониста LXRβ.

EK Анализ активности транскрипции ядерных рецепторов.

(A, B): транс-активности LXRα и LXRβ. Плазмиды экспрессии pCMXGal-мышиный LXRα и LXRβ-LBD котрансфицировали репортерным вектором Gal4 Mh200 × 4-TK-Luc в клетку 293T в течение 24 часов. Затем клетку обрабатывали 10 мкМ агониста LXR GW3965 и / или 5–20 мкг / мл ЭК в течение еще 24 часов. ДМСО использовали в качестве контроля транспортного средства. Относительные активности люциферазы измеряли путем сравнения с активностями люциферазы реллина. Результаты представляют как минимум три независимых эксперимента, а данные представлены как средние значения ± стандартная ошибка среднего.* Р <0,05. (C) Уровни экспрессии генов-мишеней LXR в печени мышей, обработанных EK, сравнивали с таковыми у контрольных мышей HF, получавших профилактическое лечение, и β-актин использовали в качестве внутреннего контроля. Данные представлены как средние значения ± стандартная ошибка для 5 мышей на группу. * Р <0,05.

LXR регулирует метаболизм липидов и глюкозы посредством активации экспрессии набора целевых генов, включая синтазу жирных кислот (FAS), белок-1c, связывающий регуляторный элемент стерола (SREBP-1c), липопротеинлипазу (LPL), ATP- переносчик связывающей кассеты A1 (ABCA1), переносчик АТФ-связывающей кассеты G1 (ABCG1) и сам LXR [27].Затем мы оценили эффект in vivo EK на экспрессию генов, связанных с активностью LXRβ, путем анализа уровней экспрессии мРНК в тканях печени, выделенных от мышей, получавших EK, и контрольных мышей HF. Уровни LXRα / β, ApoE, ABCA1 и SREBP1 также подавлялись в печени мышей, получавших EK (), что указывает на то, что некоторые компоненты чая кудинг могут действовать как антагонисты LXRβ.

Обсуждение

В этом исследовании мы приводим доказательства того, что чай кудинг может предотвратить и облегчить метаболические нарушения у мышей, получавших диету с высоким содержанием жиров.Наши результаты ясно показали, что лечение ЭК блокирует увеличение массы тела, гиперлипидемию и инсулинорезистентность у мышей, вызванных диетой с сердечной недостаточностью. Химические и гистологические данные показали, что лечение ЭК привело к значительному снижению накопления липидов в печени мышей DIO, предполагая, что ЭК оказывает защитное действие против развития метаболических нарушений, таких как ожирение, дислипидемия, диабет и стеатоз печени у мышей. Мы также обнаружили, что ЭК может улучшить метаболические нарушения у мышей с ожирением.Кроме того, мы определили, что ЭК избирательно подавляет трансактивность фактора транскрипции ядерного рецептора LXRβ. Таким образом, результаты этого исследования предполагают, что защитный эффект ЭК против метаболических нарушений, вероятно, связан с его ингибирующим действием на LXRβ.

Чай Кудин — популярный напиток в Китае. Как и зеленый чай, чай кудинг используется в медицинских составах для облегчения нарушений обмена веществ, таких как ожирение. В последние годы сообщалось, что чай кудинг обладает различными биологическими эффектами [28].Было показано, что чай кудинг снижает уровни ТГ, ОХ и ЛПНП в сыворотке у пациентов с дислипидемией [29], [30] и улучшает кровяное давление у пациентов с гипертонией I фазы, а также предотвращает прогрессирование атеросклероза [31], [32].

У мышей C57BL / 6 могут развиваться метаболические синдромы при употреблении диеты с высоким содержанием жиров. В текущем исследовании у мышей, получавших диету с высоким содержанием жиров в течение 5 недель, были значительно увеличены масса тела, уровни TC, TG, LDL-c и TG в печени, толерантность к глюкозе. Лечение ЭК привело к значительному снижению прибавки в весе и ОС в сыворотке, а также к улучшению толерантности к глюкозе и накоплению липидов в печени, что позволяет предположить, что ЭК может предотвратить развитие метаболических синдромов.

Увеличение веса является следствием увеличения массы и количества адипоцитов, вызванного избыточными калориями, хранящимися в виде ТГ [33], в то время как потеря веса обычно вызывается уменьшением массы и количества адипоцитов за счет подавления потребления энергии или чрезмерного сжигания избытка. калорий. Конкретные механизмы, с помощью которых ЭК защищает от увеличения веса, еще предстоит определить. Есть несколько вероятных возможностей, основанных на данных, полученных в результате наших исследований. Поскольку сокращение потребления пищи может значительно повлиять на массу тела, уровень глюкозы и липидов в крови, мы рассмотрели возможность того, что эффект ЭК может быть результатом уменьшения потребления пищи.Однако мы не наблюдали разницы в количестве потребляемой пищи между мышами, получавшими HF, и мышами, получавшими EK. Сообщалось, что зеленый чай подавляет всасывание липидов в кишечнике [34] — [36]. Однако наши данные показали, что чай кудинг не оказывает ингибирующего действия на всасывание липидов. Таким образом, вероятно, что снижение уровня липидов и массы тела не может быть связано со снижением всасывания липидов на кишечном уровне. Взятые вместе, наши данные показывают, что защитные механизмы ЭК против увеличения массы тела не зависят от снижения потребления энергии и всасывания липидов в кишечнике.

В нашем терапевтическом эксперименте у мышей с ожирением, получавших EK, наблюдались более низкие уровни ТГ и глюкозы натощак в сыворотке, чем у контрольных мышей с ожирением. Однако у мышей не наблюдается значительной потери массы тела, снижения общего содержания холестерина или холестерина ЛПНП. Это несоответствие может быть вызвано двумя причинами. Во-первых, было доказано, что удаление лишнего жира намного труднее, чем предотвращение набора жира. Во-вторых, в профилактической терапии мы лечили мышей в течение 5 недель, но мышей лечили только в течение двух недель для терапевтического лечения.Таким образом, результаты настоящего исследования не подтверждают влияние чая кудинг на снижение веса в клинических испытаниях, о которых сообщали предыдущие исследователи. Толерантность к глюкозе улучшилась при профилактическом лечении, но была менее эффективной при терапевтическом лечении. Это может быть результатом уменьшения жировой ткани, поскольку отложение ТГ в клетках отвечает за развитие инсулинорезистентности [37] — [39].

По сравнению с водным экстрактом чая кудинг, этанольный экстракт ингибировал дифференцировку адипоцитов адипоцитов 3T3-L1, что позволяет предположить, что жирорастворимые компоненты чая кудинг могут действовать на адипоциты.Химический анализ показал, что этанольный экстракт чая кудинг содержит 11 основных соединений: лупеол, 11-кето-α-амирин пальмитат, α-амирин пальмитат, 12-урсен-3,28-диол, урсоловую кислоту, 3β-гидроксилюп- 20 (29) -ен-30-ал, 3β-гидрокси-20-оксо-30-норлупан, танацетен, β-ситостерин, н-бегеновая кислота и н-гексакозан [22]. Среди них урсоловая кислота изучена на предмет ее воздействия на метаболические нарушения. Например, урсоловая кислота усиливает связывание PPAR-α с PPRE, регулирует экспрессию генов метаболизма липидов и значительно снижает внутриклеточные концентрации триглицеридов и холестерина в гепатоцитах [40], а также снижает массу тела, висцеральное ожирение, уровни глюкозы в крови и плазме. липидов, а также увеличение лептина в плазме у мышей, получавших диету с высоким содержанием жиров [41] — [43].Сообщалось также, что лупеол снижает уровень глюкозы в крови у экспериментальных животных с диабетом [44], [45]. Однако в экстракте, используемом в текущем исследовании, он содержит только 6,48% урсоловой кислоты (около 1/20 использовалось в предыдущих исследованиях), что позволяет предположить, что урсоловая кислота не единственный эффективный компонент. Активные вещества в чае кудинг должны быть исследованы на предмет их роли при метаболических заболеваниях. Или система кишечной проницаемости может быть использована для выяснения механизма воздействия чая кудинг на адипоцит 3T3L1.

Опубликованные данные о механизме действия чая кудинг ограничены, но исследования показывают, что чай кудинг может улучшить метаболические нарушения с помощью нескольких механизмов.Наши данные предполагают, что чай кудинг может предотвращать метаболические нарушения, избирательно воздействуя на ядерные рецепторы факторов транскрипции LXRβ. Семейство LXR представляет собой активируемые лигандом факторы транскрипции, включая LXRα и LXRβ. LXRα экспрессируется главным образом в печени, жировой ткани и макрофагах, тогда как LXRβ экспрессируется повсеместно [5], [6]. Потенциал LXR в качестве мишени для лекарств при гиперлипидемии, AS, диабете, гипертонии и воспалении был ранее показан [46], [47]. Дальнейшее исследование эффектов EK на мышей с нокаутом LXRβ подтвердит сигнальный путь EK.И, вероятно, это позволит идентифицировать ингибирование LXRβ как терапию метаболических заболеваний in vivo.

Предыдущие исследования показали, что агонисты LXR могут снижать уровни TC в сыворотке, но повышать уровни TG в печени и сыворотке, что исключает агонисты LXR в качестве терапии метаболических заболеваний. Разработка селективных агонистов или антагонистов LXR может избежать нецелевых эффектов [19]. Недавно было подтверждено, что два встречающихся в природе соединения, реин и нарингенин, являются антагонистами LXRα / β и LXRα соответственно, и также было показано, что они обладают свойствами снижения гиперлипидемии [48], [49].Kanaya et al. Сообщили, что белые шампиньоны обладают защитным действием против стеатоза печени за счет ингибирования передачи сигналов LXR [50]. Мы показываем, что ЭК селективно ингибирует трансактивность LXRβ в присутствии агониста LXRβ GW3965, предполагая, что ЭК содержит антагонист LXRβ, который конкурентно связывается с LXRβ. Метаболический эффект ингибирования LXRβ с помощью ЭК также проявляется в экспрессии генов. Экспрессия мРНК LXRβ нацелена на гены, которые контролируют окисление жирных кислот, регулируют синтез жирных кислот и холестерина, такие как ABCA1, ABCG1, LPL и ApoE, и значительно ингибируется в печени и жировой ткани мышей, получавших EK.Идентификация этого специфического лиганда LXRβ может привести к новой терапии метаболических заболеваний.

В заключение мы приводим доказательства того, что ЭК защищает от развития ожирения, гиперлипидемии и инсулинорезистентности у мышей, получавших диету с высоким содержанием жиров. Эти данные свидетельствуют о том, что ЭК можно использовать в качестве потенциальной диетической стратегии для предотвращения метаболических нарушений, таких как ожирение, гиперлипидемия, диабет и атеросклероз. Потенциал использования натуральных пищевых добавок для регулирования массы тела и липидного обмена является привлекательным.Поскольку этот традиционный напиток безопасен и дешев, его следует рассматривать как диетическое средство для лечения метаболических синдромов. Это особенно важно, потому что потеря веса и лечение неалкогольной жировой болезни печени малоэффективны в долгосрочной перспективе. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы определить механизмы, с помощью которых этот компонент защищает от ожирения и связанных с ним симптомов.

Чай Кудинг — Императорский Китай Горький травяной чай

Код товара: HT-006

Происхождение: Хайнань, Китай

Минимальный объем заказа: 20 кг

Чай Кудин обладает множеством лечебных свойств

Чай Кудинг или кудинг Ча, также известный как горький чай, одиночный листовой чай лечебный чай, производимый в основном в Китае.Название кудинг происходит от китайских слов Ku, что означает горький, и Ding, китайского слова, обозначающего шип, поскольку листья растения кудинг скручены, образуя длинные узкие шипы. Хотя чай имеет горький вкус, некоторые люди обнаруживают, что он имеет сладкое послевкусие вскоре после того, как они заканчивают пить чай. Многие люди через некоторое время привыкают к чаю, используя его в сочетании с другими чаями или подсластителями, такими как стевия, поскольку он имеет ряд доказанных преимуществ для здоровья. Кудинг ча используется в Китае с 1765 года и раньше назывался Дун Цин.


Процесс приготовления

Этот чай в основном готовится из листьев падуба Ilex kuding cha, которые длинные, узкие и имеют эластичную текстуру. Дерево илекс кудинг ча может расти несколько сотен лет, и эти деревья в основном выращивают в Центральном, Южном Китае и некоторых частях Вьетнама. В Китае уезд Даксин в провинции Гуанси на юго-западе Китая является основным центром производства этих чайных листьев. Листья дерева илекс кудинг ча скручены в длинный кусок, похожий на гвоздь, и обжарены, чтобы произвести кудинг ча в форме шипа.В некоторых случаях листья также можно сушить и скатывать в форму шариков или рулонов для удобной продажи покупателям.


Как заваривать

Из-за горького вкуса чая настоятельно рекомендуется, чтобы пользователь не использовал более трех палочек кудинг ча, обычно достаточно одного или двух шипов, особенно если человек впервые потребляет кудинг ча. На одну-две порции чая требуется не менее 150 мл горячей воды.Для заваривания чая шипы следует замачивать в горячей воде с температурой от восьмидесяти до девяноста градусов по Цельсию не менее одной минуты. Чайные листья можно использовать как минимум дважды или трижды для заваривания чая, увеличивая время замачивания чайных листьев, однако горький вкус, вероятно, уменьшится. Регулярно пьющие чай Кудинг могут использовать больше листьев при заваривании чая.

Как хранить

Чай Кудинг следует хранить в водонепроницаемом контейнере, чтобы он не терял аромат, лечебные ингредиенты и не становился влажным.


Польза для здоровья от чая Kuding

Этот чай чрезвычайно популярен благодаря своей пользе для здоровья и широко используется в традиционной китайской медицине. Он широко используется для снижения артериального давления и помогает в похудании, в основном уменьшая задержку воды в организме. Он улучшает кровообращение, выводит токсины из организма, поскольку содержит антиоксиданты, а также помогает переваривать пищу. Чай используется для улучшения концентрации во время работы и памяти, тем самым повышая продуктивность.Некоторые люди используют чай для лечения различных заболеваний, таких как простуда, лихорадка и головная боль. Заболевания дыхательных путей, такие как бронхит, носовые пазухи, также можно лечить с помощью кудинг ча. Тем не менее, человеку, потребляющему чай, рекомендуется проконсультироваться с врачом, если у него или нее есть медицинские проблемы, такие как низкое кровяное давление, или если он подвергается операции.

Итак, несмотря на горький вкус, Кудинг ча пользуется популярностью во всем мире благодаря своим лечебным свойствам.

Более 10 лет опыта в производстве и экспорте чая, компания Guangzhou Runming Tea Company специализируется на производстве чая кудинг.

Есть несколько основных конкурентных преимуществ нашей компании кудинг ча:

1. Основное преимущество: У нас есть собственная чайная плантационная база , , которая имеет конкурентоспособную цену, для большего количества, цена может быть еще ниже;

2. Контроль качества: Опытная команда по контролю качества всегда строго проверяет продукцию перед упаковкой, чтобы гарантировать доставку высококачественной продукции клиентам;

3.Логотип и пакет: OEM и ODM пакет и индивидуальный логотип;

Мы являемся профессиональным поставщиком чая кудинг .

No related posts.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *