Дмаа герань: DMAA (1,3-dimethylamylamine) Экстракт Герани, 75 mg, 2SN, 50 capsules

DMAA (1,3-dimethylamylamine) Экстракт Герани, 75 mg, 2SN, 50 capsules

DМАА (1,3-диметиламиламин, метилгексанамин, геранамин, герань)  — это невероятно мощное органическое соединение и стимулятор, впервые полученный из масла и стебля герани — растения, которое традиционно используется в парфюмерной промышленности. Благодаря своим стимулирующим свойствам ДМАА получило огромную популярность, как биологически активная добавка, используемая среди спортсменов и бодибилдеров в качестве предтренировочного коктейля, однако вещество, также, имеет широкий спектр ноотропных эффектов, улучшающих умственную работоспособность человека. 

Преимущества 1,3 диметиламиламина

Экстракт герани является стимулятором центральной нервной системы и демонстрирует большое количество потенциальных полезных эффектов, связанных с улучшением познавательных способностей. Предполагается, что стимулирующие эффекты 1,3-диметиламиламина близки к действию других противоотечных агентов, таких как псевдоэфедрин, эфедрин и другие. Некоторые сообщают, что DMAA является безопасной альтернативой эфедрину. В первую очередь, 1,3-диметиламиламин значительно увеличивает степень энергии и внимания. За рубежом добавка применяется многими людьми, начиная от спортсменов и студентов и заканчивая домохозяйками и офисными работниками. Кроме того, DMAA может усиливать ощущения и даже вызывать чувство эйфории (что, вероятно, связано с увеличением выпуска дофамина).

Добавку особенно полюбили спортсмены, тренирующихся с большими весами.  ДМАА часто используется как отличная предтренировочная добавка благодаря своей способности увеличивать приток кислорода и энергии к мышцам. Способствуя усилению фокуса и мотивации, препарат может снижать чувствительность к боли, увеличивать выносливость и позволять проводить мощные и интенсивные тренировки. Действие DMAA длится не намного дольше, чем действие кофеина, однако пользователи обычно ощущают повышенную энергию и внимание в течение нескольких часов после приема DMAA. Обычно у пользователей, которые не испытывают упадка сил после окончания действия 1,3-диметиламиламина, положительные эффекты вещества проявляются дольше. Во многих предтренировочных комплексах и энергетических добавках 1,3-диметиламиламин сочетается с кофеином и другими стимуляторами, однако вещество также может применяться в отдельности. 

1. DMAA как мягкий стимулятор

DMAA часто используется в качестве стимулятора для максимизации возможностей организма. 1,3 диметиламиламин, также, может увеличивать силу и выносливость у культуристов. Вещество действует, увеличивая внимание и концентрацию вскоре после приема. DMAA часто используется в качестве предтренировочной добавки, а также, как средство для увеличения концентрации и внимания при подготовке к экзаменам. Внимание! Использование DMAA является запрещенным в профессиональном спорте.

2. DMAA как энергетик
Как и многие другие стимуляторы, 1,3-диметиламиламин увеличивает интенсивность энергии во время тренировки. Через 20-25 минут после приема DMAA у пользователя может наблюдаться покраснение и покалывание кожи.
3. DMAA как жиросжигатель
Существует ряд доказательств того, что добавки, содержащие DMAA, могут применяться в качестве жиросжигателей. В сочетании с другими ингредиентами, такими как кофеин, вещество значительно уменьшает вес тела, общее содержание жира и аппетит, по сравнению с плацебо. Было также установлено, что скорость жиросжигания при приеме DMAA увеличилась на более чем 169%, по сравнению с плацебо, а скорость обмена веществ – на 35%, по сравнению с плацебо.
4. DMAA как добавка для бодибилдинга
DMAA повышает кровяное давление в зависимости от дозы, не вызывая увеличения частоты сердечных сокращений. Это означает, что в действительности DMAA является сосудосуживающим веществом. Хотя вещество не вполне подходит для применения перед соревнованиями по бодибилдингу, DMAA достаточно эффективно увеличивает производительность во время тренировок. Ограничение потока крови – это эффективный способ стимуляции мышечной гипертрофии при гораздо менее интенсивных тренировках.

Дозировка 1,3 диметиламиламина в предтренеровочных комплексах

Обычно в предтренеровочных комплексах дозировка DMAA составляет от 75 до 120 мг в день. Эту дозу часто разбивают на несколько приемов, однако обычно практикуется прием препарата один раз в день. Препарат часто используется за 30 минут до интенсивных учебных занятий или тренировки или другой деятельности, при которой необходим дополнительный приток энергии. Положительные эффекты этой добавки могут длиться в течение нескольких часов, а без мощных затрат энергии – еще дольше. Рекомендуемая дозировка DMAA составляет 100 мг вещества в комплексе с 200 мг кофеина. В дальнейшем, Вы сможете подобрать дозировку индивидуально, исходя из собственных ощущений и потребностей.

Побочные эффекты 1,3-диметиламиламина

Наиболее распространенным побочным эффектом 1,3-диметиламиламина является заметное снижение энергии и вялость через несколько часов после начала действия DMAA. Некоторые люди, однако, вообще не испытывают такого эффекта. Дополнительным побочным эффектом может выступать значительное повышение артериального давления. В очень редких случаях DMAA может также вызывать увеличение частоты сердечных сокращений.

Большая часть опасных побочных эффектов, о которых сообщает FDA, обусловлены приемом доз, намного выше рекомендуемых. В большинстве таких случаев пользователи принимают до 500 или даже 1000 мг вещества в день, что очень опасно. Настоятельно рекомендуем придерживаться дозировки и не употреблять больше 100 мг вещества в день.

 

Является ли 1,3 диметиламиламин (ДМАА) легальным?

Сомнения в легальности любого продукта, используемого для повышения производительности во время тренировок, довольно разумны. К счастью, 1,3 диметиламиламин является легальным в большинстве стран мира, кроме Канады, Австралии или Великобритании. FDA США также поставила под сомнение безопасность ДМАА и запретила использование ДМАА в качестве БАД и поэтому производители некоторых добавок перестали использовать его в их составе. В отличии от многих других стимуляторов, подобных эфедрину — ДМАА является абсолютно легальным веществом в России.

Некоторые из эффектов ДМАА напоминают действие препаратов допинга, которые были запрещены в разных странах мира, в связи с чем использование ДМАА было запрещено в профессиональном спорте и добавлено WADA в список запрещенных к применению  препаратов.
Некоторые исследования показывают, что действие DMAA близко к действию эфедрина, но является гораздо более слабым. DMAA классифицируется как мягкий стимулятор, по сравнению с эфедрином, кофеином и другими стимуляторами. Вещество безопасно для лиц, придерживающихся здорового питания и активного образа жизни.

DMAA (герань) обладает стимулирующими свойствами в 4-10 раз сильнее, чем кофеин. Используется в производстве спортивного питания (в жиросжигающих и предтренировочных комплексах). Максимальная суточная доза — 100 мг.

Эффекты от использования:
— повышение работоспособности;
— психо-физическая стимуляция;
— усиление сжигание жира;
— подавление аппетита;
— улучшение настроения;
— фокусировка сознания.

DMAA 10 капсул

DMAA (1,3-диметиламиламин, метилгексанамин, геранамин, герань)  — это невероятно мощное органическое соединение и стимулятор, впервые полученный из масла и стебля герани — растения, которое традиционно используется в парфюмерной промышленности. Благодаря своим стимулирующим свойствам ДМАА получило огромную популярность, как биологически активная добавка, используемая среди спортсменов и бодибилдеров в качестве предтренировочного коктейля, однако вещество, также, имеет широкий спектр ноотропных эффектов, улучшающих умственную работоспособность человека. Некоторые исследователи рассматривают Геранамин в качестве ноотропного агента, поскольку вещество способно вызывать значительное увеличение энергии и концентрации.

Преимущества 1,3 диметиламиламина

Экстракт герани является стимулятором центральной нервной системы и демонстрирует большое количество потенциальных полезных эффектов, связанных с улучшением познавательных способностей. Предполагается, что стимулирующие эффекты 1,3-диметиламиламина близки к действию других противоотечных агентов, таких как псевдоэфедрин, эфедрин и другие. Некоторые сообщают, что DMAA является безопасной альтернативой эфедрину. В первую очередь, 1,3-диметиламиламин значительно увеличивает степень энергии и внимания. За рубежом добавка применяется многими людьми, начиная от спортсменов и студентов и заканчивая домохозяйками и офисными работниками. Кроме того, DMAA может усиливать ощущения и даже вызывать чувство эйфории (что, вероятно, связано с увеличением выпуска дофамина).

Добавку особенно полюбили спортсмены, тренирующиеся с большими весами.  ДМАА часто используется, как отличная предтренировочная добавка благодаря своей способности увеличивать приток кислорода и энергии к мышцам. Способствуя усилению фокуса и мотивации, препарат может снижать чувствительность к боли, увеличивать выносливость и позволять проводить мощные и интенсивные тренировки. Действие DMAA длится не намного дольше, чем действие кофеина, однако пользователи обычно ощущают повышенную энергию и внимание в течение нескольких часов после приема DMAA. Обычно у пользователей, которые не испытывают упадка сил после окончания действия 1,3-диметиламиламина, положительные эффекты вещества проявляются дольше. Во многих предтренировочных комплексах и энергетических добавках 1,3-диметиламиламин сочетается с кофеином и другими стимуляторами, однако вещество также может применяться в отдельности. 

1. DMAA как мягкий стимулятор

DMAA часто используется в качестве стимулятора для максимизации возможностей организма. 1,3 диметиламиламин, также, может увеличивать силу и выносливость у культуристов. Вещество действует, увеличивая внимание и концентрацию вскоре после приема. DMAA часто используется в качестве предтренировочной добавки, а так же, как средство для увеличения концентрации и внимания при подготовке к экзаменам. Внимание! Использование DMAA является запрещенным в профессиональном спорте.

2. DMAA как энергетик

Как и многие другие стимуляторы, 1,3-диметиламиламин увеличивает интенсивность энергии во время тренировки. Через 20-25 минут после приема DMAA у пользователя может наблюдаться покраснение и покалывание кожи.

3. DMAA как жиросжигатель

Существует ряд доказательств того, что добавки, содержащие DMAA, могут применяться в качестве жиросжигателей. В сочетании с другими ингредиентами, такими как кофеин, вещество значительно уменьшает вес тела, общее содержание жира и аппетит, по сравнению с плацебо. Было также установлено, что скорость жиросжигания при приеме DMAA увеличилась на более чем 169%, по сравнению с плацебо, а скорость обмена веществ – на 35%, по сравнению с плацебо.

4. DMAA как добавка для бодибилдинга

DMAA повышает кровяное давление в зависимости от дозы, не вызывая увеличения частоты сердечных сокращений. Это означает, что в действительности DMAA является сосудосуживающим веществом. Хотя вещество не вполне подходит для применения перед соревнованиями по бодибилдингу, DMAA достаточно эффективно увеличивает производительность во время тренировок. Ограничение потока крови – это эффективный способ стимуляции мышечной гипертрофии при гораздо менее интенсивных тренировках. 

Дозировка 1,3 диметиламиламина в предтренеровочных комплексах

Обычно в предтренеровочных комплексах дозировка DMAA составляет от 75 до 120 мг в день. Эту дозу часто разбивают на несколько приемов, однако обычно практикуется прием препарата один раз в день. Препарат часто используется за 30 минут до интенсивных учебных занятий или тренировки или другой деятельности, при которой необходим дополнительный приток энергии. Положительные эффекты этой добавки могут длиться в течение нескольких часов, а без мощных затрат энергии – еще дольше. Дозировка, рекомендуемая, составляет 100 мг вещества в комплексе с 200 мг кофеина. В дальнейшем, Вы сможете подобрать дозировку индивидуально, исходя из собственных ощущений и потребностей.

Побочные эффекты 1,3-диметиламиламина

Наиболее распространенным побочным эффектом 1,3-диметиламиламина является заметное снижение энергии и вялость через несколько часов после начала действия DMAA. Некоторые люди, однако, вообще не испытывают такого эффекта. Дополнительным побочным эффектом может выступать значительное повышение артериального давления. В очень редких случаях DMAA может также вызывать увеличение частоты сердечных сокращений.

Большая часть опасных побочных эффектов, о которых сообщает FDA, обусловлены приемом доз, намного выше рекомендуемых. В большинстве таких случаев пользователи принимают до 500 или даже 1000 мг вещества в день, что очень опасно. Настоятельно рекомендуем придерживаться дозировки и не употреблять больше 150 мг вещества в день.

Рекомендации по применению:

Внимание! Очень мощная штука!

Начните принимать по пол капсулы!

Вскройте и высыпьте половину в стакан с водой, вторую половинку на следующий раз!

За полчаса перед тренировкой.

Нельзя принимать более 2-х капсул в сутки!!!

1,3 Dimethylamylamine Чистая герань (DMAA)

Главная \ 1,3Dimethylamylamine (DMAA)

DMAA – чрезвычайно популярный и очень мощный стимулятор ЦНС, обеспечивает эйфорию, приподнятое настроение, интенсивность энергии, адреналин, ясность ума!

ДМАА является стимулятором центральной нервной системы и демонстрирует большое количество потенциальных полезных эффектов, связанных с улучшением познавательных способностей.

Предполагается, что стимулирующие эффекты 1,3-диметиламиламина близки к действию других противоотечных агентов, таких как псевдоэфедрин, эфедрин и другие.

Некоторые сообщают, что DMAA является безопасной альтернативой эфедрину.

Однако для поддержания этого утверждения нет научной базы.

В первую очередь, 1,3-диметиламиламин значительно увеличивает степень энергии и внимания. За рубежом добавка применяется многими людьми, начиная от спортсменов и студентов и заканчивая домохозяйками и офисными работниками.

Кроме того, DMAA может усиливать ощущения и даже вызывать чувство эйфории (что, вероятно, связано с увеличением выпуска дофамина).

Добавку особенно полюбили спортсмены, тренирующихся с большими весами. 

DMAA часто используется как отличная предтренировочная добавка благодаря своей способности увеличивать приток кислорода и энергии к мышцам.

Способствуя усилению фокуса и мотивации, препарат может снижать чувствительность к боли, увеличивать выносливость и позволять проводить мощные и интенсивные тренировки.

ДМАА (DMAA, Герань) 50mg + Кофеин 50mg

Описание ДМАА (DMAA, Герань) 50mg + Кофеин 50mg — 50 капсул

ДМАА, Экстракт герани, DMAA или 1,3-диметиламиламин (а так же: 1,3-диметилпентиламин, метилгексанамин, 2-амино-4-метилгексан, геранамин) — это моноамин со стимулирующим и эйфорическим действием, схожий по действию с кофеином. В головном мозге 1,3-диметиламиламин влияет на настроение и эмоции, увеличивает ментальную сосредоточенность. Это связано с повышением концентрации дофамина и норадреналина в межсинаптических пространствах. DMAA считается от четырех до десяти раз сильнее, чем кофеин, при этом не вызывая токсичности и вреда для организма. Часто включается в спортивное питание для улучшения производительности и сжигания жира.

Эффекты от принятия DMAA (Экстракт герани):

• Фокусировка на тренировке
• Повышение работоспособности
• Улучшение настроения
• Усиление липолиза (сжигание жира)
• Подавление аппетита

Действие метилгексанамина (ДМАА) потенцирует (усиливает) другие стимуляторы, в том числе кофеин бензоат натрия.
Внимание! Использование DMAA является запрещенным в профессиональном спорте. Как правило проверка на ДМАА не входит в стандартные допинг-тесты, но может быть обнаружена в образцах мочи (метод жидкостной хроматографии). По данным Analytical Chem Insights после приема дозы 40 мг время обнаружения DMAA или 1,3-диметиламиламин достигает 105 часов. Ускорить выведение Герани из организма позволяет метод форсированного диуреза.

 

Побочные эффекты ДМАА (если превышена дозировка):

• Дрожь
• Потливость
• Психическое возбуждение
• Бессонница
• Тошнота
• Головная боль
• Повышение артериального давления, тахикардия, инсульт (при значительном превышении рекомендуемой дозы)

Caffeine 50 mg — психостимулирующее и аналептическое средство. Алкалоид пуринового ряда, содержащийся в семенах кофе, листьях чая, плодах южноамериканской паулинин (гаурана), орехах западноафриканского растения кола, бобах какао и луковицах морского лука. Кофеин это алкалоид; к этому классу веществ относятся метилксантины, с тремя различными соединениями — кофеином, теофиллином и теобромином, которые находятся в гуаране, орехах колы, кофе, чае, бобах какао, матэ и других растениях. Эти соединения обладают различными биохимическими эффектами и присутствуют в различных количествах в самих растениях. Кофеин — самый популярный из них. Это мощный стимулянт центральной нервной системы. Умеренное его использование всеми людьми считается полезным. Кофеин был открыт в 1820 г., а в 1838 г. было обнаружено, что теин, находящийся в чае, идентичен кофеину.
Использование кофеина в качестве предтренировочного энергетика гарантирует повышение психической концентрации, дает дополнительную энергию для тренировок, замедляет возникновение усталости, помогает быстрее восстанавливаться между подходами.
Противопоказан при повышенной возбудимости, бессоннице, выраженной гипертонии и атеросклерозе, органических заболеваниях сердечно-сосудистой системы, в старческом возрасте, при глаукоме.

Рекомендации по применению ДМАА, Экстракт герани, DMAA:

Дозировка колеблется от 50 до 200 мг за 40 минут до тренировки.
Не рекомендуем принимать дозу более 140 мг (2 капсулы). Не принимайте Экстракт герани каждый день, так как это вызывает привыкание. Также не рекомендуем принимать добавку утром на пустой желудок.

 

Противопоказания: прием экстракта Герани противопоказанлицам до 18 лет,  беременным и кормящим женщинам, лицам с заболеваниями сердечно-сосудистой системы и лицам с психическими расстройствами (шизофрения и т.п.).
Примечание: Продукт не является лекарственным средством.

Важно:
Препарат предназначен ТОЛЬКО для использования лицами старше 18 лет.
Нельзя принимать с медикаментами и алкоголем.
Запрещается принимать препарат лицам имеющим проблемы с сердцем, сердечнососудистой системой и повышенной восприимчивостью к стимуляторам.
Не принимайте менее чем за 6 часов до сна.
Перед началом приема продукта обязательно проконсультируйтесь у специалиста по спортивному питанию.
Продукт не является заменителем пищи.
Нельзя давать детям и беременным.
Условия хранения: хранить в сухом, прохладном, недоступном для детей месте.

DMAA (герань): какой эффект, как принимать?

DMAA (герань): какой эффект, как принимать?

| |

Автор: Спорт Еда — магазин спортивного питания.
Дата: 2019-07-01

Все статьи автора >

DMAA – так называют популярную спортивную добавку «экстракт герани». Это один из самых известных стимуляторов для тренировок. Мало кто знает, но изначально DMAA создавался как препарат для снятия симптомов заложенности носа. Позже выяснилось, что у компонента хорошие свойства, как у энергетика.

В России этот компонент известен с 2013 года, когда в продажу поступили первые предтреники и жиросжигатели с ним. С тех пор популярность «герани» только растет. На обывательских форумах про DMAA пишут восторженные отзывы, что это «легальный допинг». Есть, конечно, и негативные отзывы.

В этой статье мы расскажем, какие эффекты дает DMAA. С чем можно сочетать этот компонент, а с чем нельзя. Какие дозировки компонента считаются нормальными, а какие высокими.

Легален ли в России компонент DMAA?

Да. Он легален. По состоянию на 2019 год, можно в интернете найти предтреники, которые даже получили свидетельства о госрегистрации. Что подтверждает безопасность продукции.

Препараты с содержанием DMAA можно продавать и покупать. Но, важный момент — допинговые агентства давно запретили этот компонент, еще в 2010 году. Поэтому, если вы профессиональный спортсмен, принимать герань вам нельзя.

Какие эффекты оказывает герань?

Экстракт герани:

• помогает сжигать жир
• улучшает память
• помогает тренироваться дольше

Нужно отдавать себе отчет, что после прекращения приема препарата, эффекты, которые оказывает препарат, пропадают. Если вам было лень тренироваться, и DMAA давал энергию и мотивацию, то после прекращения приема лень никуда не уйдет.

В последние годы DMAA стал популярен не только среди спортсменов. Его используют те, то практикует прием легальных стимуляторов.

Как герань маркируется на этикетке?

По-разному. Вот самые распространенные наименования:

• 1,3-Dimethylamylamine
• DMAA
• DMAA Hcl
• Methylhexamine
• Methylhexanamine
• Methylhexanamine Hcl
• Geranium oil
• 4-methylhexan-2-amine

И это не все. Могут быть и другие маркировки. Не путайте DMAA с DMAE и DHEA – это все разные компоненты с разными действиями.

DMAA добывают из растения, из комнатной герани?

На самом деле нет. Как ни пытались доказать в судах американские производители спортивного питания, что DMAA содержится в растении. Нет, нет и нет. То, что добавляют в спортивные добавки — синтезировано в лабораториях.

Но это не говорит о том, что продукт однозначно небезопасен.

В статье мы называем DMAA геранью, потому что такое название прижилось в России. «Герань, геранька» — так называют компонент многие, кто использовал этот стимулятор.

Какие дозировки считаются нормальными?

В добавках можно встретить разные дозировки DMAA. От 10-20 мг до 100 мг на порцию.

В среднем, разброс дозировок выглядит так:

Слабая дозировка	Средняя дозировка	Высокая дозировка
5-20 мг/сутки	20-50 мг/сутки	50-100 мг/сутки

Если у вас DMAA с дозировкой 75 мг, то принимайте по одной капсуле в сутки. Увеличивать дозировку лучше не стоит. Если у вас DMAA с дозировкой 50 мг, то можете начать с одной капсулы. Потом перейти на две капсулы в сутки (100 мг DMAA в сутки).

Женщинам можно принимать DMAA. Никаких ограничений для приема нет. Но, подбирайте, пожалуйста, правильную дозировку.

Не рекомендуем приобретать герань в порошке. Если у вас нет весов, вам будет трудно дозировать препарат.

Сколько длится эффект?

Когда вы принимаете DMAA в жидком виде или в капсулах, требуется 8 минут, чтобы он попал в кровь. Он действует в организме в среднем 8,5 часов. Требуется около суток для полного выведения компонента из организма.

Есть ли побочки?

Конечно, побочные эффекты могут быть, и вам стоит знать про них.

DMAA может:

• плохо влиять на печень
• учащать биение сердца и повышать кровяное давление
• вызывать тошноту или рвоту

Кроме того, при длительном употреблении, как и многих стимуляторов, возможно привыкание. Понадобится увеличивать дозировку или сделать перерыв.

Какие продукты с DMAA сейчас доступны?

• Hell Labs DMAA (раньше этот продукт назывался 2SN DMAA) – содержит 75 мг герани на порцию.
• 2SN DMAA+Caffeine (в составе содержится 50 мг герани и 50 мг безводного кофеина).
• Hell Labs Popolam – в составе есть DMAA, а также похожие на него стимуляторы (DMHA и AMP Citrate). Вместе они встречаются редко в предтрениках.
• Core Labs Hyper Power – предтреник с мощным составом. В составе есть DMAA и еще несколько стимуляторов.
• Red Labs Oxy Red – жиросжигатель, в составе есть DMAA.

Вы можете найти в продаже другие препараты с содержанием DMAA. Обычно, они все содержат именно этот компонент и обладают заявленные эффектами.

С чем можно сочетать герань?

DMAA сочетается с другими стимуляторами. Но вам нужно обращать внимание на дозировки. Если у вас уже высокая дозировка DMAA, не перебарщивайте — другие стимуляторы должны быть в небольших дозировках.

Вы можете принимать DMAA параллельно со своими обычными спортивными добавками:

Если у вас в предтренике DMAA, а вы хотите принимать еще жиросжигатель с DMAA – это плохая идея. Лучше оставить что-то одно.

На некоторых форумах вы найдете разные отзывы про дозировки DMAA и кто с чем сочетает этот компонент. Один из вариантов: DMAA + Фенибут. Один наш клиент принимал такую смесь (ее называют ДМААБут) и очень хорошо отзывался. Но мы не рекомендуем использовать такое сочетание — слишком разная направленность компонентов. DMAA – стимулятор, а фенибут оказывает седативный эффект. Это мало кому подходит.

Надеемся, статья была полезной. Напишите в комментариях, принимали ли вы DMAA, и как на вас подействовал этот компонент?

ПОХОЖИЕ СТАТЬИ

1. Предтреники с геранью на 2019 г: где она есть, а откуда пропала?
2. 5 лучших жиросжигателей с геранью на 2019 г.
3. Какое спортивное питание подходит для похудения?
4. Подделка спортивного питания: правда и мифы
5. Полный набор спортивного питания для сжигания жира

DMAA + Caffeine — герань с кофеином

DMAA (1,3-диметиламиламин, метилгексанамин, геранамин, герань)  — это невероятно мощное органическое соединение и стимулятор, впервые полученный из масла и стебля герани — растения, которое традиционно используется в парфюмерной промышленности. Благодаря своим стимулирующим свойствам ДМАА получило огромную популярность, как биологически активная добавка, используемая среди спортсменов и бодибилдеров в качестве предтренировочного коктейля, однако вещество, также, имеет широкий спектр ноотропных эффектов, улучшающих умственную работоспособность человека. Некоторые исследователи рассматривают Геранамин в качестве ноотропного агента, поскольку вещество способно вызывать значительное увеличение энергии и концентрации.​

Преимущества 1,3 диметиламиламина

Экстракт герани является стимулятором центральной нервной системы и демонстрирует большое количество потенциальных полезных эффектов, связанных с улучшением познавательных способностей. Предполагается, что стимулирующие эффекты 1,3-диметиламиламина близки к действию других противоотечных агентов, таких как псевдоэфедрин, эфедрин и другие. Некоторые сообщают, что DMAA является безопасной альтернативой эфедрину. В первую очередь, 1,3-диметиламиламин значительно увеличивает степень энергии и внимания. За рубежом добавка применяется многими людьми, начиная от спортсменов и студентов и заканчивая домохозяйками и офисными работниками. Кроме того, DMAA может усиливать ощущения и даже вызывать чувство эйфории (что, вероятно, связано с увеличением выпуска дофамина).
Добавку особенно полюбили спортсмены, тренирующиеся с большими весами.  ДМАА часто используется, как отличная предтренировочная добавка благодаря своей способности увеличивать приток кислорода и энергии к мышцам. Способствуя усилению фокуса и мотивации, препарат может снижать чувствительность к боли, увеличивать выносливость и позволять проводить мощные и интенсивные тренировки. Действие DMAA длится не намного дольше, чем действие кофеина, однако пользователи обычно ощущают повышенную энергию и внимание в течение нескольких часов после приема DMAA. Обычно у пользователей, которые не испытывают упадка сил после окончания действия 1,3-диметиламиламина, положительные эффекты вещества проявляются дольше. Во многих предтренировочных комплексах и энергетических добавках 1,3-диметиламиламин сочетается с кофеином и другими стимуляторами, однако вещество также может применяться в отдельности. 

1. DMAA как мягкий стимулятор
DMAA часто используется в качестве стимулятора для максимизации возможностей организма. 1,3 диметиламиламин, также, может увеличивать силу и выносливость у культуристов. Вещество действует, увеличивая внимание и концентрацию вскоре после приема. DMAA часто используется в качестве предтренировочной добавки, а так же, как средство для увеличения концентрации и внимания при подготовке к экзаменам. Внимание! Использование DMAA является запрещенным в профессиональном спорте.

2. DMAA как энергетик
Как и многие другие стимуляторы, 1,3-диметиламиламин увеличивает интенсивность энергии во время тренировки. Через 20-25 минут после приема DMAA у пользователя может наблюдаться покраснение и покалывание кожи.

3. DMAA как жиросжигатель
Существует ряд доказательств того, что добавки, содержащие DMAA, могут применяться в качестве жиросжигателей. В сочетании с другими ингредиентами, такими как кофеин, вещество значительно уменьшает вес тела, общее содержание жира и аппетит, по сравнению с плацебо. Было также установлено, что скорость жиросжигания при приеме DMAA увеличилась на более чем 169%, по сравнению с плацебо, а скорость обмена веществ – на 35%, по сравнению с плацебо.

4. DMAA как добавка для бодибилдинга
DMAA повышает кровяное давление в зависимости от дозы, не вызывая увеличения частоты сердечных сокращений. Это означает, что в действительности DMAA является сосудосуживающим веществом. Хотя вещество не вполне подходит для применения перед соревнованиями по бодибилдингу, DMAA достаточно эффективно увеличивает производительность во время тренировок. Ограничение потока крови – это эффективный способ стимуляции мышечной гипертрофии при гораздо менее интенсивных тренировках.

Дозировка 1,3 диметиламиламина в предтренеровочных комплексах

 Обычно в предтренеровочных комплексах дозировка DMAA составляет от 75 до 120 мг в день. Эту дозу часто разбивают на несколько приемов, однако обычно практикуется прием препарата один раз в день. Препарат часто используется за 30 минут до интенсивных учебных занятий или тренировки или другой деятельности, при которой необходим дополнительный приток энергии. Положительные эффекты этой добавки могут длиться в течение нескольких часов, а без мощных затрат энергии – еще дольше. Дозировка, рекомендуемая DMAA Store, составляет 100 мг вещества в комплексе с 200 мг кофеина. В дальнейшем, Вы сможете подобрать дозировку индивидуально, исходя из собственных ощущений и потребностей.

Побочные эффекты 1,3-диметиламиламина

 Наиболее распространенным побочным эффектом 1,3-диметиламиламина является заметное снижение энергии и вялость через несколько часов после начала действия DMAA. Некоторые люди, однако, вообще не испытывают такого эффекта. Дополнительным побочным эффектом может выступать значительное повышение артериального давления. В очень редких случаях DMAA может также вызывать увеличение частоты сердечных сокращений.

Большая часть опасных побочных эффектов, о которых сообщает FDA, обусловлены приемом доз, намного выше рекомендуемых. В большинстве таких случаев пользователи принимают до 500 или даже 1000 мг вещества в день, что очень опасно. Настоятельно рекомендуем придерживаться дозировки и не употреблять больше 150 мг вещества в день.

Содержание питательных веществ в одной порции (1 капс.):

• ДМАА (DMAA, 1,3-Dimethylamylamine, Геранамин) 50 мг. 
• Безводный Кофеин (Caffeine Anhydrous) 100 мг

Принимайте по одной капсуле в день.

DMAA (1,3-диметиламиламин, «герань») безопасна. Об этом говорит токсикологический отчет

Статьи >

Поделиться

Поделиться

Твитнуть

Класснуть

Возможно, вас заинтересует: DMHA (октодрин, 2-аминоизогептан) — стимулятор аналог «герани» (DMAA). Часть 1.

В прошлой статье обзоре DMAA мы опубликовали доказательства, которые развеяли сомнения в том, что ДМАА является натуральным, так как он действительно обнаружен в герани. Последние раскрытые документы в судебном процессе Hi-Tech Pharmaceuticals против FDA (Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов — агентство Министерства здравоохранения и социальных служб США) показывают бесполезную и целенаправленную коррупционную линию и прикрытие правительством, а также другими вовлеченными третьими сторонами лжи, которую рассказывают общественности о действительной природе ДМАА.

Предтренировочник Jack’d Up от Hi-Tech Pharmaceuticals — копия оригинального состава Jack3D от USP Labs. Сама прародительница предтренов с геранью USP Labs прекратила выпускать оригинальный Jack3D, выпустив версию без ДМАА Jack3d Advanced.

Эпический правовой конфликт о ДМАА постепенно заканчивается, и мы нашли огромное количество сведений о сговоре для совершения мошенничества, оплаченного налогоплательщиками.

Однако, несмотря на то, что натуральное происхождение ДМАА было доказано, некоторые читатели всегда считали, что это так, и больше заботились о безопасности ДМАА относительно доз, используемых в добавках.

Во время судебного разбирательства был представлен 586-страничный PDF-документ, содержащий только первые доказательства, представленные адвокатом Hi-Tech Pharma Джеком Вэником. В том числе доказательство 2 – токсикологический отчет доктора Майкла Лумпкина (http://www.webcitation.org/6cZi3FUku), старшего токсиколога из Центра токсикологии и гигиены окружающей среды, LLC (CTEH®), который представил следующую информацию под страхом наказания за лжесвидетельство.

Отчет по токсикологии и безопасности ДМАА

Ниже приведен краткий список того, что обнаружил Лумпкин, после рассмотрения всех доказательств, известных о ДМАА, включая данные, которые мы раньше никогда не видели:

• ДМАА безопасен в дозах, рекомендованных на этикетках Hi-Tech.

Все проведенные исследования показывают, что ДМАА безопасен для здоровых людей при использовании в указанных на этикетках Hi-Tech дозах, которые составляют 90 мг или менее.

Хотя воздействие ДМАА может привести к умеренному увеличению систолического и диастолического артериального давления, тремору и другим симптомам при достаточных концентрациях и дозах (т.е. более 100 мг), нет данных о том, что прием ДМАА в концентрациях, обнаруженных в пищевых добавках Hi-Tech, и в соответствии с указанными на этикетках дозами приводит к каким-либо неблагоприятным последствиям для здоровья.

К сожалению, «безопасная максимальная суточная доза» не установлена, но 90 мг кажется наиболее подходящей дозой для большинства среднестатистических пользователей, которая будет оставаться консервативной.

• Наихудшие нежелательные явления ДМАА проявляются при грубом злоупотреблении

В двух исследованиях (Gee et al., 2010, 2012) сообщается о четырех случаях церебрального инсульта, которые произошли при развлекательном использовании ДМАА в качестве препарата для вечеринки в дозах в десять раз превышающих рекомендованные в пищевых добавках.

Эти таблетки содержали до 600 мг ДМАА, что более чем в шесть раз превышает дозу в порции любой добавки Hi-Tech Pharmaceuticals.

Более того, в трех из четырех случаев было сопутствующее употребление алкоголя.

Кроме того, аналогичный вид злоупотребления был представлен в ныне опровергнутом неправомерном случае смерти от Jack3d.

Продукт должен применяться в соответствии с указанием: НЕ ИСПОЛЬЗОВАТЬ КАКОЙ-ЛИБО ДИЕТИЧЕСКИЙ ИНГРЕДИЕНТ ТАКИМ ОБРАЗОМ и не использовать сомнительные продукты! Никогда не смешивать с алкоголем и никогда не принимать больше максимальной дозы, указанной на упаковке!

Негативные статьи в прессе, появившиеся в связи с этими инцидентами, сильно повлияли на рынок спортивных добавок, несмотря на то, что ни одна компания спортивного питания никогда не рекомендовала такие большие дозы.

«Отсутствуют доказательства того, что прием ДМАА в концентрациях, содержащихся в пищевых добавках Hi-Tech, и в соответствии с дозами, рекомендованными на этикетках, могут привести к нежелательным эффектам для здоровья».

— Доктор Майкл Лумпкин, токсиколог.

ДМАА безопасен при использовании по назначению.

• Солдаты, принимающие ДМАА, на 40% реже имели побочные эффекты

В отчете по токсикологии используется отчет полковника Джона Ламми из министерства обороны, в котором были представлены самые обширные данные по использованию ДМАА людьми.

Из отчета Министерства обороны:

У солдат, принимавших ДМАА в 2011 году, почти на 40% снижались шансы возникновения неблагоприятного медицинского состояния (исходный КР: 0,63; 95% ДИ: 0,47; 0,84), хотя этот эффект уменьшился и потерял статистическую значимость при корректировке для ковариатов (скорректированный КР: 0,85; 95% ДИ: 0,59; 1,23) (Таблица 4B).

Таким образом, несмотря на то, что в вооруженных силах были зафиксированы некоторые неблагоприятные явления у людей, которые, принимали ДМАА (многие из них с очень низким уровнем в крови), в конце концов, Министерство обороны сообщило, что у потребителей ДМАА было меньше неблагоприятных явлений.

Теперь осознайте, что корреляция не означает причинности – это, вероятно, из-за того, что пользователи Jack3d были более здоровыми, более фитнес-ориентированными спортсменами в армии, поэтому они, вероятно, были лучше приспособлены, чем контрольная группа.

Нельзя избежать травм во время военной подготовки – с добавками или без них, особенно в плохую погоду. Но в любом случае пользователи ДМАА, в конечном итоге, имели меньше побочных эффектов и эти данные не могут быть опровергнуты.

• Витамин C имеет больше побочных эффектов, чем ДМАА

В период с 22 июля 2005 года по 29 апреля 2015 года было предоставлено 35 отчетов о нежелательных явлениях, связанных с продуктами Hi-Tech Pharmaceuticals, однако Hi-Tech Pharma продала 3.755.578 единиц продукции с октября 2010 года по 2015 год. Если бы каждая капсула была принята, то это было бы в общей сложности 205.674.645 порций за последние пять лет.

Только в шести из этих неблагоприятных явлений конкретно упоминается ДМАА – в остальных 29 сказано «неизвестно», но их также можно включить, чтобы оставаться консервативными (максимально осторожными).

Сравните это с витамином С, у которого был 4771 отчет о нежелательных явлениях в период с 2012 года по 2014 года, из которых 7 были связаны со смертью и 2530 были классифицированы как угроза жизни, потеря трудоспособности или необходимость госпитализации. Значения для поливитаминов еще выше.

Теперь доктор Лумкин открыто признает, что «Это сравнение не предполагает, что витамин С или поливитаминные пищевые добавки несут более высокий риск неблагоприятного воздействия на здоровье, чем ДМАА. В США в течение этого периода времени, скорее всего, было больше потребителей витамина С и поливитаминных комплексов, чем потребителей ДМАА-содержащих продуктов». Он добавляет, что «однако, он предполагает, что данные из отчетов о нежелательных явлениях должны использоваться в качестве триггера для дальнейшего, более тщательного расследования, а не для безапелляционного установления причин заболевания, или в качестве единой базы для деклараций-лозунгов в сфере общественного здравоохранения».

APS Mesomorph с ДМАА — никакого эффекта плацебо, но меньше нежелательных явлений, чем у витамина С. Используйте по назначению!

В чем причина нежелательных явлений? Эффект плацебо и неудовлетворительные производственные процессы.

Суть в том, что уровень нежелательных явлений для ДМАА чрезвычайно низкий. Добавки витамина С почти абсолютно безопасны, так почему же так много нежелательных явлений? Две идеи:

1. Эффект плацебо влияет на нежелательные явления так же, как и на положительные эффекты.

Были ли эти нежелательные явления действительно нежелательными явлениями и связаны ли они с витамином C (или ДМАА)?

Как вы можете быть уверены в этом, зная, насколько безопасно что-то вроде витамина C, и при этом видя огромное количество нежелательных явлений? Это дает доктору Ламберту аргумент, что нежелательных явлений недостаточно для установления причин заболевания.

2. Существуют некоторые ужасные производители, но Hi-Tech не является одним из них

Если какой-то витамин С действительно привел к возникновению проблем, то существует большая вероятность, что мягко говоря это был не очень качественно изготовленный витамин С. Таким образом, в следующем пункте вы сможете прочитать о проведенных FDA производственных проверках в компании Hi-Tech (подсказка: ее качество лучше, чем у крупных фармацевтических компаний, которые производят лекарства по рецепту).

В прошлом статье про эфедру мы затронули идею о том, что плохие производители уничтожили другую хорошую добавку: ситуация с эфедрой/эфедрином была в значительной степени испорчена триадой, состоящей из низких потребительских предпочтений, плохого производства и чрезмерной медийной огласки, управляемой FDA. Звучит знакомо?

Итак, давайте посмотрим, что нашел доктор Лумпкин во время проверок FDA в компании Hi-Tech:

• Производство Hi-Tech безупречно

Несмотря на несколько проверок, проведенных FDA, Hi-Tech Pharmaceuticals не имела нарушений, согласно Инспекционной форме № 483 FDA в течение 2001-2013 гг.

В соответствии с этим превосходным результатом, оборудование Hi-Tech официально имело меньше нарушений, чем фармацевтические компании, такие как Санофи-Авентис, Новартис и Пфайзер. Эти крупные фармацевтические компании насчитывали сотни обнаруженных недостатков, и хотя их проверяли чаще, но количество выявленных у них нарушений намного выше, чем у Hi-Tech Pharma, которое равно нулю.

• Когда все сказано и сделано. ДМАА возможно является самым хорошо исследованным ингредиентом спортивных пищевых добавок после кофеина, креатина и протеина.

Большинство ингредиентов пищевых добавок не имеют такого большого количества цитат, рецензируемых исследований и поддержки токсикологических исследований. Количество исследований постоянно увеличивается, и они продолжают доказывать, что

добавки содержащие ДМАА («ГЕРАНЬ») БЕЗОПАСНЫ.

Доказательства присутствия 1,3-диметиламиламина (1,3-DMAA) в растительных материалах герани

Реферат

1,3-Диметиламиламин (1,3-DMAA) представляет собой алифатический амин со стимулирующими свойствами, которые, как сообщается, обнаружены естественно только в растениях герани ( Pelargonium graveolens ). Присутствие 1,3-DMAA в растениях герани было впервые сообщено в статье, опубликованной в 1996 году, но некоторые поставили под сомнение идентификацию 1,3-DMAA в этом исследовании. С тех пор был опубликован ряд дополнительных исследований, в которых в основном сообщалось об отсутствии 1,3-DMAA в растениях герани и коммерческих маслах герани.Однако в двух недавних исследованиях 1,3-DMAA был обнаружен в тканях растений герани и в образце гераниевого масла с использованием упрощенного метода экстракции тканей и масла, полученных из Китая. Обнаружен ли 1,3-DMAA в растениях в естественных условиях, имеет большое значение для того, как коммерческие продукты, содержащие 1,3-DMAA, регулируются Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США. В этой статье рассматриваются различия в исходных материалах, процедурах экстракции и аналитических подходах в попытке рационализировать очевидно противоречивые доказательства присутствия 1,3-DMAA в растительных материалах герани.

Ключевые слова: DMAA, герань, Pelargonium graveolens , натуральные продукты

Введение

1,3-Диметиламиламин (1,3-DMAA), также известный как 1,3-диметилпентиламин и метилгексанамин (MHA), представляет собой алифатический амин со стимулирующими свойствами, который, как сообщается, в природе встречается только в растениях герани ( Pelargonium graveolens ). Присутствие 1,3-DMAA в растениях герани впервые было сообщено в статье, опубликованной в журнале Технологического института Гуйчжоу Ping et al.1 Авторы обнаружили присутствие 1,3-ДМАА в концентрации 0,66% в гераниевом масле, выделенном из свежих стеблей и листьев растения P. graveolens , собранного в регионе Ронгджанг провинции Гуйчжоу в Китае. Целью этого исследования было определить основные компоненты эфирного масла, чтобы обеспечить основу для выбора породы и оценить качество добытого масла. Однако с тех пор на него все чаще ссылаются как на доказательство существования 1,3-DMAA в качестве природного продукта у некоторых видов герани.В исследовании Ping et al. Авторы использовали газовую хроматографию-масс-спектрометрию (ГХ-МС) для идентификации основных соединений в масле; но некоторые ставят под сомнение идентификацию 1,3-DMAA в масле на основании очевидной неправильной маркировки представленной хроматограммы, несогласованного порядка хроматографического элюирования и отсутствия подтверждения с использованием известного стандарта. дополнительные исследования были предприняты с явной целью установить, присутствует ли 1,3-DMAA в качестве натурального продукта в растениях герани и маслах, полученных из герани.2–7 Ответ на этот вопрос имеет большое значение для того, как коммерческие продукты, содержащие 1,3-DMAA, регулируются Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США (FDA). Актуальность этого вопроса возросла в последнее время после того, как в апреле 2012 года FDA предупредило, что синтетически произведенный 1,3-DMAA не может использоваться в качестве активного ингредиента в пищевой добавке, поскольку он не классифицируется как «диетический ингредиент». категория, которая включает ботанические вещества.8

Этот документ содержит обзор недавних исследований в отношении различий в исходных материалах, процедурах экстракции и аналитических подходах, а также общую оценку существующих доказательств присутствия 1,3-DMAA в природных изделия из герани.

Оценка последних исследований

В июле 2012 года Wiley Online опубликовала статью Чжана и др. 3. Авторы проанализировали восемь различных масел герани на наличие 1,3-DMAA, используя два разных масс-спектрометрических метода. Четыре масла были получены из растений, выращенных в Китае, а четыре масла — из растений, выращенных в Египте. Масла герани были закуплены у GNC и Amazon и экстрагированы с использованием многоступенчатой ​​процедуры. Масла обрабатывали, сначала добавляя воду и концентрированный раствор HCl, а затем дважды экстрагируя смесью 50/50 гексан / этилацетат.После каждой стадии экстракции органическую фазу отбрасывали. Затем водную фазу обрабатывали 50% -ным раствором NaOH и еще трижды повторно экстрагировали раствором 50/50 гексан / этилацетат. Органическую часть сохраняли, упаривали досуха и восстанавливали в метаноле, содержащем 0,1% муравьиной кислоты, для инъекции в высокоэффективный жидкостный хроматограф. Поскольку 1,3-DMAA имеет заметное давление пара при комнатной температуре (0,65 мм рт. Ст. При 25 ° C), испарение досуха может отрицательно сказаться на эффективности экстракции, о чем авторы не сообщили.

Экстракты анализировали с использованием двух различных масс-спектрометрических методов: высокоэффективная жидкостная хроматография-ионизация электрораспылением-линейная ионная ловушка (HPLC-ESI-LIT) и метод ВЭЖХ-электрораспылительной ионизации-тройной квадруполь (HPLC-ESI-QQQ). метод. В методе HPLC-ESI-LIT отделение 1,3-DMAA от других компонентов гераниевого масла осуществляли с использованием хроматографической колонки LARIHC CF6-P и подвижной фазы ацетонитрил / метанол 90/10, содержащей 0,1% муравьиной кислоты. LARIHC CF6-P представляет собой хиральную неподвижную фазу циклофруктана 6, дериватизированную алкилом, с известной способностью разделять простые алифатические рацемические амины.Однако такое разделение 1,3-DMAA не наблюдалось на хроматограмме, представленной в дополнительном материале, предоставленном авторами.3

1,3-DMAA имеет два хиральных центра, в результате чего образуются две пары энантиомеров, причем каждая пара энантиомеров составляет диастереомер. Энантиомеры трудно разделить, и для достижения разделения часто требуется реакция с хиральным реагентом. Например, Zhang et al3 смогли разделить все четыре изомера 1,3-DMAA в 13 коммерчески доступных пищевых добавках и двух синтетических стандартах с помощью ГХ, снабженного колонкой Astec ChiralDex G-DM и пламенно-ионизационным детектором (FID).Авторы сообщили, что диастереомерные отношения 1,3-DMAA, измеренные в 13 пищевых добавках, варьировались от 1,23 до 1,43 и были аналогичны диастереомерным отношениям 1,22 ± 0,06 и 1,42 ± 0,09, указанным для двух синтетических стандартов. Кроме того, авторы сообщили, что все энантиомеры в пищевых добавках и синтетических стандартах были рацемическими.3

Однако с помощью метода HPLC-ESI-LIT был обнаружен только один пик в образцах гераниевого масла с добавками. Обнаружение 1,3-DMAA осуществляли с помощью масс-спектрометра с линейной ионной ловушкой, используя мониторинг выбранных ионов при m / z 116.2 с ESI в положительном режиме. ESI — это метод мягкой ионизации, и m / z 116,2 соответствует иону 1,3-DMAA аммония. Одним из недостатков ESI является возможность подавления ионов, что было отмечено авторами. Подавление ионов — это матричный эффект, который может отрицательно повлиять на производительность системы и пределы обнаружения. Предел обнаружения (LOD), указанный для масла герани с шипами с использованием метода HPLC-ESI-LIT, составлял 50 частей на миллиард (предполагается, что это масса). Авторы сообщили, что при использовании этого метода ни в одном из 8 образцов гераниевого масла 1,3-DMAA не обнаружено.

Второй метод, используемый для анализа 1,3-DMAA в масле герани, включал стадию дериватизации с использованием 1-диметиламино-нафталин-5-сульфонилхлорида (дансилхлорида). Дериватизация с использованием дансилхлорида обычно обеспечивает повышенную чувствительность с помощью методов масс-спектрометрии ESI.

Разделение дериватизированного продукта проводили с использованием колонки XB-C18 с подвижной фазой ацетонитрил / вода 70/30, причем водная фаза содержала 0,1% трифторуксусной кислоты. Эта колонка должна была позволить разделить пару дериватизированных диастереомеров 1,3-DMAA.Однако снова только один пик был идентифицирован на хроматограмме пробы масла герани с добавками (Zhang et al, Рисунок 5: Обратите внимание, что этот рисунок показывает, что образец масла содержал 30 частей на миллиард 1,3-DMAA, тогда как экспериментальная запись — вверх означает, что в образцы добавлено 100 частей на миллиард 1,3-DMAA). Обнаружение осуществляли с использованием мониторинга множественных реакций (MRM) перехода m / z 349 к 171, соответствующего потере первичного дансильного фрагмента. Предел детализации, полученный для масла герани с добавками с использованием метода HPLC-ESI-QQQ, составил 10 частей на миллиард (предполагается, что это массовое значение).Авторы отмечают, что LOD относится к концентрации чистого 1,3-DMAA, а не производного продукта, и сообщают, что при использовании этого метода 1,3-DMAA не был обнаружен ни в одном из 8 образцов гераниевого масла. Неясно, как авторы установили LOD для любого метода.

В другом исследовании ElSohly et al4 проанализировали образцы аутентифицированного растительного сырья и экстрагированных масел из P. graveolens, , а также ряда коммерческих масел, используя ГХ-МС и два различных метода ЖХ-МС-МС: ВЭЖХ- ESI-QQQ и метод квадрупольной времяпролетной масс-спектрометрии с ультраэффективной жидкостной хроматографией (UPLC-QTOF-MS).

Образцы масла смешивали с гексаном и экстрагировали 1 н. HCl. Водный слой доводили до pH 9-10 с помощью 10 н. КОН и экстрагировали дихлорметаном (DCM). Затем раствор DCM дериватизировали гептафтормасляным ангидридом (HFBA), подвергали дальнейшей обработке и затем анализировали с помощью GC-MS.

Растительные материалы первоначально экстрагировали 0,1 н. Раствором HCl в метаноле. После выпаривания исходного растворителя остаток растворяли в 1 н. HCl и обрабатывали, как описано выше для образцов масла.Было определено, что эффективность экстракции составляет приблизительно 35% на основании извлечения внутреннего стандарта (2-амино-6-метилгептана).

Разделение производного 1,3-DMAA-HFB проводили на ГХ с использованием колонки Agilent J&W DB-5MS. Масс-спектрометр работал в выбранном режиме мониторинга ионов при m / z 240, 282 и 296. На основе стандартных хроматограмм, представленных на Рисунке 3 их статьи, коэффициент отклика для иона m / z 240 примерно в 100 раз больше, чем коэффициенты отклика для ионов m / z 282 и 296.4 Несмотря на более низкую чувствительность ионов m / z 282 и 296, авторы полагались на все три иона для положительной идентификации, что увеличило LOD до 100 частей на миллиард. Диастереомеры DMAA с расчетным диастериомерным соотношением 1,13 на основе измеренных высот пиков.4 Хотя авторы сообщили, что «ни одно из аутентифицированных эфирных масел или растительного материала P. graveolens P. graveolens , ни какое-либо коммерческое летучее масло пеларгонии (масло герани) не содержит MHA. на обнаруживаемых уровнях »4, проверка выбранных ионных хроматограмм для контрольных образцов и образцов гераниевого масла с добавками позволяет предположить качественное присутствие 1,3-DMAA в концентрациях ниже 100 частей на миллиард.Представлено наложение выбранных ионных хроматограмм, записанных при m / z 240 для отрицательного контроля гераниевого масла (представленного в ElSohly et al, рис. 4) 4 и отрицательного гераниевого масла с добавлением 0,1 ppm (100 нг / мл) 1. 3-DMAA (ElSohly et al, рис. 5) .4

Наложение ГХ-МС выбранных ионных хроматограмм производного DMAA-HFB, записанных при m / z 240 для образца гераниевого масла (красный) и образца гераниевого масла с добавлением 0,1 ppm DMAA (черный). Основные хроматограммы воспроизведены с разрешения Oxford University Press от ElSohly et al.4 Масло пеларгонии и метилгексанамин (MHA): аналитические подходы, подтверждающие отсутствие MHA в аутентифицированном растительном материале и масле Pelargonium graveolens .

Хроматограммы слегка смещены в наложении из-за сдвига времени удерживания, наблюдаемого между двумя сериями, и имеют разные масштабы по оси y. Этот сдвиг времен удерживания согласуется со сдвигом времен удерживания, наблюдаемым для пика внутреннего стандарта. Как указано в, добавление 1,3-DMAA вызывает заметное увеличение двух пиков, наблюдаемых в контрольном образце гераниевого масла, что свидетельствует о присутствии 1,3-DMAA (показывающем оба диастереомера) в этом образце.Расчетные диастериомерные отношения равны 1,14 и 1,22 в пробах с добавками и без них. Небольшая разница в оценочных диастериомерных соотношениях, вероятно, отражает естественную изменчивость этого параметра, как было предложено в исследовании Zhang et al3, и / или различия между натуральным продуктом и синтетическим стандартом.

Картина менее четкая при m / z 296 () из-за более низкой чувствительности для этого иона (т. Е. Уровень пика близок к LOD для этого иона). Наблюдается заметное увеличение одного пика при времени удерживания около 3.95 минут в пробе с добавкой, но мы не видим распознаваемой пары диастереомеров с соотношением ~ 1,15 в образце с добавкой. При m / z 282 (не показано) в пробе с добавлением присутствует распознаваемая пара диастереомеров. Тем не менее, пиковая интенсивность, по-видимому, примерно в 5-10 раз превышает базовый шум, что соответствует заявленному уровню детализации в 100 частей на миллиард (т. Е. На уровне пиков). Таким образом, в то время как более чувствительный ион m / z 240 ясно указывает на присутствие 1,3-DMAA в образце гераниевого масла без добавок, низкая концентрация (менее 100 частей на миллиард) не наблюдается в менее чувствительном m / z 296. и 282 ионных хроматограммы.

Наложение выбранных ионных хроматограмм ГХ-МС производного DMAA-HFB, записанных при m / z 296 для образца гераниевого масла (записано красным) и образца гераниевого масла с добавлением 0,1 ppm DMAA (записано черным). Основные хроматограммы воспроизведены с разрешения Oxford University Press от ElSohly et al. 4 Масло пеларгонии и метилгексанамин (MHA): аналитические подходы, подтверждающие отсутствие MHA в аутентифицированном растительном материале и масле Pelargonium graveolens .

Хроматограммы, представленные для экстрагированного растительного материала (ElSohly et al, рис.6) 4 кажутся похожими на хроматограммы, представленные для масла герани (ElSohly et al, рис. 4) .4 Наложение хроматограмм экстрагированного растительного материала с хроматограммами масла герани с шипами также указывает на качественное присутствие 1,3- DMAA в экстрагированном растительном материале при m / z 240 (не показано). Обратите внимание, что авторы не представляют хроматограммы для растительного сырья с добавками. Расчетное диастериомерное соотношение в растительном материале без добавок при m / z 240 составляет 1,21, как и в образце гераниевого масла без добавок.Еще раз, мониторинг при m / z 296 и 282 оказался непригодным для обнаружения низкого уровня (менее 100 частей на миллиард) 1,3-DMAA в этом исследовании.

ElSohly et al4 также использовали два разных метода ЖХ-МС-МС для анализа масел герани и проверенных экстрактов растительного материала. В первом методе использовалась ВЭЖХ с тройным квадрупольным масс-спектрометром, оснащенным источником ESI (HPLC-ESI-QQQ) — аналогично методу, используемому Чжаном и др. 3. Та же процедура экстракции, что и для анализа ГХ-МС, использовалась для ВЭЖХ. -ESI-QQQ анализ, за ​​исключением того, что они не выполняли стадию дериватизации, а конечный раствор DCM упаривали досуха и помещали в метанол для впрыскивания в колонку для ВЭЖХ.Опять же, испарение досуха могло отрицательно сказаться на эффективности экстракции.

Разделение 1,3-DMAA выполняли с использованием колонки Synergi Hydro-RP C18 и бинарного градиента растворителя с использованием подвижной фазы вода / ацетонитрил с каждым растворителем, содержащим 0,1% муравьиной кислоты. / z от 116 до 57 и m / z от 116 до 41 переходов, соответствующих потере углеводородных фрагментов. Авторы сообщают, что LOD и LOQ для этого метода составляют 2,5 частей на миллиард, хотя нет описания того, как этот LOD был определен.Хроматограммы MRM для неэкстрагированного 1,3-DMAA показали один большой пик при времени удерживания 4,2 минуты, что указывает на отсутствие хроматографического разделения диастереомеров 1,3-DMAA.4 Авторы представляют репрезентативные хроматограммы для образцов масла, растительных материалов. , и три различных коммерческих продукта, однако качество воспроизведения хроматограмм на бумаге оставляет желать лучшего. Тем не менее, аналогичные пики при времени удерживания 4,2 минуты наблюдаются на хроматограммах P. graveolens и аутентифицированного масла P.graveolens (ElSohly et al, рис. 11A, 11B и 12A) 4, предполагая качественное присутствие 1,3-DMAA в растительных материалах. жидкостная хроматография (UPLC) с источником ESI и квадрупольным времяпролетным (QToF) масс-спектрометром для обнаружения (UPLC-ESI-QToF) .4 Разделение выполняли с использованием колонки UPLC BEH C18. Детектирование осуществлялось с помощью мониторинга выбранных ионов при m / z = 116,1439. LOD для этого метода был оценен в 10 частей на миллиард, хотя не дается описания того, как этот LOD был установлен.Авторы также не представляют ни хроматограмм, ни масс-спектров ни для одного из этих анализов, но сообщают, что «весь аутентифицированный растительный материал P. graveolens , аутентифицированный летучих масел P. graveolens и коммерческое масло герани, приобретенное на открытом рынке, были отрицательными (менее более 10 частей на миллиард) для MHA ». 4

В Таблице II своей статьи ElSoley et al4 суммируют результаты своего исследования и с любопытством различают две терминологии в отчетах о результатах анализа ЖХ-МС-МС: НД определяется как не обнаружено (ниже LOD 10 нг / мл или 10 нг / г), и <10 нг / мл осталось неопределенным, но, возможно, предполагая, что 1,3-DMAA был обнаружен при концентрации менее 10 нг / мл.4 Эта интерпретация согласуется с резюме авторов анализов пищевых добавок (продукты A, B и C), которые, как сообщалось, содержат 1,3-DMAA в концентрациях> 10 мг / г,> 2 мг / г, и <1 мг / г, соответственно.4

Непонятно, почему авторы выбирают 10 нг / г или 10 нг / мл в качестве LOD в сводной таблице, когда для этого метода не представлены хроматографические данные (UPLC-ESI-QToF ), а более низкий LOD (2,5 нг / мл) был достигнут с использованием методологии HPLC-ESI-QQQ.

Совсем недавно Li et al5 сообщили о положительном обнаружении 1,3- и 1,4-DMAA в тканях растений герани в концентрациях от 13 до 365 нг / г и от 3 до 35 нг / г.3 нг / г соответственно. Об обнаружении также сообщалось в образцах гераниевого масла при концентрациях от 167 до 13 271 нг / г и 220 нг / г (в одном образце), соответственно. Растения герани были получены из трех областей Китая (Юньнань, Цзянсу и Гуйчжоу), а масло герани было получено из Цзианя, провинция Цзянси, Китай5

Подобно исследованию Чжан и др. 3, Ли и др. 5 использовали ВЭЖХ. -ESI-QQQ метод определения 1,3-DMAA в растительных экстрактах и ​​гераниевых маслах. Одно из основных различий между двумя исследованиями заключается в стадии экстракции.Ли и др. 5 использовали более упрощенный подход, включающий единственную стадию экстракции гексаном, которая сводит к минимуму возможные пути потерь. Для масел герани масло смешивают с гексаном и 0,5 М HCl и встряхивают на высокой скорости в течение 5 минут. Затем водный слой отделяют, при необходимости дополнительно разбавляют HCl и фильтруют через нейлоновый фильтр 0,45 мкм перед введением в ВЭЖХ. Для растительного сырья герани листья и стебли сначала измельчают на мелкие кусочки и экстрагируют ультразвуком с 0,5 М HCl.После центрифугирования водный слой один раз экстрагируют гексаном, затем отделяют, при необходимости дополнительно разбавляют HCl и фильтруют через нейлоновый фильтр 0,45 мкм перед введением в ВЭЖХ. В исследовании Ли и др. 5, 10, 20 и 40 нг / г образцы с добавками растений герани были экстрагированы с эффективностью от 85% до 105 %.5 Было обнаружено, что однократная стадия жидкостно-жидкостной экстракции гексаном улучшает эффективность метода. за счет уменьшения влияния матрицы образца и подавления ионов.

Напротив, как отмечалось выше, Zhang et al3 выполнили пять отдельных экстракций органическим растворителем и выпарили образец досуха перед восстановлением образца в метаноле.Поскольку каждый этап экстракции не является 100% эффективным, существует потенциальная потеря аналита каждый раз, когда проводится экстракция и слой отбрасывается. Zhang et al3 не сообщили об эффективности экстракции в своем исследовании. ElSohly et al4 выполнили четыре отдельных этапа экстракции и сообщили об эффективности экстракции примерно 35% .4

Разделение 1,3-DMAA было выполнено с использованием колонки C18 и подвижной фазы вода / ацетонитрил 85/15 с водной фазой, содержащей 0,1% муравьиная кислота.5 Обнаружение было выполнено с использованием MRM переходов m / z от 116 до 57 и m / z от 116 до 99, соответствующих потере углеводородных фрагментов. Используя этот метод, авторы смогли достичь предела обнаружения массы от 1 до 2 пикограммов (пг), что соответствует пределу количественного определения метода от 1 до 2 нг / г сырого веса на основе отношения сигнал / шум 3: 1. 5

С помощью этого метода авторы добились хорошего разделения диастереомеров 1,3-ДМАА (два пика) и 1,4-ДМАА (один пик) и сообщили об аналогичных спектрах индуцированной столкновением диссоциации (CID) для того же иона-предшественника ( m / z = 116) для всех трех пиков.5 Авторы отмечают, что диастереомеры 1,3-ДМАА присутствовали в равных количествах и идентичны во всех протестированных образцах, включая стандартный образец. соотношение роста от 1,2 до 1,4 (например, см. Ли и др.) 5, что согласуется с диастереомерными соотношениями 1,3-ДМАА, указанными в 13 пищевых добавках Жангом и др. 3 и в образцах, проанализированных ЭльСохли и др. 4 Только хроматограмма, представленная Ли и др. На своем рисунке 6 предлагают равные количества диастереомеров на основе отношения высоты пиков.5

Похоже, что в статье есть некоторая путаница в отношении интерпретации диастереомерных соотношений и того, присутствует ли рацемическая смесь энантиомеров 1,3-ДМАА в экстрагированных растительных материалах.5 Поскольку авторы не использовали хиральную хроматографию колонке для достижения полного разделения всех изомеров 1,3-DMAA, они не смогли разделить два пика 1,3-DMAA на соответствующие пары энантиомеров.5 Как показали Zhang et al3, 1,3-DMAA может быть разделенным на две пары энантиомеров с помощью хиральной хроматографической колонки.В этом исследовании каждая пара энантиомеров 1,3-DMAA выглядит как один пик; таким образом, нет информации относительно энантиомерных соотношений и информации о том, присутствует ли 1,3-DMAA в виде рацемической смеси. Авторы предполагают, однако, что это исследование демонстрирует присутствие рацемата в растительной ткани. Как отмечалось ранее, концентрации 1,3-ДМАА в образцах гераниевого масла варьировались от 167 до 13 271 нг / г.5 Неясно, отражает ли 1000-кратная разница в концентрациях, наблюдаемая для образцов гераниевого масла, различие в типах масла, источник растительного материала герани, метод обработки или другие потенциальные факторы.

В аналогичном исследовании Fleming et al6 проанализировали растения герани, собранные в течение трех разных сезонов и из трех разных областей Китая (Чанчжоу, Гуйян и Куньмин), на присутствие 1,3- и 1,4-DMAA с помощью ВЭЖХ. Метод ESI-QQQ. Процедура экстракции была адаптирована из процедуры, описанной Ли и др. 5 Растительный материал герани сначала экстрагируется 0,5 н. HCl обработкой ультразвуком. 6 После центрифугирования водный слой один раз экстрагировали гексаном, затем разделяли и при необходимости разбавляли HCl. , и отфильтрован с 0.Нейлоновый фильтр 45 мкм перед введением в ВЭЖХ. Обратите внимание, что образцы сначала были проанализированы без стадии экстракции гексаном. Этот шаг был позже добавлен для уменьшения матричных эффектов. Таким образом, результаты представлены для некоторых образцов с этапом экстракции гексаном и без него. В этом исследовании эффективность экстракции образцов герани с шипами варьировалась от 54% до 107% для 1,3-DMAA и от 63% до 86% для 1,4-DMAA.6

Было выполнено разделение 1,3-DMAA с использованием колонки Kinetex C18 и мобильной фазы 82/18 вода / ацетонитрил, причем водная фаза содержит 1% муравьиной кислоты.6 Обнаружение было выполнено с использованием MRM переходов m / z от 116 до 57 и m / z от 116 до 99,7, соответствующих потере углеводородных фрагментов. Используя этот метод, авторам удалось достичь пределов обнаружения 1,3- и 1,4-DMAA в растительном экстракте порядка от 0,6 до 3,2 мкг / л (ppb) .6 Это соответствует пределу обнаружения в около 20 нг / г в растительном материале.

Авторы обнаружили оба диастереомера 1,3-DMAA на хроматограммах и зарегистрировали диастереомерные отношения, равные 1.14 ± 0,08 в стандартах. Были зарегистрированы отношения 1,10 ± 0,01 в образце Чанчжоу S11-1, 1,25 ± 0,03 в образце Чанчжоу S11-2, 1,02 в образце Чанчжоу 1 и 1,16 ± 0,1 в образце Чанчжоу 3, что свидетельствует о естественной изменчивости диастереомерных соотношений6

Растительный материал Changzhou S-11 был получен из Intertek Laboratories и получен из того же образца Цзянсу, о котором сообщил Ли и др. 5 Для этого образца Флеминг и др. 6 сообщили о концентрации 1,3-DMAA 94,7 ± 15,1 нг / г без учета стадия экстракции гексаном и 254 ± 17 нг / г со стадией экстракции гексаном.Для сравнения Li et al5 сообщили о 165 нг / г для образца, взятого из того же растительного материала. Аналогичным образом, Fleming et al6 сообщили о концентрации 1,4-DMAA 13,5 ± 1,8 нг / г без стадии экстракции гексаном и 39,8 нг / г с стадией экстракции гексаном 6, в то время как Li et al5 сообщили о концентрации 35,3 нг / г для образец, взятый из того же растительного материала. Сходство результатов, полученных двумя разными лабораториями, анализировавшими подвыборки из одного и того же растительного материала с использованием схожих методов, является подтверждающим доказательством присутствия 1,3- и 1,4-DMAA в некоторых китайских видах герани.

Другие образцы растительного материала, полученные из Чанчжоу, Китай, также содержали 1,3- и 1,4-ДМАА. Fleming et al6 обнаружили 213 нг / г 1,3-DMAA и 52 нг / г 1,4-DMAA в одном образце, собранном в марте 2012 г. (Changzhou 1), и 68,8 ± 36,5 нг / г 1,3-DMAA и 118 ± 45 нг / г 1,4-DMAA во втором образце, собранном в мае 2012 г. (Чанчжоу 3). Это отражает изменчивость между растениями или, возможно, сезонные эффекты6.

Некоторые образцы были повторно проанализированы с использованием метода стандартных добавок, метода, который часто используется для минимизации матричных эффектов в сложных образцах, таких как биологические материалы.Используя метод стандартных добавок, Fleming et al6 обнаружили несколько более высокие уровни 1,3- и 1,4-DMAA в образце Changzhou 3 при концентрациях 97 ± 20 нг / г и 162 ± 48 нг / г, соответственно. Несколько более высокие уровни 1,3- и 1,4-DMAA были также обнаружены в образце Changzhou S11-2 — 496 ± 46 нг / г и 68 ± 7 нг / г, соответственно.

В других образцах растительного сырья герани, полученных из Китая, концентрации 1,3- и 1,4-ДМАА были на уровне или ниже предела обнаружения около 20 нг / г.6 1,3-DMAA был обнаружен в одном образце растения герани из Куньмина, Китай, около предела обнаружения 20 нг / г. Однако повторный анализ оказался ниже предела обнаружения метода. Концентрации 1,3-DMAA и 1,4-DMAA во всех других образцах из Куньмина и Гуйяна, Китай, были ниже предела обнаружения, составляющего примерно 20 нг / г.6

В короткой статье, подготовленной Лиси и др. 2, пять различных коммерчески доступные масла герани были проанализированы на присутствие 1,3-DMAA с помощью GC-MS. Источниками масла герани в пяти образцах были Египет, Франция и Новая Зеландия.Образцы масла экстрагировали 1 М HCl и трет-бутилметиловым эфиром (ТВМЕ). После дополнительной обработки водный слой подщелачивали с использованием 6 М КОН и добавляли гексан и пентафторбензилхлорид (ПФБКЛ) в качестве дериватизирующего агента. Слой гексана выпаривали досуха и восстанавливали в этилацетате для впрыскивания в колонку для ГХ. Об эффективности экстракции не сообщалось.2

Разделение производного 1,3-ДМАА проводили с использованием колонки Agilent HP Ultra 2. Полуколичественный анализ был основан на мониторинге выбранных ионов при m / z 238.Разделение обоих диастереомеров 1,3-DMAA было достигнуто с использованием этого метода, хотя авторы неправильно относят эти два пика к энантиомерам. Авторы сообщают, что 1,3-DMAA не был обнаружен ни в одном из пяти масел герани, однако не сообщалось о пределах обнаружения и не представлены стандартные концентрации или данные калибровки.2

Наконец, в коротком сообщении Di Lorenzo et al. 7 стеблей и листьев семи различных видов / сортов Pelargonium , полученных из питомника растений в Италии, были проанализированы на присутствие 1,3-DMAA с использованием ВЭЖХ с УФ-детектированием.Стебли и листья сначала экстрагировали метанолом при кипячении с обратным холодильником. Затем метанольные экстракты фильтровали, упаривали досуха и ресуспендировали в 1-2 мл метанола.7 В то время как во всех других исследованиях, рассмотренных в этой статье, использовалась кислая экстракционная среда, кислота здесь не добавлялась. Конечные экстракты метанола были дериватизированы с использованием о-фталальдегида. Разделение достигалось с использованием обращенно-фазовой колонки Synergi 4 мкм MAX-RP или Lichrocart 5 мкм RP18 и градиентного элюирования с использованием смеси ацетата натрия / тетрагидрофурана и метанола.Обнаружение производного 1,3-DMAA-o-фталевого альдегида было выполнено с использованием детектора с диодной матрицей с количественным определением при 334 нм.7

Извлечение 1,3-DMAA с шипами в образцах стеблей и листьев было более 97%, но пределы обнаружения были повышены до 600 и 1200 нг / г для стеблей и листьев соответственно. Для сравнения, Li et al5 и Fleming et al6 сообщили о пределах обнаружения порядка от 2 до 20 нг / г. Авторы сообщают, что не было обнаружено обнаруживаемых количеств 1,3-DMAA ни в одном из семи протестированных видов / сортов Pelargonium , а также в коммерческом масле герани из P.graveolens , выращенный в Африке, который также был протестирован.7

Анализы эфирных масел

Растения герани в основном выращиваются для производства эфирных масел для использования в косметике, парфюмерии и ароматерапии. Были опубликованы многочисленные исследования, определяющие основные составляющие и документирующие условия, влияющие на выход и состав добытого масла, включая метод дистилляции, 9,10 сезонные эффекты и климатические условия, 11–13 обработки проб (т.е. возраст листьев, высушены ли они. перед перегонкой) 14, а также почвенно-влажностные условия.15 Эти и другие исследования16–19 обычно обеспечивают химический распад компонентов масла, однако ни одно из этих исследований не подтвердило присутствие 1,3-DMAA. Некоторые ссылаются на эту работу как на дополнительное подтверждающее доказательство отсутствия 1,3-DMAA в растениях герани. 2,20 Однако существует ряд потенциальных причин, по которым эти исследования не сообщают об обнаружении 1,3-DMAA в растениях герани. масло.

Во-первых, существует значительный разброс в составе эфирных масел, полученных из растений герани.Международные стандарты классифицируют масла герани на три основных типа: африканский тип, включая масла из Алжира, Марокко и Египта; тип Бурбон с острова Реюньон; и китайский тип. Сообщается, что 90% эфирного масла состоит из примерно 30 соединений, относительные концентрации которых различаются среди различных типов масел.21 Остальные соединения, присутствующие в следовых количествах, могут значительно различаться. Например, Lalli et al16 идентифицировали в общей сложности 315 различных соединений в эфирных маслах, дистиллированных из 13 различных южноафриканских видов Pelargonium (18 образцов) с помощью ГХ и ГХ-МС.Однако общее количество компонентов, идентифицированных в одном образце эфирного масла, варьировалось от 52 до 87, и почти треть соединений (101 из 315) была обнаружена только в одном из 18 проанализированных образцов. Джалали-Херави и др. 19 идентифицировали 61 соединение в образце эфирного масла, полученного из растений герани, культивируемых в Иране, с помощью ГХ-МС. Этот список, однако, был неполным и в конечном итоге расширился до 85 соединений с добавлением методов хемометрического разделения. Шелли и Марриотт20 идентифицировали 65 различных соединений в эфирном масле египетской герани с использованием метода двумерной ГХ-МС.Kulkarni et al17 идентифицировали 48 компонентов эфирного масла, экстрагированного из трех клонов Бурбона, выращенных в Индии. Очевидно, что состав эфирных масел, извлеченных из различных типов растений, значительно варьируется.

Во-вторых, хотя пределы обнаружения обычно не сообщаются, кажется, что пределы обнаружения недостаточно низкие для обнаружения 1,3-DMAA в масле. Большинство этих исследований эфирных масел сообщают, что следовые уровни компонентов составляют порядка 0,01% масляной фракции, что эквивалентно 100 000 нг / г.Напротив, Li et al5 и Fleming et al6 сообщили о концентрациях 1,3-DMAA порядка 500 нг / г или менее в частях растения герани и масле, за исключением одного образца масла с концентрацией 1,3-DMAA 13000. нг / г или 0,0013%. Низкие пределы обнаружения, достигнутые Ли и др., 5, Флемингом и др., 6 и др. 3,4, требуют стадии кислотной экстракции и концентрирования перед анализом, что обычно не выполняется для анализа эфирных масел. Однако в одном исследовании, проведенном Вернином и др. [22], была выделена основная фракция масла бурбона герани путем экстракции 10% -ным раствором HCl с последующей промывкой диэтиловым эфиром, нейтрализацией гидроксидом натрия и экстракцией эфиром.Авторы обнаружили 2-метил-3-амино-1-пентен на низких уровнях вместе с двумя соединениями пиридина и другими неидентифицированными аминосоединениями в масле, однако 1,3-DMAA не было идентифицировано. Тем не менее, это исследование предполагает, что низкие уровни аминов, которые в противном случае остались бы незамеченными, могут быть обнаружены в некоторых маслах герани после кислотной экстракции и очистки.

Наконец, методы ГХ, используемые для анализа эфирных масел во всех вышеупомянутых исследованиях, не могут быть оптимизированы для анализа 1,3-DMAA, который имеет относительно низкую температуру кипения и будет быстро элюироваться через колонку. .Первые элюирующие соединения, о которых сообщалось в большинстве анализов эфирных масел, такие как цис-3-гексенол и α-пинен, имеют температуру кипения порядка 155–157 ° C.23 Поскольку 1,3-DMAA имеет сравнительно более низкая точка кипения от 130 ° C до 135 ° C, 24 она будет иметь тенденцию появляться как один из самых ранних пиков элюирования и потенциально находится за пределами области интереса для многих из этих исследований, особенно если имеется запрограммированная задержка растворителя24 Vorce et al. al24 отмечают, что анализ 1,3-DMAA возможен с помощью ГХ-МС, но необходимо проявлять большую осторожность для оптимизации параметров ГХ для этого соединения.

В недавней патентной заявке компании Northern Innovations and Formulations Corp. на травяную добавку, приготовленную из герани, описан метод экстракции, который утверждает, что оптимизирует содержание 1,3-DMAA в масле путем экстракции масла смесью спирта и воды, разделение масляной и водной фаз, концентрирование и сушка водной фазы до порошка, а затем, после очистки масла, смешивание порошка с очищенным маслом.25 Этот процесс заявлен для достижения концентраций 1,3-DMAA в диапазоне От 1% до 3%, что свидетельствует о том, что большая часть 1,3-DMAA, экстрагированного при производстве эфирных масел, может оказаться в водной фазе.Это может быть еще одной потенциальной причиной того, почему анализы эфирных масел не могут определить измеримые уровни 1,3-DMAA.

Выводы

Недавние исследования, обобщенные в этом отчете, предоставляют противоречивые доказательства того, что 1,3-DMAA естественным образом встречается в некоторых видах растений герани. Однако различия в источниках проб, процедурах извлечения и методах анализа могут быть причиной противоречивых результатов. Род Pelargonium включает более 270 различных видов, большинство из которых являются коренными жителями Южной Африки, но многие из них в настоящее время широко культивируются в России, Египте, Индии и Китае, который в настоящее время является крупнейшим производителем гераниевого масла.16,21,26 Многие сорта, выращиваемые для производства эфирного масла, являются межвидовыми гибридами21, и исследования показали, что состав и качество экстрагированного масла зависят от сорта растения, метода экстракции, типа почвы и климатических условий. 9,16,17,21 Таким образом, неудивительно, что некоторые образцы растительного сырья и экстрагированных масел содержат 1,3-DMAA, тогда как другие нет.

На основании исследований, рассмотренных в этой статье, обработка может также играть роль, поскольку 1,3-DMAA с большей вероятностью будет обнаружен в образцах, извлеченных в лаборатории из стеблей и листьев растений, чем в коммерчески доступных продуктах, продаваемых для использования в медицине и ароматерапия.27 Причина этого может быть связана с коммерческими процедурами экстракции, разработанными для повышения извлечения эфирных масел, а не 1,3-DMAA. Недавняя патентная заявка предполагает, что большая часть 1,3-ДМАА, экстрагированного в процессе производства эфирных масел, может оказаться в водной фазе.25

Три исследования, оцененных в этом отчете, включали анализ листьев и стеблей растений герани, собранных в Китай и Индия. Ли и др. 5 обнаружили 1,3-ДМАА в аутентифицированных растительных материалах, собранных в трех областях Китая (Юньнань, Цзянсу и Гуйчжоу), а Флеминг и др .6 обнаружили 1,3-ДМАА в аутентифицированных растительных материалах из Чанчжоу, Китай и, при низких уровнях, в растительном сырье из Гуйяна, Китай.Однако 1,3-DMAA не было обнаружено в растительных материалах, собранных в Куньмине, Китай. ElSohly et al4 проанализировали аутентичные растительные материалы из Индии и США (штат Миссисипи) и сообщили об отсутствии обнаруживаемых количеств 1,3-DMAA при пределе обнаружения 100 частей на миллиард. Однако проверка хроматограмм предполагает качественное присутствие 1,3-ДМАА на уровнях ниже 100 частей на миллиард в некоторых образцах аутентифицированного растительного материала. Авторы также не сообщили об обнаружении 1,3-DMAA с помощью метода ВЭЖХ с гораздо более низкими пределами обнаружения (2.5 частей на миллиард). Однако этот метод не позволил разделить диастереомеры 1,3-DMAA. Третий метод (UPLC-ESI-QTOF) с расчетным пределом обнаружения 10 частей на миллиард также использовался для анализа образцов. Хотя никаких данных по этому методу представлено не было, сводная таблица, представленная авторами, предполагает, что 1,3-DMAA мог быть обнаружен в высушенных стеблях растений на уровне ниже 10 частей на миллиард. Таким образом, все три исследования, включающие экстракцию растительного сырья, обеспечивают количественную или качественную поддержку естественного присутствия 1,3-DMAA в растениях герани.

Четыре из рассмотренных исследований включали анализ коммерчески доступных масел герани. Чжан и др. 3 проанализировали восемь различных масел герани, полученных из Китая и Египта. Lisi et al2 проанализировали пять масел герани, полученных из Египта, Франции и Новой Зеландии. ElSohly et al4 проанализировали 20 различных образцов коммерческого масла герани, но не сообщили об источниках; и Ли и др. проанализировали образцы гераниевого масла, полученные на фабрике по производству ароматизаторов в провинции Цзянси, Китай. Только Ли и др. 5 обнаружили 1,3-ДМАА в товарном нефтепродукте.

Все восемь образцов гераниевого масла, проанализированные Чжаном и др. 3, как сообщается, были извлечены из растений герани с использованием паровой дистилляции. Lisi et al2 предполагают, что из-за летучести 1,3-DMAA паровая дистилляция не может быть подходящей техникой для его экстракции вместе с нефтепродуктом, и что альтернативный процесс холодного отжима дает больше шансов удерживать 1,3- ДМАА в масле. Zhang et al3 сообщили об отсутствии обнаружения 1,3-DMAA ни в одном из образцов гераниевого масла с использованием метода HPLC-ESI-LIT с пределом обнаружения 50 частей на миллиард, а также об отсутствии обнаружения 1,3-DMAA с помощью альтернативного HPLC-ESI. -QQQ метод с пределом обнаружения 10 частей на миллиард.Авторы использовали несколько сложную многоступенчатую технику экстракции для проб масла и не сообщили об эффективности экстракции для этого метода. В методе HPLC-ESI-LIT использовалась хроматографическая колонка с хиральной стационарной фазой, которая, как сообщается, способна адекватно удерживать первичные амины. Однако авторам не удалось добиться разделения ни энантиомеров 1,3-ДМАА, ни диастереомеров в стандартах. Аналогичным образом, только один пик был зарегистрирован с использованием метода HPLC-ESI-QQQ3.

Lisi et al2 проанализировали пять образцов масла герани из Египта, Франции и Новой Зеландии; три образца были извлечены с помощью перегонки с водяным паром.1,3-DMAA не был обнаружен ни в одном из образцов масла, но о пределах обнаружения не сообщалось. ElSohly et al4 также сообщили об отсутствии детектируемых количеств 1,3-DMAA с пределом обнаружения 100 частей на миллиард с использованием одного метода. Однако опубликованные хроматограммы для одного из образцов масла до и после добавления 1,3-DMAA на пределе обнаружения предполагают качественное присутствие 1,3-DMAA в исходном образце. Кроме того, сводная таблица, включенная в документ, предполагает, что 1,3-DMAA может присутствовать в 25% (5 из 20) промышленных проб масла на уровнях ниже 10 частей на миллиард.4

Наконец, Ли и др. 5 обнаружили 1,3- и 1,4-ДМАА в образцах гераниевого масла, полученных на заводе ароматизаторов в Цзиане, провинция Цзянси, Китай. Концентрации 1,3-DMAA варьировались от 167 до 13 271 нг / г в трех образцах. 1,4-ДМАА был обнаружен только в одном из образцов в концентрации 220 нг / г. За исключением одного образца гераниевого масла, проанализированного Ли и др., 5 концентраций 1,3-DMAA, обнаруженных в растительных материалах герани и экстрагированных маслах, обычно меньше 500 частей на миллиард.

Только Zhang et al4 сообщают о разделении 1,3-DMAA на его четыре стереоизомера, выполненном с использованием GC-FID, снабженного хиральной неподвижной фазой.Однако этот метод использовался для анализа пищевых добавок, а не растительного сырья герани. Таким образом, ни в одном из пяти исследований не было представлено данных, касающихся энантиомерной чистоты 1,3-ДМАА, экстрагированного из растений и масел герани. Во всех пяти исследованиях сообщалось о разделении 1,3-DMAA на его диастереомеры, а диастереомерные соотношения были аналогичными для 1,3-DMAA, обнаруженного в коммерчески доступных стандартах, пищевых добавках, экстрактах растительного сырья герани и масле герани.

В целом, эти исследования показывают, что 1,3-DMAA естественным образом содержится в некоторых, но не во всех, растениях герани и экстрагированных гераниевых маслах. Количественные5,6 и / или качественные4 доказательства присутствия 1,3-DMAA в растительных материалах с большей вероятностью можно найти в исследованиях, включающих экстракцию растительных материалов в лаборатории, а не в анализе коммерчески доступных продуктов, продаваемых для использования в медицине и ароматерапии. . Вероятно, это связано с различиями в обработке. Паровая дистилляция, которая, по-видимому, является предпочтительной процедурой экстракции товарных масел, может не подходить для удержания 1,3-DMAA.В лаборатории обнаружению 1,3-DMAA, по-видимому, способствуют процедуры экстракции, включающие меньшее количество этапов экстракции, что сводит к минимуму возможность потерь. В этом обзоре все исследования, сообщающие об отрицательных результатах присутствия 1,3-DMAA, включают процедуры экстракции, включающие стадию выпаривания до высыхания или удаление растворителя в вакууме, что может отрицательно повлиять на эффективность экстракции из-за летучести 1,3-DMAA.

Наконец, эти исследования показывают, что существует значительная вариабельность содержания 1,3-DMAA от растения к растению.В растительных материалах, в которых был количественно обнаружен 1,3-DMAA, все из которых получены из Китая, концентрации обычно менее 500 частей на миллиард. Однако некоторые растения из Китая не содержат обнаруживаемых уровней 1,3-DMAA, в то время как одно масло герани, полученное из Китая, содержало более 13 ppm 1,3-DMAA.

Доказательства присутствия 1,3-диметиламиламина (1,3-DMAA) в растительных материалах герани

Реферат

1,3-Диметиламиламин (1,3-DMAA) представляет собой алифатический амин со стимулирующими свойствами, которые, как сообщается, в природе встречается только в растениях герани ( Pelargonium graveolens ).Присутствие 1,3-DMAA в растениях герани было впервые сообщено в статье, опубликованной в 1996 году, но некоторые поставили под сомнение идентификацию 1,3-DMAA в этом исследовании. С тех пор был опубликован ряд дополнительных исследований, в которых в основном сообщалось об отсутствии 1,3-DMAA в растениях герани и коммерческих маслах герани. Однако в двух недавних исследованиях 1,3-DMAA был обнаружен в тканях растений герани и в образце гераниевого масла с использованием упрощенного метода экстракции тканей и масла, полученных из Китая.Обнаружен ли 1,3-DMAA в растениях в естественных условиях, имеет большое значение для того, как коммерческие продукты, содержащие 1,3-DMAA, регулируются Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США. В этой статье рассматриваются различия в исходных материалах, процедурах экстракции и аналитических подходах в попытке рационализировать очевидно противоречивые доказательства присутствия 1,3-DMAA в растительных материалах герани.

Ключевые слова: DMAA, герань, Pelargonium graveolens , натуральные продукты

Введение

1,3-Диметиламиламин (1,3-DMAA), также известный как 1,3-диметилпентиламин и метилгексанамин (MHA), представляет собой алифатический амин со стимулирующими свойствами, который, как сообщается, в природе встречается только в растениях герани ( Pelargonium graveolens ).Присутствие 1,3-DMAA в растениях герани было впервые сообщено в статье, опубликованной в журнале Guizhou Institute of Technology by Ping et al.1 Авторы обнаружили присутствие 1,3-DMAA в концентрации 0,66% в масло герани, выделенное из свежих стеблей и листьев растения P. graveolens , собранного в районе Жунджанг провинции Гуйчжоу в Китае. Целью этого исследования было определить основные компоненты эфирного масла, чтобы обеспечить основу для выбора породы и оценить качество добытого масла.Однако с тех пор на него все чаще ссылаются как на доказательство существования 1,3-DMAA в качестве природного продукта у некоторых видов герани. В исследовании Ping et al. Авторы использовали газовую хроматографию-масс-спектрометрию (ГХ-МС) для идентификации основных соединений в масле; но некоторые ставят под сомнение идентификацию 1,3-DMAA в масле на основании очевидной неправильной маркировки представленной хроматограммы, несогласованного порядка хроматографического элюирования и отсутствия подтверждения с использованием известного стандарта. дополнительные исследования были предприняты с явной целью установить, присутствует ли 1,3-DMAA в качестве натурального продукта в растениях герани и маслах, полученных из герани.2–7 Ответ на этот вопрос имеет большое значение для того, как коммерческие продукты, содержащие 1,3-DMAA, регулируются Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США (FDA). Актуальность этого вопроса возросла в последнее время после того, как в апреле 2012 года FDA предупредило, что синтетически произведенный 1,3-DMAA не может использоваться в качестве активного ингредиента в пищевой добавке, поскольку он не классифицируется как «диетический ингредиент». категория, которая включает ботанические вещества.8

Этот документ содержит обзор недавних исследований в отношении различий в исходных материалах, процедурах экстракции и аналитических подходах, а также общую оценку существующих доказательств присутствия 1,3-DMAA в природных изделия из герани.

Оценка последних исследований

В июле 2012 года Wiley Online опубликовала статью Чжана и др. 3. Авторы проанализировали восемь различных масел герани на наличие 1,3-DMAA, используя два разных масс-спектрометрических метода. Четыре масла были получены из растений, выращенных в Китае, а четыре масла — из растений, выращенных в Египте. Масла герани были закуплены у GNC и Amazon и экстрагированы с использованием многоступенчатой ​​процедуры. Масла обрабатывали, сначала добавляя воду и концентрированный раствор HCl, а затем дважды экстрагируя смесью 50/50 гексан / этилацетат.После каждой стадии экстракции органическую фазу отбрасывали. Затем водную фазу обрабатывали 50% -ным раствором NaOH и еще трижды повторно экстрагировали раствором 50/50 гексан / этилацетат. Органическую часть сохраняли, упаривали досуха и восстанавливали в метаноле, содержащем 0,1% муравьиной кислоты, для инъекции в высокоэффективный жидкостный хроматограф. Поскольку 1,3-DMAA имеет заметное давление пара при комнатной температуре (0,65 мм рт. Ст. При 25 ° C), испарение досуха может отрицательно сказаться на эффективности экстракции, о чем авторы не сообщили.

Экстракты анализировали с использованием двух различных масс-спектрометрических методов: высокоэффективная жидкостная хроматография-ионизация электрораспылением-линейная ионная ловушка (HPLC-ESI-LIT) и метод ВЭЖХ-электрораспылительной ионизации-тройной квадруполь (HPLC-ESI-QQQ). метод. В методе HPLC-ESI-LIT отделение 1,3-DMAA от других компонентов гераниевого масла осуществляли с использованием хроматографической колонки LARIHC CF6-P и подвижной фазы ацетонитрил / метанол 90/10, содержащей 0,1% муравьиной кислоты. LARIHC CF6-P представляет собой хиральную неподвижную фазу циклофруктана 6, дериватизированную алкилом, с известной способностью разделять простые алифатические рацемические амины.Однако такое разделение 1,3-DMAA не наблюдалось на хроматограмме, представленной в дополнительном материале, предоставленном авторами.3

1,3-DMAA имеет два хиральных центра, в результате чего образуются две пары энантиомеров, причем каждая пара энантиомеров составляет диастереомер. Энантиомеры трудно разделить, и для достижения разделения часто требуется реакция с хиральным реагентом. Например, Zhang et al3 смогли разделить все четыре изомера 1,3-DMAA в 13 коммерчески доступных пищевых добавках и двух синтетических стандартах с помощью ГХ, снабженного колонкой Astec ChiralDex G-DM и пламенно-ионизационным детектором (FID).Авторы сообщили, что диастереомерные отношения 1,3-DMAA, измеренные в 13 пищевых добавках, варьировались от 1,23 до 1,43 и были аналогичны диастереомерным отношениям 1,22 ± 0,06 и 1,42 ± 0,09, указанным для двух синтетических стандартов. Кроме того, авторы сообщили, что все энантиомеры в пищевых добавках и синтетических стандартах были рацемическими.3

Однако с помощью метода HPLC-ESI-LIT был обнаружен только один пик в образцах гераниевого масла с добавками. Обнаружение 1,3-DMAA осуществляли с помощью масс-спектрометра с линейной ионной ловушкой, используя мониторинг выбранных ионов при m / z 116.2 с ESI в положительном режиме. ESI — это метод мягкой ионизации, и m / z 116,2 соответствует иону 1,3-DMAA аммония. Одним из недостатков ESI является возможность подавления ионов, что было отмечено авторами. Подавление ионов — это матричный эффект, который может отрицательно повлиять на производительность системы и пределы обнаружения. Предел обнаружения (LOD), указанный для масла герани с шипами с использованием метода HPLC-ESI-LIT, составлял 50 частей на миллиард (предполагается, что это масса). Авторы сообщили, что при использовании этого метода ни в одном из 8 образцов гераниевого масла 1,3-DMAA не обнаружено.

Второй метод, используемый для анализа 1,3-DMAA в масле герани, включал стадию дериватизации с использованием 1-диметиламино-нафталин-5-сульфонилхлорида (дансилхлорида). Дериватизация с использованием дансилхлорида обычно обеспечивает повышенную чувствительность с помощью методов масс-спектрометрии ESI.

Разделение дериватизированного продукта проводили с использованием колонки XB-C18 с подвижной фазой ацетонитрил / вода 70/30, причем водная фаза содержала 0,1% трифторуксусной кислоты. Эта колонка должна была позволить разделить пару дериватизированных диастереомеров 1,3-DMAA.Однако снова только один пик был идентифицирован на хроматограмме пробы масла герани с добавками (Zhang et al, Рисунок 5: Обратите внимание, что этот рисунок показывает, что образец масла содержал 30 частей на миллиард 1,3-DMAA, тогда как экспериментальная запись — вверх означает, что в образцы добавлено 100 частей на миллиард 1,3-DMAA). Обнаружение осуществляли с использованием мониторинга множественных реакций (MRM) перехода m / z 349 к 171, соответствующего потере первичного дансильного фрагмента. Предел детализации, полученный для масла герани с добавками с использованием метода HPLC-ESI-QQQ, составил 10 частей на миллиард (предполагается, что это массовое значение).Авторы отмечают, что LOD относится к концентрации чистого 1,3-DMAA, а не производного продукта, и сообщают, что при использовании этого метода 1,3-DMAA не был обнаружен ни в одном из 8 образцов гераниевого масла. Неясно, как авторы установили LOD для любого метода.

В другом исследовании ElSohly et al4 проанализировали образцы аутентифицированного растительного сырья и экстрагированных масел из P. graveolens, , а также ряда коммерческих масел, используя ГХ-МС и два различных метода ЖХ-МС-МС: ВЭЖХ- ESI-QQQ и метод квадрупольной времяпролетной масс-спектрометрии с ультраэффективной жидкостной хроматографией (UPLC-QTOF-MS).

Образцы масла смешивали с гексаном и экстрагировали 1 н. HCl. Водный слой доводили до pH 9-10 с помощью 10 н. КОН и экстрагировали дихлорметаном (DCM). Затем раствор DCM дериватизировали гептафтормасляным ангидридом (HFBA), подвергали дальнейшей обработке и затем анализировали с помощью GC-MS.

Растительные материалы первоначально экстрагировали 0,1 н. Раствором HCl в метаноле. После выпаривания исходного растворителя остаток растворяли в 1 н. HCl и обрабатывали, как описано выше для образцов масла.Было определено, что эффективность экстракции составляет приблизительно 35% на основании извлечения внутреннего стандарта (2-амино-6-метилгептана).

Разделение производного 1,3-DMAA-HFB проводили на ГХ с использованием колонки Agilent J&W DB-5MS. Масс-спектрометр работал в выбранном режиме мониторинга ионов при m / z 240, 282 и 296. На основе стандартных хроматограмм, представленных на Рисунке 3 их статьи, коэффициент отклика для иона m / z 240 примерно в 100 раз больше, чем коэффициенты отклика для ионов m / z 282 и 296.4 Несмотря на более низкую чувствительность ионов m / z 282 и 296, авторы полагались на все три иона для положительной идентификации, что увеличило LOD до 100 частей на миллиард. Диастереомеры DMAA с расчетным диастериомерным соотношением 1,13 на основе измеренных высот пиков.4 Хотя авторы сообщили, что «ни одно из аутентифицированных эфирных масел или растительного материала P. graveolens P. graveolens , ни какое-либо коммерческое летучее масло пеларгонии (масло герани) не содержит MHA. на обнаруживаемых уровнях »4, проверка выбранных ионных хроматограмм для контрольных образцов и образцов гераниевого масла с добавками позволяет предположить качественное присутствие 1,3-DMAA в концентрациях ниже 100 частей на миллиард.Представлено наложение выбранных ионных хроматограмм, записанных при m / z 240 для отрицательного контроля гераниевого масла (представленного в ElSohly et al, рис. 4) 4 и отрицательного гераниевого масла с добавлением 0,1 ppm (100 нг / мл) 1. 3-DMAA (ElSohly et al, рис. 5) .4

Наложение ГХ-МС выбранных ионных хроматограмм производного DMAA-HFB, записанных при m / z 240 для образца гераниевого масла (красный) и образца гераниевого масла с добавлением 0,1 ppm DMAA (черный). Основные хроматограммы воспроизведены с разрешения Oxford University Press от ElSohly et al.4 Масло пеларгонии и метилгексанамин (MHA): аналитические подходы, подтверждающие отсутствие MHA в аутентифицированном растительном материале и масле Pelargonium graveolens .

Хроматограммы слегка смещены в наложении из-за сдвига времени удерживания, наблюдаемого между двумя сериями, и имеют разные масштабы по оси y. Этот сдвиг времен удерживания согласуется со сдвигом времен удерживания, наблюдаемым для пика внутреннего стандарта. Как указано в, добавление 1,3-DMAA вызывает заметное увеличение двух пиков, наблюдаемых в контрольном образце гераниевого масла, что свидетельствует о присутствии 1,3-DMAA (показывающем оба диастереомера) в этом образце.Расчетные диастериомерные отношения равны 1,14 и 1,22 в пробах с добавками и без них. Небольшая разница в оценочных диастериомерных соотношениях, вероятно, отражает естественную изменчивость этого параметра, как было предложено в исследовании Zhang et al3, и / или различия между натуральным продуктом и синтетическим стандартом.

Картина менее четкая при m / z 296 () из-за более низкой чувствительности для этого иона (т. Е. Уровень пика близок к LOD для этого иона). Наблюдается заметное увеличение одного пика при времени удерживания около 3.95 минут в пробе с добавкой, но мы не видим распознаваемой пары диастереомеров с соотношением ~ 1,15 в образце с добавкой. При m / z 282 (не показано) в пробе с добавлением присутствует распознаваемая пара диастереомеров. Тем не менее, пиковая интенсивность, по-видимому, примерно в 5-10 раз превышает базовый шум, что соответствует заявленному уровню детализации в 100 частей на миллиард (т. Е. На уровне пиков). Таким образом, в то время как более чувствительный ион m / z 240 ясно указывает на присутствие 1,3-DMAA в образце гераниевого масла без добавок, низкая концентрация (менее 100 частей на миллиард) не наблюдается в менее чувствительном m / z 296. и 282 ионных хроматограммы.

Наложение выбранных ионных хроматограмм ГХ-МС производного DMAA-HFB, записанных при m / z 296 для образца гераниевого масла (записано красным) и образца гераниевого масла с добавлением 0,1 ppm DMAA (записано черным). Основные хроматограммы воспроизведены с разрешения Oxford University Press от ElSohly et al. 4 Масло пеларгонии и метилгексанамин (MHA): аналитические подходы, подтверждающие отсутствие MHA в аутентифицированном растительном материале и масле Pelargonium graveolens .

Хроматограммы, представленные для экстрагированного растительного материала (ElSohly et al, рис.6) 4 кажутся похожими на хроматограммы, представленные для масла герани (ElSohly et al, рис. 4) .4 Наложение хроматограмм экстрагированного растительного материала с хроматограммами масла герани с шипами также указывает на качественное присутствие 1,3- DMAA в экстрагированном растительном материале при m / z 240 (не показано). Обратите внимание, что авторы не представляют хроматограммы для растительного сырья с добавками. Расчетное диастериомерное соотношение в растительном материале без добавок при m / z 240 составляет 1,21, как и в образце гераниевого масла без добавок.Еще раз, мониторинг при m / z 296 и 282 оказался непригодным для обнаружения низкого уровня (менее 100 частей на миллиард) 1,3-DMAA в этом исследовании.

ElSohly et al4 также использовали два разных метода ЖХ-МС-МС для анализа масел герани и проверенных экстрактов растительного материала. В первом методе использовалась ВЭЖХ с тройным квадрупольным масс-спектрометром, оснащенным источником ESI (HPLC-ESI-QQQ) — аналогично методу, используемому Чжаном и др. 3. Та же процедура экстракции, что и для анализа ГХ-МС, использовалась для ВЭЖХ. -ESI-QQQ анализ, за ​​исключением того, что они не выполняли стадию дериватизации, а конечный раствор DCM упаривали досуха и помещали в метанол для впрыскивания в колонку для ВЭЖХ.Опять же, испарение досуха могло отрицательно сказаться на эффективности экстракции.

Разделение 1,3-DMAA выполняли с использованием колонки Synergi Hydro-RP C18 и бинарного градиента растворителя с использованием подвижной фазы вода / ацетонитрил с каждым растворителем, содержащим 0,1% муравьиной кислоты. / z от 116 до 57 и m / z от 116 до 41 переходов, соответствующих потере углеводородных фрагментов. Авторы сообщают, что LOD и LOQ для этого метода составляют 2,5 частей на миллиард, хотя нет описания того, как этот LOD был определен.Хроматограммы MRM для неэкстрагированного 1,3-DMAA показали один большой пик при времени удерживания 4,2 минуты, что указывает на отсутствие хроматографического разделения диастереомеров 1,3-DMAA.4 Авторы представляют репрезентативные хроматограммы для образцов масла, растительных материалов. , и три различных коммерческих продукта, однако качество воспроизведения хроматограмм на бумаге оставляет желать лучшего. Тем не менее, аналогичные пики при времени удерживания 4,2 минуты наблюдаются на хроматограммах P. graveolens и аутентифицированного масла P.graveolens (ElSohly et al, рис. 11A, 11B и 12A) 4, предполагая качественное присутствие 1,3-DMAA в растительных материалах. жидкостная хроматография (UPLC) с источником ESI и квадрупольным времяпролетным (QToF) масс-спектрометром для обнаружения (UPLC-ESI-QToF) .4 Разделение выполняли с использованием колонки UPLC BEH C18. Детектирование осуществлялось с помощью мониторинга выбранных ионов при m / z = 116,1439. LOD для этого метода был оценен в 10 частей на миллиард, хотя не дается описания того, как этот LOD был установлен.Авторы также не представляют ни хроматограмм, ни масс-спектров ни для одного из этих анализов, но сообщают, что «весь аутентифицированный растительный материал P. graveolens , аутентифицированный летучих масел P. graveolens и коммерческое масло герани, приобретенное на открытом рынке, были отрицательными (менее более 10 частей на миллиард) для MHA ». 4

В Таблице II своей статьи ElSoley et al4 суммируют результаты своего исследования и с любопытством различают две терминологии в отчетах о результатах анализа ЖХ-МС-МС: НД определяется как не обнаружено (ниже LOD 10 нг / мл или 10 нг / г), и <10 нг / мл осталось неопределенным, но, возможно, предполагая, что 1,3-DMAA был обнаружен при концентрации менее 10 нг / мл.4 Эта интерпретация согласуется с резюме авторов анализов пищевых добавок (продукты A, B и C), которые, как сообщалось, содержат 1,3-DMAA в концентрациях> 10 мг / г,> 2 мг / г, и <1 мг / г, соответственно.4

Непонятно, почему авторы выбирают 10 нг / г или 10 нг / мл в качестве LOD в сводной таблице, когда для этого метода не представлены хроматографические данные (UPLC-ESI-QToF ), а более низкий LOD (2,5 нг / мл) был достигнут с использованием методологии HPLC-ESI-QQQ.

Совсем недавно Li et al5 сообщили о положительном обнаружении 1,3- и 1,4-DMAA в тканях растений герани в концентрациях от 13 до 365 нг / г и от 3 до 35 нг / г.3 нг / г соответственно. Об обнаружении также сообщалось в образцах гераниевого масла при концентрациях от 167 до 13 271 нг / г и 220 нг / г (в одном образце), соответственно. Растения герани были получены из трех областей Китая (Юньнань, Цзянсу и Гуйчжоу), а масло герани было получено из Цзианя, провинция Цзянси, Китай5

Подобно исследованию Чжан и др. 3, Ли и др. 5 использовали ВЭЖХ. -ESI-QQQ метод определения 1,3-DMAA в растительных экстрактах и ​​гераниевых маслах. Одно из основных различий между двумя исследованиями заключается в стадии экстракции.Ли и др. 5 использовали более упрощенный подход, включающий единственную стадию экстракции гексаном, которая сводит к минимуму возможные пути потерь. Для масел герани масло смешивают с гексаном и 0,5 М HCl и встряхивают на высокой скорости в течение 5 минут. Затем водный слой отделяют, при необходимости дополнительно разбавляют HCl и фильтруют через нейлоновый фильтр 0,45 мкм перед введением в ВЭЖХ. Для растительного сырья герани листья и стебли сначала измельчают на мелкие кусочки и экстрагируют ультразвуком с 0,5 М HCl.После центрифугирования водный слой один раз экстрагируют гексаном, затем отделяют, при необходимости дополнительно разбавляют HCl и фильтруют через нейлоновый фильтр 0,45 мкм перед введением в ВЭЖХ. В исследовании Ли и др. 5, 10, 20 и 40 нг / г образцы с добавками растений герани были экстрагированы с эффективностью от 85% до 105 %.5 Было обнаружено, что однократная стадия жидкостно-жидкостной экстракции гексаном улучшает эффективность метода. за счет уменьшения влияния матрицы образца и подавления ионов.

Напротив, как отмечалось выше, Zhang et al3 выполнили пять отдельных экстракций органическим растворителем и выпарили образец досуха перед восстановлением образца в метаноле.Поскольку каждый этап экстракции не является 100% эффективным, существует потенциальная потеря аналита каждый раз, когда проводится экстракция и слой отбрасывается. Zhang et al3 не сообщили об эффективности экстракции в своем исследовании. ElSohly et al4 выполнили четыре отдельных этапа экстракции и сообщили об эффективности экстракции примерно 35% .4

Разделение 1,3-DMAA было выполнено с использованием колонки C18 и подвижной фазы вода / ацетонитрил 85/15 с водной фазой, содержащей 0,1% муравьиная кислота.5 Обнаружение было выполнено с использованием MRM переходов m / z от 116 до 57 и m / z от 116 до 99, соответствующих потере углеводородных фрагментов. Используя этот метод, авторы смогли достичь предела обнаружения массы от 1 до 2 пикограммов (пг), что соответствует пределу количественного определения метода от 1 до 2 нг / г сырого веса на основе отношения сигнал / шум 3: 1. 5

С помощью этого метода авторы добились хорошего разделения диастереомеров 1,3-ДМАА (два пика) и 1,4-ДМАА (один пик) и сообщили об аналогичных спектрах индуцированной столкновением диссоциации (CID) для того же иона-предшественника ( m / z = 116) для всех трех пиков.5 Авторы отмечают, что диастереомеры 1,3-ДМАА присутствовали в равных количествах и идентичны во всех протестированных образцах, включая стандартный образец. соотношение роста от 1,2 до 1,4 (например, см. Ли и др.) 5, что согласуется с диастереомерными соотношениями 1,3-ДМАА, указанными в 13 пищевых добавках Жангом и др. 3 и в образцах, проанализированных ЭльСохли и др. 4 Только хроматограмма, представленная Ли и др. На своем рисунке 6 предлагают равные количества диастереомеров на основе отношения высоты пиков.5

Похоже, что в статье есть некоторая путаница в отношении интерпретации диастереомерных соотношений и того, присутствует ли рацемическая смесь энантиомеров 1,3-ДМАА в экстрагированных растительных материалах.5 Поскольку авторы не использовали хиральную хроматографию колонке для достижения полного разделения всех изомеров 1,3-DMAA, они не смогли разделить два пика 1,3-DMAA на соответствующие пары энантиомеров.5 Как показали Zhang et al3, 1,3-DMAA может быть разделенным на две пары энантиомеров с помощью хиральной хроматографической колонки.В этом исследовании каждая пара энантиомеров 1,3-DMAA выглядит как один пик; таким образом, нет информации относительно энантиомерных соотношений и информации о том, присутствует ли 1,3-DMAA в виде рацемической смеси. Авторы предполагают, однако, что это исследование демонстрирует присутствие рацемата в растительной ткани. Как отмечалось ранее, концентрации 1,3-ДМАА в образцах гераниевого масла варьировались от 167 до 13 271 нг / г.5 Неясно, отражает ли 1000-кратная разница в концентрациях, наблюдаемая для образцов гераниевого масла, различие в типах масла, источник растительного материала герани, метод обработки или другие потенциальные факторы.

В аналогичном исследовании Fleming et al6 проанализировали растения герани, собранные в течение трех разных сезонов и из трех разных областей Китая (Чанчжоу, Гуйян и Куньмин), на присутствие 1,3- и 1,4-DMAA с помощью ВЭЖХ. Метод ESI-QQQ. Процедура экстракции была адаптирована из процедуры, описанной Ли и др. 5 Растительный материал герани сначала экстрагируется 0,5 н. HCl обработкой ультразвуком. 6 После центрифугирования водный слой один раз экстрагировали гексаном, затем разделяли и при необходимости разбавляли HCl. , и отфильтрован с 0.Нейлоновый фильтр 45 мкм перед введением в ВЭЖХ. Обратите внимание, что образцы сначала были проанализированы без стадии экстракции гексаном. Этот шаг был позже добавлен для уменьшения матричных эффектов. Таким образом, результаты представлены для некоторых образцов с этапом экстракции гексаном и без него. В этом исследовании эффективность экстракции образцов герани с шипами варьировалась от 54% до 107% для 1,3-DMAA и от 63% до 86% для 1,4-DMAA.6

Было выполнено разделение 1,3-DMAA с использованием колонки Kinetex C18 и мобильной фазы 82/18 вода / ацетонитрил, причем водная фаза содержит 1% муравьиной кислоты.6 Обнаружение было выполнено с использованием MRM переходов m / z от 116 до 57 и m / z от 116 до 99,7, соответствующих потере углеводородных фрагментов. Используя этот метод, авторам удалось достичь пределов обнаружения 1,3- и 1,4-DMAA в растительном экстракте порядка от 0,6 до 3,2 мкг / л (ppb) .6 Это соответствует пределу обнаружения в около 20 нг / г в растительном материале.

Авторы обнаружили оба диастереомера 1,3-DMAA на хроматограммах и зарегистрировали диастереомерные отношения, равные 1.14 ± 0,08 в стандартах. Были зарегистрированы отношения 1,10 ± 0,01 в образце Чанчжоу S11-1, 1,25 ± 0,03 в образце Чанчжоу S11-2, 1,02 в образце Чанчжоу 1 и 1,16 ± 0,1 в образце Чанчжоу 3, что свидетельствует о естественной изменчивости диастереомерных соотношений6

Растительный материал Changzhou S-11 был получен из Intertek Laboratories и получен из того же образца Цзянсу, о котором сообщил Ли и др. 5 Для этого образца Флеминг и др. 6 сообщили о концентрации 1,3-DMAA 94,7 ± 15,1 нг / г без учета стадия экстракции гексаном и 254 ± 17 нг / г со стадией экстракции гексаном.Для сравнения Li et al5 сообщили о 165 нг / г для образца, взятого из того же растительного материала. Аналогичным образом, Fleming et al6 сообщили о концентрации 1,4-DMAA 13,5 ± 1,8 нг / г без стадии экстракции гексаном и 39,8 нг / г с стадией экстракции гексаном 6, в то время как Li et al5 сообщили о концентрации 35,3 нг / г для образец, взятый из того же растительного материала. Сходство результатов, полученных двумя разными лабораториями, анализировавшими подвыборки из одного и того же растительного материала с использованием схожих методов, является подтверждающим доказательством присутствия 1,3- и 1,4-DMAA в некоторых китайских видах герани.

Другие образцы растительного материала, полученные из Чанчжоу, Китай, также содержали 1,3- и 1,4-ДМАА. Fleming et al6 обнаружили 213 нг / г 1,3-DMAA и 52 нг / г 1,4-DMAA в одном образце, собранном в марте 2012 г. (Changzhou 1), и 68,8 ± 36,5 нг / г 1,3-DMAA и 118 ± 45 нг / г 1,4-DMAA во втором образце, собранном в мае 2012 г. (Чанчжоу 3). Это отражает изменчивость между растениями или, возможно, сезонные эффекты6.

Некоторые образцы были повторно проанализированы с использованием метода стандартных добавок, метода, который часто используется для минимизации матричных эффектов в сложных образцах, таких как биологические материалы.Используя метод стандартных добавок, Fleming et al6 обнаружили несколько более высокие уровни 1,3- и 1,4-DMAA в образце Changzhou 3 при концентрациях 97 ± 20 нг / г и 162 ± 48 нг / г, соответственно. Несколько более высокие уровни 1,3- и 1,4-DMAA были также обнаружены в образце Changzhou S11-2 — 496 ± 46 нг / г и 68 ± 7 нг / г, соответственно.

В других образцах растительного сырья герани, полученных из Китая, концентрации 1,3- и 1,4-ДМАА были на уровне или ниже предела обнаружения около 20 нг / г.6 1,3-DMAA был обнаружен в одном образце растения герани из Куньмина, Китай, около предела обнаружения 20 нг / г. Однако повторный анализ оказался ниже предела обнаружения метода. Концентрации 1,3-DMAA и 1,4-DMAA во всех других образцах из Куньмина и Гуйяна, Китай, были ниже предела обнаружения, составляющего примерно 20 нг / г.6

В короткой статье, подготовленной Лиси и др. 2, пять различных коммерчески доступные масла герани были проанализированы на присутствие 1,3-DMAA с помощью GC-MS. Источниками масла герани в пяти образцах были Египет, Франция и Новая Зеландия.Образцы масла экстрагировали 1 М HCl и трет-бутилметиловым эфиром (ТВМЕ). После дополнительной обработки водный слой подщелачивали с использованием 6 М КОН и добавляли гексан и пентафторбензилхлорид (ПФБКЛ) в качестве дериватизирующего агента. Слой гексана выпаривали досуха и восстанавливали в этилацетате для впрыскивания в колонку для ГХ. Об эффективности экстракции не сообщалось.2

Разделение производного 1,3-ДМАА проводили с использованием колонки Agilent HP Ultra 2. Полуколичественный анализ был основан на мониторинге выбранных ионов при m / z 238.Разделение обоих диастереомеров 1,3-DMAA было достигнуто с использованием этого метода, хотя авторы неправильно относят эти два пика к энантиомерам. Авторы сообщают, что 1,3-DMAA не был обнаружен ни в одном из пяти масел герани, однако не сообщалось о пределах обнаружения и не представлены стандартные концентрации или данные калибровки.2

Наконец, в коротком сообщении Di Lorenzo et al. 7 стеблей и листьев семи различных видов / сортов Pelargonium , полученных из питомника растений в Италии, были проанализированы на присутствие 1,3-DMAA с использованием ВЭЖХ с УФ-детектированием.Стебли и листья сначала экстрагировали метанолом при кипячении с обратным холодильником. Затем метанольные экстракты фильтровали, упаривали досуха и ресуспендировали в 1-2 мл метанола.7 В то время как во всех других исследованиях, рассмотренных в этой статье, использовалась кислая экстракционная среда, кислота здесь не добавлялась. Конечные экстракты метанола были дериватизированы с использованием о-фталальдегида. Разделение достигалось с использованием обращенно-фазовой колонки Synergi 4 мкм MAX-RP или Lichrocart 5 мкм RP18 и градиентного элюирования с использованием смеси ацетата натрия / тетрагидрофурана и метанола.Обнаружение производного 1,3-DMAA-o-фталевого альдегида было выполнено с использованием детектора с диодной матрицей с количественным определением при 334 нм.7

Извлечение 1,3-DMAA с шипами в образцах стеблей и листьев было более 97%, но пределы обнаружения были повышены до 600 и 1200 нг / г для стеблей и листьев соответственно. Для сравнения, Li et al5 и Fleming et al6 сообщили о пределах обнаружения порядка от 2 до 20 нг / г. Авторы сообщают, что не было обнаружено обнаруживаемых количеств 1,3-DMAA ни в одном из семи протестированных видов / сортов Pelargonium , а также в коммерческом масле герани из P.graveolens , выращенный в Африке, который также был протестирован.7

Анализы эфирных масел

Растения герани в основном выращиваются для производства эфирных масел для использования в косметике, парфюмерии и ароматерапии. Были опубликованы многочисленные исследования, определяющие основные составляющие и документирующие условия, влияющие на выход и состав добытого масла, включая метод дистилляции, 9,10 сезонные эффекты и климатические условия, 11–13 обработки проб (т.е. возраст листьев, высушены ли они. перед перегонкой) 14, а также почвенно-влажностные условия.15 Эти и другие исследования16–19 обычно обеспечивают химический распад компонентов масла, однако ни одно из этих исследований не подтвердило присутствие 1,3-DMAA. Некоторые ссылаются на эту работу как на дополнительное подтверждающее доказательство отсутствия 1,3-DMAA в растениях герани. 2,20 Однако существует ряд потенциальных причин, по которым эти исследования не сообщают об обнаружении 1,3-DMAA в растениях герани. масло.

Во-первых, существует значительный разброс в составе эфирных масел, полученных из растений герани.Международные стандарты классифицируют масла герани на три основных типа: африканский тип, включая масла из Алжира, Марокко и Египта; тип Бурбон с острова Реюньон; и китайский тип. Сообщается, что 90% эфирного масла состоит из примерно 30 соединений, относительные концентрации которых различаются среди различных типов масел.21 Остальные соединения, присутствующие в следовых количествах, могут значительно различаться. Например, Lalli et al16 идентифицировали в общей сложности 315 различных соединений в эфирных маслах, дистиллированных из 13 различных южноафриканских видов Pelargonium (18 образцов) с помощью ГХ и ГХ-МС.Однако общее количество компонентов, идентифицированных в одном образце эфирного масла, варьировалось от 52 до 87, и почти треть соединений (101 из 315) была обнаружена только в одном из 18 проанализированных образцов. Джалали-Херави и др. 19 идентифицировали 61 соединение в образце эфирного масла, полученного из растений герани, культивируемых в Иране, с помощью ГХ-МС. Этот список, однако, был неполным и в конечном итоге расширился до 85 соединений с добавлением методов хемометрического разделения. Шелли и Марриотт20 идентифицировали 65 различных соединений в эфирном масле египетской герани с использованием метода двумерной ГХ-МС.Kulkarni et al17 идентифицировали 48 компонентов эфирного масла, экстрагированного из трех клонов Бурбона, выращенных в Индии. Очевидно, что состав эфирных масел, извлеченных из различных типов растений, значительно варьируется.

Во-вторых, хотя пределы обнаружения обычно не сообщаются, кажется, что пределы обнаружения недостаточно низкие для обнаружения 1,3-DMAA в масле. Большинство этих исследований эфирных масел сообщают, что следовые уровни компонентов составляют порядка 0,01% масляной фракции, что эквивалентно 100 000 нг / г.Напротив, Li et al5 и Fleming et al6 сообщили о концентрациях 1,3-DMAA порядка 500 нг / г или менее в частях растения герани и масле, за исключением одного образца масла с концентрацией 1,3-DMAA 13000. нг / г или 0,0013%. Низкие пределы обнаружения, достигнутые Ли и др., 5, Флемингом и др., 6 и др. 3,4, требуют стадии кислотной экстракции и концентрирования перед анализом, что обычно не выполняется для анализа эфирных масел. Однако в одном исследовании, проведенном Вернином и др. [22], была выделена основная фракция масла бурбона герани путем экстракции 10% -ным раствором HCl с последующей промывкой диэтиловым эфиром, нейтрализацией гидроксидом натрия и экстракцией эфиром.Авторы обнаружили 2-метил-3-амино-1-пентен на низких уровнях вместе с двумя соединениями пиридина и другими неидентифицированными аминосоединениями в масле, однако 1,3-DMAA не было идентифицировано. Тем не менее, это исследование предполагает, что низкие уровни аминов, которые в противном случае остались бы незамеченными, могут быть обнаружены в некоторых маслах герани после кислотной экстракции и очистки.

Наконец, методы ГХ, используемые для анализа эфирных масел во всех вышеупомянутых исследованиях, не могут быть оптимизированы для анализа 1,3-DMAA, который имеет относительно низкую температуру кипения и будет быстро элюироваться через колонку. .Первые элюирующие соединения, о которых сообщалось в большинстве анализов эфирных масел, такие как цис-3-гексенол и α-пинен, имеют температуру кипения порядка 155–157 ° C.23 Поскольку 1,3-DMAA имеет сравнительно более низкая точка кипения от 130 ° C до 135 ° C, 24 она будет иметь тенденцию появляться как один из самых ранних пиков элюирования и потенциально находится за пределами области интереса для многих из этих исследований, особенно если имеется запрограммированная задержка растворителя24 Vorce et al. al24 отмечают, что анализ 1,3-DMAA возможен с помощью ГХ-МС, но необходимо проявлять большую осторожность для оптимизации параметров ГХ для этого соединения.

В недавней патентной заявке компании Northern Innovations and Formulations Corp. на травяную добавку, приготовленную из герани, описан метод экстракции, который утверждает, что оптимизирует содержание 1,3-DMAA в масле путем экстракции масла смесью спирта и воды, разделение масляной и водной фаз, концентрирование и сушка водной фазы до порошка, а затем, после очистки масла, смешивание порошка с очищенным маслом.25 Этот процесс заявлен для достижения концентраций 1,3-DMAA в диапазоне От 1% до 3%, что свидетельствует о том, что большая часть 1,3-DMAA, экстрагированного при производстве эфирных масел, может оказаться в водной фазе.Это может быть еще одной потенциальной причиной того, почему анализы эфирных масел не могут определить измеримые уровни 1,3-DMAA.

Выводы

Недавние исследования, обобщенные в этом отчете, предоставляют противоречивые доказательства того, что 1,3-DMAA естественным образом встречается в некоторых видах растений герани. Однако различия в источниках проб, процедурах извлечения и методах анализа могут быть причиной противоречивых результатов. Род Pelargonium включает более 270 различных видов, большинство из которых являются коренными жителями Южной Африки, но многие из них в настоящее время широко культивируются в России, Египте, Индии и Китае, который в настоящее время является крупнейшим производителем гераниевого масла.16,21,26 Многие сорта, выращиваемые для производства эфирного масла, являются межвидовыми гибридами21, и исследования показали, что состав и качество экстрагированного масла зависят от сорта растения, метода экстракции, типа почвы и климатических условий. 9,16,17,21 Таким образом, неудивительно, что некоторые образцы растительного сырья и экстрагированных масел содержат 1,3-DMAA, тогда как другие нет.

На основании исследований, рассмотренных в этой статье, обработка может также играть роль, поскольку 1,3-DMAA с большей вероятностью будет обнаружен в образцах, извлеченных в лаборатории из стеблей и листьев растений, чем в коммерчески доступных продуктах, продаваемых для использования в медицине и ароматерапия.27 Причина этого может быть связана с коммерческими процедурами экстракции, разработанными для повышения извлечения эфирных масел, а не 1,3-DMAA. Недавняя патентная заявка предполагает, что большая часть 1,3-ДМАА, экстрагированного в процессе производства эфирных масел, может оказаться в водной фазе.25

Три исследования, оцененных в этом отчете, включали анализ листьев и стеблей растений герани, собранных в Китай и Индия. Ли и др. 5 обнаружили 1,3-ДМАА в аутентифицированных растительных материалах, собранных в трех областях Китая (Юньнань, Цзянсу и Гуйчжоу), а Флеминг и др .6 обнаружили 1,3-ДМАА в аутентифицированных растительных материалах из Чанчжоу, Китай и, при низких уровнях, в растительном сырье из Гуйяна, Китай.Однако 1,3-DMAA не было обнаружено в растительных материалах, собранных в Куньмине, Китай. ElSohly et al4 проанализировали аутентичные растительные материалы из Индии и США (штат Миссисипи) и сообщили об отсутствии обнаруживаемых количеств 1,3-DMAA при пределе обнаружения 100 частей на миллиард. Однако проверка хроматограмм предполагает качественное присутствие 1,3-ДМАА на уровнях ниже 100 частей на миллиард в некоторых образцах аутентифицированного растительного материала. Авторы также не сообщили об обнаружении 1,3-DMAA с помощью метода ВЭЖХ с гораздо более низкими пределами обнаружения (2.5 частей на миллиард). Однако этот метод не позволил разделить диастереомеры 1,3-DMAA. Третий метод (UPLC-ESI-QTOF) с расчетным пределом обнаружения 10 частей на миллиард также использовался для анализа образцов. Хотя никаких данных по этому методу представлено не было, сводная таблица, представленная авторами, предполагает, что 1,3-DMAA мог быть обнаружен в высушенных стеблях растений на уровне ниже 10 частей на миллиард. Таким образом, все три исследования, включающие экстракцию растительного сырья, обеспечивают количественную или качественную поддержку естественного присутствия 1,3-DMAA в растениях герани.

Четыре из рассмотренных исследований включали анализ коммерчески доступных масел герани. Чжан и др. 3 проанализировали восемь различных масел герани, полученных из Китая и Египта. Lisi et al2 проанализировали пять масел герани, полученных из Египта, Франции и Новой Зеландии. ElSohly et al4 проанализировали 20 различных образцов коммерческого масла герани, но не сообщили об источниках; и Ли и др. проанализировали образцы гераниевого масла, полученные на фабрике по производству ароматизаторов в провинции Цзянси, Китай. Только Ли и др. 5 обнаружили 1,3-ДМАА в товарном нефтепродукте.

Все восемь образцов гераниевого масла, проанализированные Чжаном и др. 3, как сообщается, были извлечены из растений герани с использованием паровой дистилляции. Lisi et al2 предполагают, что из-за летучести 1,3-DMAA паровая дистилляция не может быть подходящей техникой для его экстракции вместе с нефтепродуктом, и что альтернативный процесс холодного отжима дает больше шансов удерживать 1,3- ДМАА в масле. Zhang et al3 сообщили об отсутствии обнаружения 1,3-DMAA ни в одном из образцов гераниевого масла с использованием метода HPLC-ESI-LIT с пределом обнаружения 50 частей на миллиард, а также об отсутствии обнаружения 1,3-DMAA с помощью альтернативного HPLC-ESI. -QQQ метод с пределом обнаружения 10 частей на миллиард.Авторы использовали несколько сложную многоступенчатую технику экстракции для проб масла и не сообщили об эффективности экстракции для этого метода. В методе HPLC-ESI-LIT использовалась хроматографическая колонка с хиральной стационарной фазой, которая, как сообщается, способна адекватно удерживать первичные амины. Однако авторам не удалось добиться разделения ни энантиомеров 1,3-ДМАА, ни диастереомеров в стандартах. Аналогичным образом, только один пик был зарегистрирован с использованием метода HPLC-ESI-QQQ3.

Lisi et al2 проанализировали пять образцов масла герани из Египта, Франции и Новой Зеландии; три образца были извлечены с помощью перегонки с водяным паром.1,3-DMAA не был обнаружен ни в одном из образцов масла, но о пределах обнаружения не сообщалось. ElSohly et al4 также сообщили об отсутствии детектируемых количеств 1,3-DMAA с пределом обнаружения 100 частей на миллиард с использованием одного метода. Однако опубликованные хроматограммы для одного из образцов масла до и после добавления 1,3-DMAA на пределе обнаружения предполагают качественное присутствие 1,3-DMAA в исходном образце. Кроме того, сводная таблица, включенная в документ, предполагает, что 1,3-DMAA может присутствовать в 25% (5 из 20) промышленных проб масла на уровнях ниже 10 частей на миллиард.4

Наконец, Ли и др. 5 обнаружили 1,3- и 1,4-ДМАА в образцах гераниевого масла, полученных на заводе ароматизаторов в Цзиане, провинция Цзянси, Китай. Концентрации 1,3-DMAA варьировались от 167 до 13 271 нг / г в трех образцах. 1,4-ДМАА был обнаружен только в одном из образцов в концентрации 220 нг / г. За исключением одного образца гераниевого масла, проанализированного Ли и др., 5 концентраций 1,3-DMAA, обнаруженных в растительных материалах герани и экстрагированных маслах, обычно меньше 500 частей на миллиард.

Только Zhang et al4 сообщают о разделении 1,3-DMAA на его четыре стереоизомера, выполненном с использованием GC-FID, снабженного хиральной неподвижной фазой.Однако этот метод использовался для анализа пищевых добавок, а не растительного сырья герани. Таким образом, ни в одном из пяти исследований не было представлено данных, касающихся энантиомерной чистоты 1,3-ДМАА, экстрагированного из растений и масел герани. Во всех пяти исследованиях сообщалось о разделении 1,3-DMAA на его диастереомеры, а диастереомерные соотношения были аналогичными для 1,3-DMAA, обнаруженного в коммерчески доступных стандартах, пищевых добавках, экстрактах растительного сырья герани и масле герани.

В целом, эти исследования показывают, что 1,3-DMAA естественным образом содержится в некоторых, но не во всех, растениях герани и экстрагированных гераниевых маслах. Количественные5,6 и / или качественные4 доказательства присутствия 1,3-DMAA в растительных материалах с большей вероятностью можно найти в исследованиях, включающих экстракцию растительных материалов в лаборатории, а не в анализе коммерчески доступных продуктов, продаваемых для использования в медицине и ароматерапии. . Вероятно, это связано с различиями в обработке. Паровая дистилляция, которая, по-видимому, является предпочтительной процедурой экстракции товарных масел, может не подходить для удержания 1,3-DMAA.В лаборатории обнаружению 1,3-DMAA, по-видимому, способствуют процедуры экстракции, включающие меньшее количество этапов экстракции, что сводит к минимуму возможность потерь. В этом обзоре все исследования, сообщающие об отрицательных результатах присутствия 1,3-DMAA, включают процедуры экстракции, включающие стадию выпаривания до высыхания или удаление растворителя в вакууме, что может отрицательно повлиять на эффективность экстракции из-за летучести 1,3-DMAA.

Наконец, эти исследования показывают, что существует значительная вариабельность содержания 1,3-DMAA от растения к растению.В растительных материалах, в которых был количественно обнаружен 1,3-DMAA, все из которых получены из Китая, концентрации обычно менее 500 частей на миллиард. Однако некоторые растения из Китая не содержат обнаруживаемых уровней 1,3-DMAA, в то время как одно масло герани, полученное из Китая, содержало более 13 ppm 1,3-DMAA.

Доказательства присутствия 1,3-диметиламиламина (1,3-DMAA) в растительных материалах герани

Реферат

1,3-Диметиламиламин (1,3-DMAA) представляет собой алифатический амин со стимулирующими свойствами, которые, как сообщается, в природе встречается только в растениях герани ( Pelargonium graveolens ).Присутствие 1,3-DMAA в растениях герани было впервые сообщено в статье, опубликованной в 1996 году, но некоторые поставили под сомнение идентификацию 1,3-DMAA в этом исследовании. С тех пор был опубликован ряд дополнительных исследований, в которых в основном сообщалось об отсутствии 1,3-DMAA в растениях герани и коммерческих маслах герани. Однако в двух недавних исследованиях 1,3-DMAA был обнаружен в тканях растений герани и в образце гераниевого масла с использованием упрощенного метода экстракции тканей и масла, полученных из Китая.Обнаружен ли 1,3-DMAA в растениях в естественных условиях, имеет большое значение для того, как коммерческие продукты, содержащие 1,3-DMAA, регулируются Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США. В этой статье рассматриваются различия в исходных материалах, процедурах экстракции и аналитических подходах в попытке рационализировать очевидно противоречивые доказательства присутствия 1,3-DMAA в растительных материалах герани.

Ключевые слова: DMAA, герань, Pelargonium graveolens , натуральные продукты

Введение

1,3-Диметиламиламин (1,3-DMAA), также известный как 1,3-диметилпентиламин и метилгексанамин (MHA), представляет собой алифатический амин со стимулирующими свойствами, который, как сообщается, в природе встречается только в растениях герани ( Pelargonium graveolens ).Присутствие 1,3-DMAA в растениях герани было впервые сообщено в статье, опубликованной в журнале Guizhou Institute of Technology by Ping et al.1 Авторы обнаружили присутствие 1,3-DMAA в концентрации 0,66% в масло герани, выделенное из свежих стеблей и листьев растения P. graveolens , собранного в районе Жунджанг провинции Гуйчжоу в Китае. Целью этого исследования было определить основные компоненты эфирного масла, чтобы обеспечить основу для выбора породы и оценить качество добытого масла.Однако с тех пор на него все чаще ссылаются как на доказательство существования 1,3-DMAA в качестве природного продукта у некоторых видов герани. В исследовании Ping et al. Авторы использовали газовую хроматографию-масс-спектрометрию (ГХ-МС) для идентификации основных соединений в масле; но некоторые ставят под сомнение идентификацию 1,3-DMAA в масле на основании очевидной неправильной маркировки представленной хроматограммы, несогласованного порядка хроматографического элюирования и отсутствия подтверждения с использованием известного стандарта. дополнительные исследования были предприняты с явной целью установить, присутствует ли 1,3-DMAA в качестве натурального продукта в растениях герани и маслах, полученных из герани.2–7 Ответ на этот вопрос имеет большое значение для того, как коммерческие продукты, содержащие 1,3-DMAA, регулируются Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США (FDA). Актуальность этого вопроса возросла в последнее время после того, как в апреле 2012 года FDA предупредило, что синтетически произведенный 1,3-DMAA не может использоваться в качестве активного ингредиента в пищевой добавке, поскольку он не классифицируется как «диетический ингредиент». категория, которая включает ботанические вещества.8

Этот документ содержит обзор недавних исследований в отношении различий в исходных материалах, процедурах экстракции и аналитических подходах, а также общую оценку существующих доказательств присутствия 1,3-DMAA в природных изделия из герани.

Оценка последних исследований

В июле 2012 года Wiley Online опубликовала статью Чжана и др. 3. Авторы проанализировали восемь различных масел герани на наличие 1,3-DMAA, используя два разных масс-спектрометрических метода. Четыре масла были получены из растений, выращенных в Китае, а четыре масла — из растений, выращенных в Египте. Масла герани были закуплены у GNC и Amazon и экстрагированы с использованием многоступенчатой ​​процедуры. Масла обрабатывали, сначала добавляя воду и концентрированный раствор HCl, а затем дважды экстрагируя смесью 50/50 гексан / этилацетат.После каждой стадии экстракции органическую фазу отбрасывали. Затем водную фазу обрабатывали 50% -ным раствором NaOH и еще трижды повторно экстрагировали раствором 50/50 гексан / этилацетат. Органическую часть сохраняли, упаривали досуха и восстанавливали в метаноле, содержащем 0,1% муравьиной кислоты, для инъекции в высокоэффективный жидкостный хроматограф. Поскольку 1,3-DMAA имеет заметное давление пара при комнатной температуре (0,65 мм рт. Ст. При 25 ° C), испарение досуха может отрицательно сказаться на эффективности экстракции, о чем авторы не сообщили.

Экстракты анализировали с использованием двух различных масс-спектрометрических методов: высокоэффективная жидкостная хроматография-ионизация электрораспылением-линейная ионная ловушка (HPLC-ESI-LIT) и метод ВЭЖХ-электрораспылительной ионизации-тройной квадруполь (HPLC-ESI-QQQ). метод. В методе HPLC-ESI-LIT отделение 1,3-DMAA от других компонентов гераниевого масла осуществляли с использованием хроматографической колонки LARIHC CF6-P и подвижной фазы ацетонитрил / метанол 90/10, содержащей 0,1% муравьиной кислоты. LARIHC CF6-P представляет собой хиральную неподвижную фазу циклофруктана 6, дериватизированную алкилом, с известной способностью разделять простые алифатические рацемические амины.Однако такое разделение 1,3-DMAA не наблюдалось на хроматограмме, представленной в дополнительном материале, предоставленном авторами.3

1,3-DMAA имеет два хиральных центра, в результате чего образуются две пары энантиомеров, причем каждая пара энантиомеров составляет диастереомер. Энантиомеры трудно разделить, и для достижения разделения часто требуется реакция с хиральным реагентом. Например, Zhang et al3 смогли разделить все четыре изомера 1,3-DMAA в 13 коммерчески доступных пищевых добавках и двух синтетических стандартах с помощью ГХ, снабженного колонкой Astec ChiralDex G-DM и пламенно-ионизационным детектором (FID).Авторы сообщили, что диастереомерные отношения 1,3-DMAA, измеренные в 13 пищевых добавках, варьировались от 1,23 до 1,43 и были аналогичны диастереомерным отношениям 1,22 ± 0,06 и 1,42 ± 0,09, указанным для двух синтетических стандартов. Кроме того, авторы сообщили, что все энантиомеры в пищевых добавках и синтетических стандартах были рацемическими.3

Однако с помощью метода HPLC-ESI-LIT был обнаружен только один пик в образцах гераниевого масла с добавками. Обнаружение 1,3-DMAA осуществляли с помощью масс-спектрометра с линейной ионной ловушкой, используя мониторинг выбранных ионов при m / z 116.2 с ESI в положительном режиме. ESI — это метод мягкой ионизации, и m / z 116,2 соответствует иону 1,3-DMAA аммония. Одним из недостатков ESI является возможность подавления ионов, что было отмечено авторами. Подавление ионов — это матричный эффект, который может отрицательно повлиять на производительность системы и пределы обнаружения. Предел обнаружения (LOD), указанный для масла герани с шипами с использованием метода HPLC-ESI-LIT, составлял 50 частей на миллиард (предполагается, что это масса). Авторы сообщили, что при использовании этого метода ни в одном из 8 образцов гераниевого масла 1,3-DMAA не обнаружено.

Второй метод, используемый для анализа 1,3-DMAA в масле герани, включал стадию дериватизации с использованием 1-диметиламино-нафталин-5-сульфонилхлорида (дансилхлорида). Дериватизация с использованием дансилхлорида обычно обеспечивает повышенную чувствительность с помощью методов масс-спектрометрии ESI.

Разделение дериватизированного продукта проводили с использованием колонки XB-C18 с подвижной фазой ацетонитрил / вода 70/30, причем водная фаза содержала 0,1% трифторуксусной кислоты. Эта колонка должна была позволить разделить пару дериватизированных диастереомеров 1,3-DMAA.Однако снова только один пик был идентифицирован на хроматограмме пробы масла герани с добавками (Zhang et al, Рисунок 5: Обратите внимание, что этот рисунок показывает, что образец масла содержал 30 частей на миллиард 1,3-DMAA, тогда как экспериментальная запись — вверх означает, что в образцы добавлено 100 частей на миллиард 1,3-DMAA). Обнаружение осуществляли с использованием мониторинга множественных реакций (MRM) перехода m / z 349 к 171, соответствующего потере первичного дансильного фрагмента. Предел детализации, полученный для масла герани с добавками с использованием метода HPLC-ESI-QQQ, составил 10 частей на миллиард (предполагается, что это массовое значение).Авторы отмечают, что LOD относится к концентрации чистого 1,3-DMAA, а не производного продукта, и сообщают, что при использовании этого метода 1,3-DMAA не был обнаружен ни в одном из 8 образцов гераниевого масла. Неясно, как авторы установили LOD для любого метода.

В другом исследовании ElSohly et al4 проанализировали образцы аутентифицированного растительного сырья и экстрагированных масел из P. graveolens, , а также ряда коммерческих масел, используя ГХ-МС и два различных метода ЖХ-МС-МС: ВЭЖХ- ESI-QQQ и метод квадрупольной времяпролетной масс-спектрометрии с ультраэффективной жидкостной хроматографией (UPLC-QTOF-MS).

Образцы масла смешивали с гексаном и экстрагировали 1 н. HCl. Водный слой доводили до pH 9-10 с помощью 10 н. КОН и экстрагировали дихлорметаном (DCM). Затем раствор DCM дериватизировали гептафтормасляным ангидридом (HFBA), подвергали дальнейшей обработке и затем анализировали с помощью GC-MS.

Растительные материалы первоначально экстрагировали 0,1 н. Раствором HCl в метаноле. После выпаривания исходного растворителя остаток растворяли в 1 н. HCl и обрабатывали, как описано выше для образцов масла.Было определено, что эффективность экстракции составляет приблизительно 35% на основании извлечения внутреннего стандарта (2-амино-6-метилгептана).

Разделение производного 1,3-DMAA-HFB проводили на ГХ с использованием колонки Agilent J&W DB-5MS. Масс-спектрометр работал в выбранном режиме мониторинга ионов при m / z 240, 282 и 296. На основе стандартных хроматограмм, представленных на Рисунке 3 их статьи, коэффициент отклика для иона m / z 240 примерно в 100 раз больше, чем коэффициенты отклика для ионов m / z 282 и 296.4 Несмотря на более низкую чувствительность ионов m / z 282 и 296, авторы полагались на все три иона для положительной идентификации, что увеличило LOD до 100 частей на миллиард. Диастереомеры DMAA с расчетным диастериомерным соотношением 1,13 на основе измеренных высот пиков.4 Хотя авторы сообщили, что «ни одно из аутентифицированных эфирных масел или растительного материала P. graveolens P. graveolens , ни какое-либо коммерческое летучее масло пеларгонии (масло герани) не содержит MHA. на обнаруживаемых уровнях »4, проверка выбранных ионных хроматограмм для контрольных образцов и образцов гераниевого масла с добавками позволяет предположить качественное присутствие 1,3-DMAA в концентрациях ниже 100 частей на миллиард.Представлено наложение выбранных ионных хроматограмм, записанных при m / z 240 для отрицательного контроля гераниевого масла (представленного в ElSohly et al, рис. 4) 4 и отрицательного гераниевого масла с добавлением 0,1 ppm (100 нг / мл) 1. 3-DMAA (ElSohly et al, рис. 5) .4

Наложение ГХ-МС выбранных ионных хроматограмм производного DMAA-HFB, записанных при m / z 240 для образца гераниевого масла (красный) и образца гераниевого масла с добавлением 0,1 ppm DMAA (черный). Основные хроматограммы воспроизведены с разрешения Oxford University Press от ElSohly et al.4 Масло пеларгонии и метилгексанамин (MHA): аналитические подходы, подтверждающие отсутствие MHA в аутентифицированном растительном материале и масле Pelargonium graveolens .

Хроматограммы слегка смещены в наложении из-за сдвига времени удерживания, наблюдаемого между двумя сериями, и имеют разные масштабы по оси y. Этот сдвиг времен удерживания согласуется со сдвигом времен удерживания, наблюдаемым для пика внутреннего стандарта. Как указано в, добавление 1,3-DMAA вызывает заметное увеличение двух пиков, наблюдаемых в контрольном образце гераниевого масла, что свидетельствует о присутствии 1,3-DMAA (показывающем оба диастереомера) в этом образце.Расчетные диастериомерные отношения равны 1,14 и 1,22 в пробах с добавками и без них. Небольшая разница в оценочных диастериомерных соотношениях, вероятно, отражает естественную изменчивость этого параметра, как было предложено в исследовании Zhang et al3, и / или различия между натуральным продуктом и синтетическим стандартом.

Картина менее четкая при m / z 296 () из-за более низкой чувствительности для этого иона (т. Е. Уровень пика близок к LOD для этого иона). Наблюдается заметное увеличение одного пика при времени удерживания около 3.95 минут в пробе с добавкой, но мы не видим распознаваемой пары диастереомеров с соотношением ~ 1,15 в образце с добавкой. При m / z 282 (не показано) в пробе с добавлением присутствует распознаваемая пара диастереомеров. Тем не менее, пиковая интенсивность, по-видимому, примерно в 5-10 раз превышает базовый шум, что соответствует заявленному уровню детализации в 100 частей на миллиард (т. Е. На уровне пиков). Таким образом, в то время как более чувствительный ион m / z 240 ясно указывает на присутствие 1,3-DMAA в образце гераниевого масла без добавок, низкая концентрация (менее 100 частей на миллиард) не наблюдается в менее чувствительном m / z 296. и 282 ионных хроматограммы.

Наложение выбранных ионных хроматограмм ГХ-МС производного DMAA-HFB, записанных при m / z 296 для образца гераниевого масла (записано красным) и образца гераниевого масла с добавлением 0,1 ppm DMAA (записано черным). Основные хроматограммы воспроизведены с разрешения Oxford University Press от ElSohly et al. 4 Масло пеларгонии и метилгексанамин (MHA): аналитические подходы, подтверждающие отсутствие MHA в аутентифицированном растительном материале и масле Pelargonium graveolens .

Хроматограммы, представленные для экстрагированного растительного материала (ElSohly et al, рис.6) 4 кажутся похожими на хроматограммы, представленные для масла герани (ElSohly et al, рис. 4) .4 Наложение хроматограмм экстрагированного растительного материала с хроматограммами масла герани с шипами также указывает на качественное присутствие 1,3- DMAA в экстрагированном растительном материале при m / z 240 (не показано). Обратите внимание, что авторы не представляют хроматограммы для растительного сырья с добавками. Расчетное диастериомерное соотношение в растительном материале без добавок при m / z 240 составляет 1,21, как и в образце гераниевого масла без добавок.Еще раз, мониторинг при m / z 296 и 282 оказался непригодным для обнаружения низкого уровня (менее 100 частей на миллиард) 1,3-DMAA в этом исследовании.

ElSohly et al4 также использовали два разных метода ЖХ-МС-МС для анализа масел герани и проверенных экстрактов растительного материала. В первом методе использовалась ВЭЖХ с тройным квадрупольным масс-спектрометром, оснащенным источником ESI (HPLC-ESI-QQQ) — аналогично методу, используемому Чжаном и др. 3. Та же процедура экстракции, что и для анализа ГХ-МС, использовалась для ВЭЖХ. -ESI-QQQ анализ, за ​​исключением того, что они не выполняли стадию дериватизации, а конечный раствор DCM упаривали досуха и помещали в метанол для впрыскивания в колонку для ВЭЖХ.Опять же, испарение досуха могло отрицательно сказаться на эффективности экстракции.

Разделение 1,3-DMAA выполняли с использованием колонки Synergi Hydro-RP C18 и бинарного градиента растворителя с использованием подвижной фазы вода / ацетонитрил с каждым растворителем, содержащим 0,1% муравьиной кислоты. / z от 116 до 57 и m / z от 116 до 41 переходов, соответствующих потере углеводородных фрагментов. Авторы сообщают, что LOD и LOQ для этого метода составляют 2,5 частей на миллиард, хотя нет описания того, как этот LOD был определен.Хроматограммы MRM для неэкстрагированного 1,3-DMAA показали один большой пик при времени удерживания 4,2 минуты, что указывает на отсутствие хроматографического разделения диастереомеров 1,3-DMAA.4 Авторы представляют репрезентативные хроматограммы для образцов масла, растительных материалов. , и три различных коммерческих продукта, однако качество воспроизведения хроматограмм на бумаге оставляет желать лучшего. Тем не менее, аналогичные пики при времени удерживания 4,2 минуты наблюдаются на хроматограммах P. graveolens и аутентифицированного масла P.graveolens (ElSohly et al, рис. 11A, 11B и 12A) 4, предполагая качественное присутствие 1,3-DMAA в растительных материалах. жидкостная хроматография (UPLC) с источником ESI и квадрупольным времяпролетным (QToF) масс-спектрометром для обнаружения (UPLC-ESI-QToF) .4 Разделение выполняли с использованием колонки UPLC BEH C18. Детектирование осуществлялось с помощью мониторинга выбранных ионов при m / z = 116,1439. LOD для этого метода был оценен в 10 частей на миллиард, хотя не дается описания того, как этот LOD был установлен.Авторы также не представляют ни хроматограмм, ни масс-спектров ни для одного из этих анализов, но сообщают, что «весь аутентифицированный растительный материал P. graveolens , аутентифицированный летучих масел P. graveolens и коммерческое масло герани, приобретенное на открытом рынке, были отрицательными (менее более 10 частей на миллиард) для MHA ». 4

В Таблице II своей статьи ElSoley et al4 суммируют результаты своего исследования и с любопытством различают две терминологии в отчетах о результатах анализа ЖХ-МС-МС: НД определяется как не обнаружено (ниже LOD 10 нг / мл или 10 нг / г), и <10 нг / мл осталось неопределенным, но, возможно, предполагая, что 1,3-DMAA был обнаружен при концентрации менее 10 нг / мл.4 Эта интерпретация согласуется с резюме авторов анализов пищевых добавок (продукты A, B и C), которые, как сообщалось, содержат 1,3-DMAA в концентрациях> 10 мг / г,> 2 мг / г, и <1 мг / г, соответственно.4

Непонятно, почему авторы выбирают 10 нг / г или 10 нг / мл в качестве LOD в сводной таблице, когда для этого метода не представлены хроматографические данные (UPLC-ESI-QToF ), а более низкий LOD (2,5 нг / мл) был достигнут с использованием методологии HPLC-ESI-QQQ.

Совсем недавно Li et al5 сообщили о положительном обнаружении 1,3- и 1,4-DMAA в тканях растений герани в концентрациях от 13 до 365 нг / г и от 3 до 35 нг / г.3 нг / г соответственно. Об обнаружении также сообщалось в образцах гераниевого масла при концентрациях от 167 до 13 271 нг / г и 220 нг / г (в одном образце), соответственно. Растения герани были получены из трех областей Китая (Юньнань, Цзянсу и Гуйчжоу), а масло герани было получено из Цзианя, провинция Цзянси, Китай5

Подобно исследованию Чжан и др. 3, Ли и др. 5 использовали ВЭЖХ. -ESI-QQQ метод определения 1,3-DMAA в растительных экстрактах и ​​гераниевых маслах. Одно из основных различий между двумя исследованиями заключается в стадии экстракции.Ли и др. 5 использовали более упрощенный подход, включающий единственную стадию экстракции гексаном, которая сводит к минимуму возможные пути потерь. Для масел герани масло смешивают с гексаном и 0,5 М HCl и встряхивают на высокой скорости в течение 5 минут. Затем водный слой отделяют, при необходимости дополнительно разбавляют HCl и фильтруют через нейлоновый фильтр 0,45 мкм перед введением в ВЭЖХ. Для растительного сырья герани листья и стебли сначала измельчают на мелкие кусочки и экстрагируют ультразвуком с 0,5 М HCl.После центрифугирования водный слой один раз экстрагируют гексаном, затем отделяют, при необходимости дополнительно разбавляют HCl и фильтруют через нейлоновый фильтр 0,45 мкм перед введением в ВЭЖХ. В исследовании Ли и др. 5, 10, 20 и 40 нг / г образцы с добавками растений герани были экстрагированы с эффективностью от 85% до 105 %.5 Было обнаружено, что однократная стадия жидкостно-жидкостной экстракции гексаном улучшает эффективность метода. за счет уменьшения влияния матрицы образца и подавления ионов.

Напротив, как отмечалось выше, Zhang et al3 выполнили пять отдельных экстракций органическим растворителем и выпарили образец досуха перед восстановлением образца в метаноле.Поскольку каждый этап экстракции не является 100% эффективным, существует потенциальная потеря аналита каждый раз, когда проводится экстракция и слой отбрасывается. Zhang et al3 не сообщили об эффективности экстракции в своем исследовании. ElSohly et al4 выполнили четыре отдельных этапа экстракции и сообщили об эффективности экстракции примерно 35% .4

Разделение 1,3-DMAA было выполнено с использованием колонки C18 и подвижной фазы вода / ацетонитрил 85/15 с водной фазой, содержащей 0,1% муравьиная кислота.5 Обнаружение было выполнено с использованием MRM переходов m / z от 116 до 57 и m / z от 116 до 99, соответствующих потере углеводородных фрагментов. Используя этот метод, авторы смогли достичь предела обнаружения массы от 1 до 2 пикограммов (пг), что соответствует пределу количественного определения метода от 1 до 2 нг / г сырого веса на основе отношения сигнал / шум 3: 1. 5

С помощью этого метода авторы добились хорошего разделения диастереомеров 1,3-ДМАА (два пика) и 1,4-ДМАА (один пик) и сообщили об аналогичных спектрах индуцированной столкновением диссоциации (CID) для того же иона-предшественника ( m / z = 116) для всех трех пиков.5 Авторы отмечают, что диастереомеры 1,3-ДМАА присутствовали в равных количествах и идентичны во всех протестированных образцах, включая стандартный образец. соотношение роста от 1,2 до 1,4 (например, см. Ли и др.) 5, что согласуется с диастереомерными соотношениями 1,3-ДМАА, указанными в 13 пищевых добавках Жангом и др. 3 и в образцах, проанализированных ЭльСохли и др. 4 Только хроматограмма, представленная Ли и др. На своем рисунке 6 предлагают равные количества диастереомеров на основе отношения высоты пиков.5

Похоже, что в статье есть некоторая путаница в отношении интерпретации диастереомерных соотношений и того, присутствует ли рацемическая смесь энантиомеров 1,3-ДМАА в экстрагированных растительных материалах.5 Поскольку авторы не использовали хиральную хроматографию колонке для достижения полного разделения всех изомеров 1,3-DMAA, они не смогли разделить два пика 1,3-DMAA на соответствующие пары энантиомеров.5 Как показали Zhang et al3, 1,3-DMAA может быть разделенным на две пары энантиомеров с помощью хиральной хроматографической колонки.В этом исследовании каждая пара энантиомеров 1,3-DMAA выглядит как один пик; таким образом, нет информации относительно энантиомерных соотношений и информации о том, присутствует ли 1,3-DMAA в виде рацемической смеси. Авторы предполагают, однако, что это исследование демонстрирует присутствие рацемата в растительной ткани. Как отмечалось ранее, концентрации 1,3-ДМАА в образцах гераниевого масла варьировались от 167 до 13 271 нг / г.5 Неясно, отражает ли 1000-кратная разница в концентрациях, наблюдаемая для образцов гераниевого масла, различие в типах масла, источник растительного материала герани, метод обработки или другие потенциальные факторы.

В аналогичном исследовании Fleming et al6 проанализировали растения герани, собранные в течение трех разных сезонов и из трех разных областей Китая (Чанчжоу, Гуйян и Куньмин), на присутствие 1,3- и 1,4-DMAA с помощью ВЭЖХ. Метод ESI-QQQ. Процедура экстракции была адаптирована из процедуры, описанной Ли и др. 5 Растительный материал герани сначала экстрагируется 0,5 н. HCl обработкой ультразвуком. 6 После центрифугирования водный слой один раз экстрагировали гексаном, затем разделяли и при необходимости разбавляли HCl. , и отфильтрован с 0.Нейлоновый фильтр 45 мкм перед введением в ВЭЖХ. Обратите внимание, что образцы сначала были проанализированы без стадии экстракции гексаном. Этот шаг был позже добавлен для уменьшения матричных эффектов. Таким образом, результаты представлены для некоторых образцов с этапом экстракции гексаном и без него. В этом исследовании эффективность экстракции образцов герани с шипами варьировалась от 54% до 107% для 1,3-DMAA и от 63% до 86% для 1,4-DMAA.6

Было выполнено разделение 1,3-DMAA с использованием колонки Kinetex C18 и мобильной фазы 82/18 вода / ацетонитрил, причем водная фаза содержит 1% муравьиной кислоты.6 Обнаружение было выполнено с использованием MRM переходов m / z от 116 до 57 и m / z от 116 до 99,7, соответствующих потере углеводородных фрагментов. Используя этот метод, авторам удалось достичь пределов обнаружения 1,3- и 1,4-DMAA в растительном экстракте порядка от 0,6 до 3,2 мкг / л (ppb) .6 Это соответствует пределу обнаружения в около 20 нг / г в растительном материале.

Авторы обнаружили оба диастереомера 1,3-DMAA на хроматограммах и зарегистрировали диастереомерные отношения, равные 1.14 ± 0,08 в стандартах. Были зарегистрированы отношения 1,10 ± 0,01 в образце Чанчжоу S11-1, 1,25 ± 0,03 в образце Чанчжоу S11-2, 1,02 в образце Чанчжоу 1 и 1,16 ± 0,1 в образце Чанчжоу 3, что свидетельствует о естественной изменчивости диастереомерных соотношений6

Растительный материал Changzhou S-11 был получен из Intertek Laboratories и получен из того же образца Цзянсу, о котором сообщил Ли и др. 5 Для этого образца Флеминг и др. 6 сообщили о концентрации 1,3-DMAA 94,7 ± 15,1 нг / г без учета стадия экстракции гексаном и 254 ± 17 нг / г со стадией экстракции гексаном.Для сравнения Li et al5 сообщили о 165 нг / г для образца, взятого из того же растительного материала. Аналогичным образом, Fleming et al6 сообщили о концентрации 1,4-DMAA 13,5 ± 1,8 нг / г без стадии экстракции гексаном и 39,8 нг / г с стадией экстракции гексаном 6, в то время как Li et al5 сообщили о концентрации 35,3 нг / г для образец, взятый из того же растительного материала. Сходство результатов, полученных двумя разными лабораториями, анализировавшими подвыборки из одного и того же растительного материала с использованием схожих методов, является подтверждающим доказательством присутствия 1,3- и 1,4-DMAA в некоторых китайских видах герани.

Другие образцы растительного материала, полученные из Чанчжоу, Китай, также содержали 1,3- и 1,4-ДМАА. Fleming et al6 обнаружили 213 нг / г 1,3-DMAA и 52 нг / г 1,4-DMAA в одном образце, собранном в марте 2012 г. (Changzhou 1), и 68,8 ± 36,5 нг / г 1,3-DMAA и 118 ± 45 нг / г 1,4-DMAA во втором образце, собранном в мае 2012 г. (Чанчжоу 3). Это отражает изменчивость между растениями или, возможно, сезонные эффекты6.

Некоторые образцы были повторно проанализированы с использованием метода стандартных добавок, метода, который часто используется для минимизации матричных эффектов в сложных образцах, таких как биологические материалы.Используя метод стандартных добавок, Fleming et al6 обнаружили несколько более высокие уровни 1,3- и 1,4-DMAA в образце Changzhou 3 при концентрациях 97 ± 20 нг / г и 162 ± 48 нг / г, соответственно. Несколько более высокие уровни 1,3- и 1,4-DMAA были также обнаружены в образце Changzhou S11-2 — 496 ± 46 нг / г и 68 ± 7 нг / г, соответственно.

В других образцах растительного сырья герани, полученных из Китая, концентрации 1,3- и 1,4-ДМАА были на уровне или ниже предела обнаружения около 20 нг / г.6 1,3-DMAA был обнаружен в одном образце растения герани из Куньмина, Китай, около предела обнаружения 20 нг / г. Однако повторный анализ оказался ниже предела обнаружения метода. Концентрации 1,3-DMAA и 1,4-DMAA во всех других образцах из Куньмина и Гуйяна, Китай, были ниже предела обнаружения, составляющего примерно 20 нг / г.6

В короткой статье, подготовленной Лиси и др. 2, пять различных коммерчески доступные масла герани были проанализированы на присутствие 1,3-DMAA с помощью GC-MS. Источниками масла герани в пяти образцах были Египет, Франция и Новая Зеландия.Образцы масла экстрагировали 1 М HCl и трет-бутилметиловым эфиром (ТВМЕ). После дополнительной обработки водный слой подщелачивали с использованием 6 М КОН и добавляли гексан и пентафторбензилхлорид (ПФБКЛ) в качестве дериватизирующего агента. Слой гексана выпаривали досуха и восстанавливали в этилацетате для впрыскивания в колонку для ГХ. Об эффективности экстракции не сообщалось.2

Разделение производного 1,3-ДМАА проводили с использованием колонки Agilent HP Ultra 2. Полуколичественный анализ был основан на мониторинге выбранных ионов при m / z 238.Разделение обоих диастереомеров 1,3-DMAA было достигнуто с использованием этого метода, хотя авторы неправильно относят эти два пика к энантиомерам. Авторы сообщают, что 1,3-DMAA не был обнаружен ни в одном из пяти масел герани, однако не сообщалось о пределах обнаружения и не представлены стандартные концентрации или данные калибровки.2

Наконец, в коротком сообщении Di Lorenzo et al. 7 стеблей и листьев семи различных видов / сортов Pelargonium , полученных из питомника растений в Италии, были проанализированы на присутствие 1,3-DMAA с использованием ВЭЖХ с УФ-детектированием.Стебли и листья сначала экстрагировали метанолом при кипячении с обратным холодильником. Затем метанольные экстракты фильтровали, упаривали досуха и ресуспендировали в 1-2 мл метанола.7 В то время как во всех других исследованиях, рассмотренных в этой статье, использовалась кислая экстракционная среда, кислота здесь не добавлялась. Конечные экстракты метанола были дериватизированы с использованием о-фталальдегида. Разделение достигалось с использованием обращенно-фазовой колонки Synergi 4 мкм MAX-RP или Lichrocart 5 мкм RP18 и градиентного элюирования с использованием смеси ацетата натрия / тетрагидрофурана и метанола.Обнаружение производного 1,3-DMAA-o-фталевого альдегида было выполнено с использованием детектора с диодной матрицей с количественным определением при 334 нм.7

Извлечение 1,3-DMAA с шипами в образцах стеблей и листьев было более 97%, но пределы обнаружения были повышены до 600 и 1200 нг / г для стеблей и листьев соответственно. Для сравнения, Li et al5 и Fleming et al6 сообщили о пределах обнаружения порядка от 2 до 20 нг / г. Авторы сообщают, что не было обнаружено обнаруживаемых количеств 1,3-DMAA ни в одном из семи протестированных видов / сортов Pelargonium , а также в коммерческом масле герани из P.graveolens , выращенный в Африке, который также был протестирован.7

Анализы эфирных масел

Растения герани в основном выращиваются для производства эфирных масел для использования в косметике, парфюмерии и ароматерапии. Были опубликованы многочисленные исследования, определяющие основные составляющие и документирующие условия, влияющие на выход и состав добытого масла, включая метод дистилляции, 9,10 сезонные эффекты и климатические условия, 11–13 обработки проб (т.е. возраст листьев, высушены ли они. перед перегонкой) 14, а также почвенно-влажностные условия.15 Эти и другие исследования16–19 обычно обеспечивают химический распад компонентов масла, однако ни одно из этих исследований не подтвердило присутствие 1,3-DMAA. Некоторые ссылаются на эту работу как на дополнительное подтверждающее доказательство отсутствия 1,3-DMAA в растениях герани. 2,20 Однако существует ряд потенциальных причин, по которым эти исследования не сообщают об обнаружении 1,3-DMAA в растениях герани. масло.

Во-первых, существует значительный разброс в составе эфирных масел, полученных из растений герани.Международные стандарты классифицируют масла герани на три основных типа: африканский тип, включая масла из Алжира, Марокко и Египта; тип Бурбон с острова Реюньон; и китайский тип. Сообщается, что 90% эфирного масла состоит из примерно 30 соединений, относительные концентрации которых различаются среди различных типов масел.21 Остальные соединения, присутствующие в следовых количествах, могут значительно различаться. Например, Lalli et al16 идентифицировали в общей сложности 315 различных соединений в эфирных маслах, дистиллированных из 13 различных южноафриканских видов Pelargonium (18 образцов) с помощью ГХ и ГХ-МС.Однако общее количество компонентов, идентифицированных в одном образце эфирного масла, варьировалось от 52 до 87, и почти треть соединений (101 из 315) была обнаружена только в одном из 18 проанализированных образцов. Джалали-Херави и др. 19 идентифицировали 61 соединение в образце эфирного масла, полученного из растений герани, культивируемых в Иране, с помощью ГХ-МС. Этот список, однако, был неполным и в конечном итоге расширился до 85 соединений с добавлением методов хемометрического разделения. Шелли и Марриотт20 идентифицировали 65 различных соединений в эфирном масле египетской герани с использованием метода двумерной ГХ-МС.Kulkarni et al17 идентифицировали 48 компонентов эфирного масла, экстрагированного из трех клонов Бурбона, выращенных в Индии. Очевидно, что состав эфирных масел, извлеченных из различных типов растений, значительно варьируется.

Во-вторых, хотя пределы обнаружения обычно не сообщаются, кажется, что пределы обнаружения недостаточно низкие для обнаружения 1,3-DMAA в масле. Большинство этих исследований эфирных масел сообщают, что следовые уровни компонентов составляют порядка 0,01% масляной фракции, что эквивалентно 100 000 нг / г.Напротив, Li et al5 и Fleming et al6 сообщили о концентрациях 1,3-DMAA порядка 500 нг / г или менее в частях растения герани и масле, за исключением одного образца масла с концентрацией 1,3-DMAA 13000. нг / г или 0,0013%. Низкие пределы обнаружения, достигнутые Ли и др., 5, Флемингом и др., 6 и др. 3,4, требуют стадии кислотной экстракции и концентрирования перед анализом, что обычно не выполняется для анализа эфирных масел. Однако в одном исследовании, проведенном Вернином и др. [22], была выделена основная фракция масла бурбона герани путем экстракции 10% -ным раствором HCl с последующей промывкой диэтиловым эфиром, нейтрализацией гидроксидом натрия и экстракцией эфиром.Авторы обнаружили 2-метил-3-амино-1-пентен на низких уровнях вместе с двумя соединениями пиридина и другими неидентифицированными аминосоединениями в масле, однако 1,3-DMAA не было идентифицировано. Тем не менее, это исследование предполагает, что низкие уровни аминов, которые в противном случае остались бы незамеченными, могут быть обнаружены в некоторых маслах герани после кислотной экстракции и очистки.

Наконец, методы ГХ, используемые для анализа эфирных масел во всех вышеупомянутых исследованиях, не могут быть оптимизированы для анализа 1,3-DMAA, который имеет относительно низкую температуру кипения и будет быстро элюироваться через колонку. .Первые элюирующие соединения, о которых сообщалось в большинстве анализов эфирных масел, такие как цис-3-гексенол и α-пинен, имеют температуру кипения порядка 155–157 ° C.23 Поскольку 1,3-DMAA имеет сравнительно более низкая точка кипения от 130 ° C до 135 ° C, 24 она будет иметь тенденцию появляться как один из самых ранних пиков элюирования и потенциально находится за пределами области интереса для многих из этих исследований, особенно если имеется запрограммированная задержка растворителя24 Vorce et al. al24 отмечают, что анализ 1,3-DMAA возможен с помощью ГХ-МС, но необходимо проявлять большую осторожность для оптимизации параметров ГХ для этого соединения.

В недавней патентной заявке компании Northern Innovations and Formulations Corp. на травяную добавку, приготовленную из герани, описан метод экстракции, который утверждает, что оптимизирует содержание 1,3-DMAA в масле путем экстракции масла смесью спирта и воды, разделение масляной и водной фаз, концентрирование и сушка водной фазы до порошка, а затем, после очистки масла, смешивание порошка с очищенным маслом.25 Этот процесс заявлен для достижения концентраций 1,3-DMAA в диапазоне От 1% до 3%, что свидетельствует о том, что большая часть 1,3-DMAA, экстрагированного при производстве эфирных масел, может оказаться в водной фазе.Это может быть еще одной потенциальной причиной того, почему анализы эфирных масел не могут определить измеримые уровни 1,3-DMAA.

Выводы

Недавние исследования, обобщенные в этом отчете, предоставляют противоречивые доказательства того, что 1,3-DMAA естественным образом встречается в некоторых видах растений герани. Однако различия в источниках проб, процедурах извлечения и методах анализа могут быть причиной противоречивых результатов. Род Pelargonium включает более 270 различных видов, большинство из которых являются коренными жителями Южной Африки, но многие из них в настоящее время широко культивируются в России, Египте, Индии и Китае, который в настоящее время является крупнейшим производителем гераниевого масла.16,21,26 Многие сорта, выращиваемые для производства эфирного масла, являются межвидовыми гибридами21, и исследования показали, что состав и качество экстрагированного масла зависят от сорта растения, метода экстракции, типа почвы и климатических условий. 9,16,17,21 Таким образом, неудивительно, что некоторые образцы растительного сырья и экстрагированных масел содержат 1,3-DMAA, тогда как другие нет.

На основании исследований, рассмотренных в этой статье, обработка может также играть роль, поскольку 1,3-DMAA с большей вероятностью будет обнаружен в образцах, извлеченных в лаборатории из стеблей и листьев растений, чем в коммерчески доступных продуктах, продаваемых для использования в медицине и ароматерапия.27 Причина этого может быть связана с коммерческими процедурами экстракции, разработанными для повышения извлечения эфирных масел, а не 1,3-DMAA. Недавняя патентная заявка предполагает, что большая часть 1,3-ДМАА, экстрагированного в процессе производства эфирных масел, может оказаться в водной фазе.25

Три исследования, оцененных в этом отчете, включали анализ листьев и стеблей растений герани, собранных в Китай и Индия. Ли и др. 5 обнаружили 1,3-ДМАА в аутентифицированных растительных материалах, собранных в трех областях Китая (Юньнань, Цзянсу и Гуйчжоу), а Флеминг и др .6 обнаружили 1,3-ДМАА в аутентифицированных растительных материалах из Чанчжоу, Китай и, при низких уровнях, в растительном сырье из Гуйяна, Китай.Однако 1,3-DMAA не было обнаружено в растительных материалах, собранных в Куньмине, Китай. ElSohly et al4 проанализировали аутентичные растительные материалы из Индии и США (штат Миссисипи) и сообщили об отсутствии обнаруживаемых количеств 1,3-DMAA при пределе обнаружения 100 частей на миллиард. Однако проверка хроматограмм предполагает качественное присутствие 1,3-ДМАА на уровнях ниже 100 частей на миллиард в некоторых образцах аутентифицированного растительного материала. Авторы также не сообщили об обнаружении 1,3-DMAA с помощью метода ВЭЖХ с гораздо более низкими пределами обнаружения (2.5 частей на миллиард). Однако этот метод не позволил разделить диастереомеры 1,3-DMAA. Третий метод (UPLC-ESI-QTOF) с расчетным пределом обнаружения 10 частей на миллиард также использовался для анализа образцов. Хотя никаких данных по этому методу представлено не было, сводная таблица, представленная авторами, предполагает, что 1,3-DMAA мог быть обнаружен в высушенных стеблях растений на уровне ниже 10 частей на миллиард. Таким образом, все три исследования, включающие экстракцию растительного сырья, обеспечивают количественную или качественную поддержку естественного присутствия 1,3-DMAA в растениях герани.

Четыре из рассмотренных исследований включали анализ коммерчески доступных масел герани. Чжан и др. 3 проанализировали восемь различных масел герани, полученных из Китая и Египта. Lisi et al2 проанализировали пять масел герани, полученных из Египта, Франции и Новой Зеландии. ElSohly et al4 проанализировали 20 различных образцов коммерческого масла герани, но не сообщили об источниках; и Ли и др. проанализировали образцы гераниевого масла, полученные на фабрике по производству ароматизаторов в провинции Цзянси, Китай. Только Ли и др. 5 обнаружили 1,3-ДМАА в товарном нефтепродукте.

Все восемь образцов гераниевого масла, проанализированные Чжаном и др. 3, как сообщается, были извлечены из растений герани с использованием паровой дистилляции. Lisi et al2 предполагают, что из-за летучести 1,3-DMAA паровая дистилляция не может быть подходящей техникой для его экстракции вместе с нефтепродуктом, и что альтернативный процесс холодного отжима дает больше шансов удерживать 1,3- ДМАА в масле. Zhang et al3 сообщили об отсутствии обнаружения 1,3-DMAA ни в одном из образцов гераниевого масла с использованием метода HPLC-ESI-LIT с пределом обнаружения 50 частей на миллиард, а также об отсутствии обнаружения 1,3-DMAA с помощью альтернативного HPLC-ESI. -QQQ метод с пределом обнаружения 10 частей на миллиард.Авторы использовали несколько сложную многоступенчатую технику экстракции для проб масла и не сообщили об эффективности экстракции для этого метода. В методе HPLC-ESI-LIT использовалась хроматографическая колонка с хиральной стационарной фазой, которая, как сообщается, способна адекватно удерживать первичные амины. Однако авторам не удалось добиться разделения ни энантиомеров 1,3-ДМАА, ни диастереомеров в стандартах. Аналогичным образом, только один пик был зарегистрирован с использованием метода HPLC-ESI-QQQ3.

Lisi et al2 проанализировали пять образцов масла герани из Египта, Франции и Новой Зеландии; три образца были извлечены с помощью перегонки с водяным паром.1,3-DMAA не был обнаружен ни в одном из образцов масла, но о пределах обнаружения не сообщалось. ElSohly et al4 также сообщили об отсутствии детектируемых количеств 1,3-DMAA с пределом обнаружения 100 частей на миллиард с использованием одного метода. Однако опубликованные хроматограммы для одного из образцов масла до и после добавления 1,3-DMAA на пределе обнаружения предполагают качественное присутствие 1,3-DMAA в исходном образце. Кроме того, сводная таблица, включенная в документ, предполагает, что 1,3-DMAA может присутствовать в 25% (5 из 20) промышленных проб масла на уровнях ниже 10 частей на миллиард.4

Наконец, Ли и др. 5 обнаружили 1,3- и 1,4-ДМАА в образцах гераниевого масла, полученных на заводе ароматизаторов в Цзиане, провинция Цзянси, Китай. Концентрации 1,3-DMAA варьировались от 167 до 13 271 нг / г в трех образцах. 1,4-ДМАА был обнаружен только в одном из образцов в концентрации 220 нг / г. За исключением одного образца гераниевого масла, проанализированного Ли и др., 5 концентраций 1,3-DMAA, обнаруженных в растительных материалах герани и экстрагированных маслах, обычно меньше 500 частей на миллиард.

Только Zhang et al4 сообщают о разделении 1,3-DMAA на его четыре стереоизомера, выполненном с использованием GC-FID, снабженного хиральной неподвижной фазой.Однако этот метод использовался для анализа пищевых добавок, а не растительного сырья герани. Таким образом, ни в одном из пяти исследований не было представлено данных, касающихся энантиомерной чистоты 1,3-ДМАА, экстрагированного из растений и масел герани. Во всех пяти исследованиях сообщалось о разделении 1,3-DMAA на его диастереомеры, а диастереомерные соотношения были аналогичными для 1,3-DMAA, обнаруженного в коммерчески доступных стандартах, пищевых добавках, экстрактах растительного сырья герани и масле герани.

В целом, эти исследования показывают, что 1,3-DMAA естественным образом содержится в некоторых, но не во всех, растениях герани и экстрагированных гераниевых маслах. Количественные5,6 и / или качественные4 доказательства присутствия 1,3-DMAA в растительных материалах с большей вероятностью можно найти в исследованиях, включающих экстракцию растительных материалов в лаборатории, а не в анализе коммерчески доступных продуктов, продаваемых для использования в медицине и ароматерапии. . Вероятно, это связано с различиями в обработке. Паровая дистилляция, которая, по-видимому, является предпочтительной процедурой экстракции товарных масел, может не подходить для удержания 1,3-DMAA.В лаборатории обнаружению 1,3-DMAA, по-видимому, способствуют процедуры экстракции, включающие меньшее количество этапов экстракции, что сводит к минимуму возможность потерь. В этом обзоре все исследования, сообщающие об отрицательных результатах присутствия 1,3-DMAA, включают процедуры экстракции, включающие стадию выпаривания до высыхания или удаление растворителя в вакууме, что может отрицательно повлиять на эффективность экстракции из-за летучести 1,3-DMAA.

Наконец, эти исследования показывают, что существует значительная вариабельность содержания 1,3-DMAA от растения к растению.В растительных материалах, в которых был количественно обнаружен 1,3-DMAA, все из которых получены из Китая, концентрации обычно менее 500 частей на миллиард. Однако некоторые растения из Китая не содержат обнаруживаемых уровней 1,3-DMAA, в то время как одно масло герани, полученное из Китая, содержало более 13 ppm 1,3-DMAA.

Доказательства присутствия 1,3-диметиламиламина (1,3-DMAA) в растительных материалах герани

Реферат

1,3-Диметиламиламин (1,3-DMAA) представляет собой алифатический амин со стимулирующими свойствами, которые, как сообщается, в природе встречается только в растениях герани ( Pelargonium graveolens ).Присутствие 1,3-DMAA в растениях герани было впервые сообщено в статье, опубликованной в 1996 году, но некоторые поставили под сомнение идентификацию 1,3-DMAA в этом исследовании. С тех пор был опубликован ряд дополнительных исследований, в которых в основном сообщалось об отсутствии 1,3-DMAA в растениях герани и коммерческих маслах герани. Однако в двух недавних исследованиях 1,3-DMAA был обнаружен в тканях растений герани и в образце гераниевого масла с использованием упрощенного метода экстракции тканей и масла, полученных из Китая.Обнаружен ли 1,3-DMAA в растениях в естественных условиях, имеет большое значение для того, как коммерческие продукты, содержащие 1,3-DMAA, регулируются Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США. В этой статье рассматриваются различия в исходных материалах, процедурах экстракции и аналитических подходах в попытке рационализировать очевидно противоречивые доказательства присутствия 1,3-DMAA в растительных материалах герани.

Ключевые слова: DMAA, герань, Pelargonium graveolens , натуральные продукты

Введение

1,3-Диметиламиламин (1,3-DMAA), также известный как 1,3-диметилпентиламин и метилгексанамин (MHA), представляет собой алифатический амин со стимулирующими свойствами, который, как сообщается, в природе встречается только в растениях герани ( Pelargonium graveolens ).Присутствие 1,3-DMAA в растениях герани было впервые сообщено в статье, опубликованной в журнале Guizhou Institute of Technology by Ping et al.1 Авторы обнаружили присутствие 1,3-DMAA в концентрации 0,66% в масло герани, выделенное из свежих стеблей и листьев растения P. graveolens , собранного в районе Жунджанг провинции Гуйчжоу в Китае. Целью этого исследования было определить основные компоненты эфирного масла, чтобы обеспечить основу для выбора породы и оценить качество добытого масла.Однако с тех пор на него все чаще ссылаются как на доказательство существования 1,3-DMAA в качестве природного продукта у некоторых видов герани. В исследовании Ping et al. Авторы использовали газовую хроматографию-масс-спектрометрию (ГХ-МС) для идентификации основных соединений в масле; но некоторые ставят под сомнение идентификацию 1,3-DMAA в масле на основании очевидной неправильной маркировки представленной хроматограммы, несогласованного порядка хроматографического элюирования и отсутствия подтверждения с использованием известного стандарта. дополнительные исследования были предприняты с явной целью установить, присутствует ли 1,3-DMAA в качестве натурального продукта в растениях герани и маслах, полученных из герани.2–7 Ответ на этот вопрос имеет большое значение для того, как коммерческие продукты, содержащие 1,3-DMAA, регулируются Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США (FDA). Актуальность этого вопроса возросла в последнее время после того, как в апреле 2012 года FDA предупредило, что синтетически произведенный 1,3-DMAA не может использоваться в качестве активного ингредиента в пищевой добавке, поскольку он не классифицируется как «диетический ингредиент». категория, которая включает ботанические вещества.8

Этот документ содержит обзор недавних исследований в отношении различий в исходных материалах, процедурах экстракции и аналитических подходах, а также общую оценку существующих доказательств присутствия 1,3-DMAA в природных изделия из герани.

Оценка последних исследований

В июле 2012 года Wiley Online опубликовала статью Чжана и др. 3. Авторы проанализировали восемь различных масел герани на наличие 1,3-DMAA, используя два разных масс-спектрометрических метода. Четыре масла были получены из растений, выращенных в Китае, а четыре масла — из растений, выращенных в Египте. Масла герани были закуплены у GNC и Amazon и экстрагированы с использованием многоступенчатой ​​процедуры. Масла обрабатывали, сначала добавляя воду и концентрированный раствор HCl, а затем дважды экстрагируя смесью 50/50 гексан / этилацетат.После каждой стадии экстракции органическую фазу отбрасывали. Затем водную фазу обрабатывали 50% -ным раствором NaOH и еще трижды повторно экстрагировали раствором 50/50 гексан / этилацетат. Органическую часть сохраняли, упаривали досуха и восстанавливали в метаноле, содержащем 0,1% муравьиной кислоты, для инъекции в высокоэффективный жидкостный хроматограф. Поскольку 1,3-DMAA имеет заметное давление пара при комнатной температуре (0,65 мм рт. Ст. При 25 ° C), испарение досуха может отрицательно сказаться на эффективности экстракции, о чем авторы не сообщили.

Экстракты анализировали с использованием двух различных масс-спектрометрических методов: высокоэффективная жидкостная хроматография-ионизация электрораспылением-линейная ионная ловушка (HPLC-ESI-LIT) и метод ВЭЖХ-электрораспылительной ионизации-тройной квадруполь (HPLC-ESI-QQQ). метод. В методе HPLC-ESI-LIT отделение 1,3-DMAA от других компонентов гераниевого масла осуществляли с использованием хроматографической колонки LARIHC CF6-P и подвижной фазы ацетонитрил / метанол 90/10, содержащей 0,1% муравьиной кислоты. LARIHC CF6-P представляет собой хиральную неподвижную фазу циклофруктана 6, дериватизированную алкилом, с известной способностью разделять простые алифатические рацемические амины.Однако такое разделение 1,3-DMAA не наблюдалось на хроматограмме, представленной в дополнительном материале, предоставленном авторами.3

1,3-DMAA имеет два хиральных центра, в результате чего образуются две пары энантиомеров, причем каждая пара энантиомеров составляет диастереомер. Энантиомеры трудно разделить, и для достижения разделения часто требуется реакция с хиральным реагентом. Например, Zhang et al3 смогли разделить все четыре изомера 1,3-DMAA в 13 коммерчески доступных пищевых добавках и двух синтетических стандартах с помощью ГХ, снабженного колонкой Astec ChiralDex G-DM и пламенно-ионизационным детектором (FID).Авторы сообщили, что диастереомерные отношения 1,3-DMAA, измеренные в 13 пищевых добавках, варьировались от 1,23 до 1,43 и были аналогичны диастереомерным отношениям 1,22 ± 0,06 и 1,42 ± 0,09, указанным для двух синтетических стандартов. Кроме того, авторы сообщили, что все энантиомеры в пищевых добавках и синтетических стандартах были рацемическими.3

Однако с помощью метода HPLC-ESI-LIT был обнаружен только один пик в образцах гераниевого масла с добавками. Обнаружение 1,3-DMAA осуществляли с помощью масс-спектрометра с линейной ионной ловушкой, используя мониторинг выбранных ионов при m / z 116.2 с ESI в положительном режиме. ESI — это метод мягкой ионизации, и m / z 116,2 соответствует иону 1,3-DMAA аммония. Одним из недостатков ESI является возможность подавления ионов, что было отмечено авторами. Подавление ионов — это матричный эффект, который может отрицательно повлиять на производительность системы и пределы обнаружения. Предел обнаружения (LOD), указанный для масла герани с шипами с использованием метода HPLC-ESI-LIT, составлял 50 частей на миллиард (предполагается, что это масса). Авторы сообщили, что при использовании этого метода ни в одном из 8 образцов гераниевого масла 1,3-DMAA не обнаружено.

Второй метод, используемый для анализа 1,3-DMAA в масле герани, включал стадию дериватизации с использованием 1-диметиламино-нафталин-5-сульфонилхлорида (дансилхлорида). Дериватизация с использованием дансилхлорида обычно обеспечивает повышенную чувствительность с помощью методов масс-спектрометрии ESI.

Разделение дериватизированного продукта проводили с использованием колонки XB-C18 с подвижной фазой ацетонитрил / вода 70/30, причем водная фаза содержала 0,1% трифторуксусной кислоты. Эта колонка должна была позволить разделить пару дериватизированных диастереомеров 1,3-DMAA.Однако снова только один пик был идентифицирован на хроматограмме пробы масла герани с добавками (Zhang et al, Рисунок 5: Обратите внимание, что этот рисунок показывает, что образец масла содержал 30 частей на миллиард 1,3-DMAA, тогда как экспериментальная запись — вверх означает, что в образцы добавлено 100 частей на миллиард 1,3-DMAA). Обнаружение осуществляли с использованием мониторинга множественных реакций (MRM) перехода m / z 349 к 171, соответствующего потере первичного дансильного фрагмента. Предел детализации, полученный для масла герани с добавками с использованием метода HPLC-ESI-QQQ, составил 10 частей на миллиард (предполагается, что это массовое значение).Авторы отмечают, что LOD относится к концентрации чистого 1,3-DMAA, а не производного продукта, и сообщают, что при использовании этого метода 1,3-DMAA не был обнаружен ни в одном из 8 образцов гераниевого масла. Неясно, как авторы установили LOD для любого метода.

В другом исследовании ElSohly et al4 проанализировали образцы аутентифицированного растительного сырья и экстрагированных масел из P. graveolens, , а также ряда коммерческих масел, используя ГХ-МС и два различных метода ЖХ-МС-МС: ВЭЖХ- ESI-QQQ и метод квадрупольной времяпролетной масс-спектрометрии с ультраэффективной жидкостной хроматографией (UPLC-QTOF-MS).

Образцы масла смешивали с гексаном и экстрагировали 1 н. HCl. Водный слой доводили до pH 9-10 с помощью 10 н. КОН и экстрагировали дихлорметаном (DCM). Затем раствор DCM дериватизировали гептафтормасляным ангидридом (HFBA), подвергали дальнейшей обработке и затем анализировали с помощью GC-MS.

Растительные материалы первоначально экстрагировали 0,1 н. Раствором HCl в метаноле. После выпаривания исходного растворителя остаток растворяли в 1 н. HCl и обрабатывали, как описано выше для образцов масла.Было определено, что эффективность экстракции составляет приблизительно 35% на основании извлечения внутреннего стандарта (2-амино-6-метилгептана).

Разделение производного 1,3-DMAA-HFB проводили на ГХ с использованием колонки Agilent J&W DB-5MS. Масс-спектрометр работал в выбранном режиме мониторинга ионов при m / z 240, 282 и 296. На основе стандартных хроматограмм, представленных на Рисунке 3 их статьи, коэффициент отклика для иона m / z 240 примерно в 100 раз больше, чем коэффициенты отклика для ионов m / z 282 и 296.4 Несмотря на более низкую чувствительность ионов m / z 282 и 296, авторы полагались на все три иона для положительной идентификации, что увеличило LOD до 100 частей на миллиард. Диастереомеры DMAA с расчетным диастериомерным соотношением 1,13 на основе измеренных высот пиков.4 Хотя авторы сообщили, что «ни одно из аутентифицированных эфирных масел или растительного материала P. graveolens P. graveolens , ни какое-либо коммерческое летучее масло пеларгонии (масло герани) не содержит MHA. на обнаруживаемых уровнях »4, проверка выбранных ионных хроматограмм для контрольных образцов и образцов гераниевого масла с добавками позволяет предположить качественное присутствие 1,3-DMAA в концентрациях ниже 100 частей на миллиард.Представлено наложение выбранных ионных хроматограмм, записанных при m / z 240 для отрицательного контроля гераниевого масла (представленного в ElSohly et al, рис. 4) 4 и отрицательного гераниевого масла с добавлением 0,1 ppm (100 нг / мл) 1. 3-DMAA (ElSohly et al, рис. 5) .4

Наложение ГХ-МС выбранных ионных хроматограмм производного DMAA-HFB, записанных при m / z 240 для образца гераниевого масла (красный) и образца гераниевого масла с добавлением 0,1 ppm DMAA (черный). Основные хроматограммы воспроизведены с разрешения Oxford University Press от ElSohly et al.4 Масло пеларгонии и метилгексанамин (MHA): аналитические подходы, подтверждающие отсутствие MHA в аутентифицированном растительном материале и масле Pelargonium graveolens .

Хроматограммы слегка смещены в наложении из-за сдвига времени удерживания, наблюдаемого между двумя сериями, и имеют разные масштабы по оси y. Этот сдвиг времен удерживания согласуется со сдвигом времен удерживания, наблюдаемым для пика внутреннего стандарта. Как указано в, добавление 1,3-DMAA вызывает заметное увеличение двух пиков, наблюдаемых в контрольном образце гераниевого масла, что свидетельствует о присутствии 1,3-DMAA (показывающем оба диастереомера) в этом образце.Расчетные диастериомерные отношения равны 1,14 и 1,22 в пробах с добавками и без них. Небольшая разница в оценочных диастериомерных соотношениях, вероятно, отражает естественную изменчивость этого параметра, как было предложено в исследовании Zhang et al3, и / или различия между натуральным продуктом и синтетическим стандартом.

Картина менее четкая при m / z 296 () из-за более низкой чувствительности для этого иона (т. Е. Уровень пика близок к LOD для этого иона). Наблюдается заметное увеличение одного пика при времени удерживания около 3.95 минут в пробе с добавкой, но мы не видим распознаваемой пары диастереомеров с соотношением ~ 1,15 в образце с добавкой. При m / z 282 (не показано) в пробе с добавлением присутствует распознаваемая пара диастереомеров. Тем не менее, пиковая интенсивность, по-видимому, примерно в 5-10 раз превышает базовый шум, что соответствует заявленному уровню детализации в 100 частей на миллиард (т. Е. На уровне пиков). Таким образом, в то время как более чувствительный ион m / z 240 ясно указывает на присутствие 1,3-DMAA в образце гераниевого масла без добавок, низкая концентрация (менее 100 частей на миллиард) не наблюдается в менее чувствительном m / z 296. и 282 ионных хроматограммы.

Наложение выбранных ионных хроматограмм ГХ-МС производного DMAA-HFB, записанных при m / z 296 для образца гераниевого масла (записано красным) и образца гераниевого масла с добавлением 0,1 ppm DMAA (записано черным). Основные хроматограммы воспроизведены с разрешения Oxford University Press от ElSohly et al. 4 Масло пеларгонии и метилгексанамин (MHA): аналитические подходы, подтверждающие отсутствие MHA в аутентифицированном растительном материале и масле Pelargonium graveolens .

Хроматограммы, представленные для экстрагированного растительного материала (ElSohly et al, рис.6) 4 кажутся похожими на хроматограммы, представленные для масла герани (ElSohly et al, рис. 4) .4 Наложение хроматограмм экстрагированного растительного материала с хроматограммами масла герани с шипами также указывает на качественное присутствие 1,3- DMAA в экстрагированном растительном материале при m / z 240 (не показано). Обратите внимание, что авторы не представляют хроматограммы для растительного сырья с добавками. Расчетное диастериомерное соотношение в растительном материале без добавок при m / z 240 составляет 1,21, как и в образце гераниевого масла без добавок.Еще раз, мониторинг при m / z 296 и 282 оказался непригодным для обнаружения низкого уровня (менее 100 частей на миллиард) 1,3-DMAA в этом исследовании.

ElSohly et al4 также использовали два разных метода ЖХ-МС-МС для анализа масел герани и проверенных экстрактов растительного материала. В первом методе использовалась ВЭЖХ с тройным квадрупольным масс-спектрометром, оснащенным источником ESI (HPLC-ESI-QQQ) — аналогично методу, используемому Чжаном и др. 3. Та же процедура экстракции, что и для анализа ГХ-МС, использовалась для ВЭЖХ. -ESI-QQQ анализ, за ​​исключением того, что они не выполняли стадию дериватизации, а конечный раствор DCM упаривали досуха и помещали в метанол для впрыскивания в колонку для ВЭЖХ.Опять же, испарение досуха могло отрицательно сказаться на эффективности экстракции.

Разделение 1,3-DMAA выполняли с использованием колонки Synergi Hydro-RP C18 и бинарного градиента растворителя с использованием подвижной фазы вода / ацетонитрил с каждым растворителем, содержащим 0,1% муравьиной кислоты. / z от 116 до 57 и m / z от 116 до 41 переходов, соответствующих потере углеводородных фрагментов. Авторы сообщают, что LOD и LOQ для этого метода составляют 2,5 частей на миллиард, хотя нет описания того, как этот LOD был определен.Хроматограммы MRM для неэкстрагированного 1,3-DMAA показали один большой пик при времени удерживания 4,2 минуты, что указывает на отсутствие хроматографического разделения диастереомеров 1,3-DMAA.4 Авторы представляют репрезентативные хроматограммы для образцов масла, растительных материалов. , и три различных коммерческих продукта, однако качество воспроизведения хроматограмм на бумаге оставляет желать лучшего. Тем не менее, аналогичные пики при времени удерживания 4,2 минуты наблюдаются на хроматограммах P. graveolens и аутентифицированного масла P.graveolens (ElSohly et al, рис. 11A, 11B и 12A) 4, предполагая качественное присутствие 1,3-DMAA в растительных материалах. жидкостная хроматография (UPLC) с источником ESI и квадрупольным времяпролетным (QToF) масс-спектрометром для обнаружения (UPLC-ESI-QToF) .4 Разделение выполняли с использованием колонки UPLC BEH C18. Детектирование осуществлялось с помощью мониторинга выбранных ионов при m / z = 116,1439. LOD для этого метода был оценен в 10 частей на миллиард, хотя не дается описания того, как этот LOD был установлен.Авторы также не представляют ни хроматограмм, ни масс-спектров ни для одного из этих анализов, но сообщают, что «весь аутентифицированный растительный материал P. graveolens , аутентифицированный летучих масел P. graveolens и коммерческое масло герани, приобретенное на открытом рынке, были отрицательными (менее более 10 частей на миллиард) для MHA ». 4

В Таблице II своей статьи ElSoley et al4 суммируют результаты своего исследования и с любопытством различают две терминологии в отчетах о результатах анализа ЖХ-МС-МС: НД определяется как не обнаружено (ниже LOD 10 нг / мл или 10 нг / г), и <10 нг / мл осталось неопределенным, но, возможно, предполагая, что 1,3-DMAA был обнаружен при концентрации менее 10 нг / мл.4 Эта интерпретация согласуется с резюме авторов анализов пищевых добавок (продукты A, B и C), которые, как сообщалось, содержат 1,3-DMAA в концентрациях> 10 мг / г,> 2 мг / г, и <1 мг / г, соответственно.4

Непонятно, почему авторы выбирают 10 нг / г или 10 нг / мл в качестве LOD в сводной таблице, когда для этого метода не представлены хроматографические данные (UPLC-ESI-QToF ), а более низкий LOD (2,5 нг / мл) был достигнут с использованием методологии HPLC-ESI-QQQ.

Совсем недавно Li et al5 сообщили о положительном обнаружении 1,3- и 1,4-DMAA в тканях растений герани в концентрациях от 13 до 365 нг / г и от 3 до 35 нг / г.3 нг / г соответственно. Об обнаружении также сообщалось в образцах гераниевого масла при концентрациях от 167 до 13 271 нг / г и 220 нг / г (в одном образце), соответственно. Растения герани были получены из трех областей Китая (Юньнань, Цзянсу и Гуйчжоу), а масло герани было получено из Цзианя, провинция Цзянси, Китай5

Подобно исследованию Чжан и др. 3, Ли и др. 5 использовали ВЭЖХ. -ESI-QQQ метод определения 1,3-DMAA в растительных экстрактах и ​​гераниевых маслах. Одно из основных различий между двумя исследованиями заключается в стадии экстракции.Ли и др. 5 использовали более упрощенный подход, включающий единственную стадию экстракции гексаном, которая сводит к минимуму возможные пути потерь. Для масел герани масло смешивают с гексаном и 0,5 М HCl и встряхивают на высокой скорости в течение 5 минут. Затем водный слой отделяют, при необходимости дополнительно разбавляют HCl и фильтруют через нейлоновый фильтр 0,45 мкм перед введением в ВЭЖХ. Для растительного сырья герани листья и стебли сначала измельчают на мелкие кусочки и экстрагируют ультразвуком с 0,5 М HCl.После центрифугирования водный слой один раз экстрагируют гексаном, затем отделяют, при необходимости дополнительно разбавляют HCl и фильтруют через нейлоновый фильтр 0,45 мкм перед введением в ВЭЖХ. В исследовании Ли и др. 5, 10, 20 и 40 нг / г образцы с добавками растений герани были экстрагированы с эффективностью от 85% до 105 %.5 Было обнаружено, что однократная стадия жидкостно-жидкостной экстракции гексаном улучшает эффективность метода. за счет уменьшения влияния матрицы образца и подавления ионов.

Напротив, как отмечалось выше, Zhang et al3 выполнили пять отдельных экстракций органическим растворителем и выпарили образец досуха перед восстановлением образца в метаноле.Поскольку каждый этап экстракции не является 100% эффективным, существует потенциальная потеря аналита каждый раз, когда проводится экстракция и слой отбрасывается. Zhang et al3 не сообщили об эффективности экстракции в своем исследовании. ElSohly et al4 выполнили четыре отдельных этапа экстракции и сообщили об эффективности экстракции примерно 35% .4

Разделение 1,3-DMAA было выполнено с использованием колонки C18 и подвижной фазы вода / ацетонитрил 85/15 с водной фазой, содержащей 0,1% муравьиная кислота.5 Обнаружение было выполнено с использованием MRM переходов m / z от 116 до 57 и m / z от 116 до 99, соответствующих потере углеводородных фрагментов. Используя этот метод, авторы смогли достичь предела обнаружения массы от 1 до 2 пикограммов (пг), что соответствует пределу количественного определения метода от 1 до 2 нг / г сырого веса на основе отношения сигнал / шум 3: 1. 5

С помощью этого метода авторы добились хорошего разделения диастереомеров 1,3-ДМАА (два пика) и 1,4-ДМАА (один пик) и сообщили об аналогичных спектрах индуцированной столкновением диссоциации (CID) для того же иона-предшественника ( m / z = 116) для всех трех пиков.5 Авторы отмечают, что диастереомеры 1,3-ДМАА присутствовали в равных количествах и идентичны во всех протестированных образцах, включая стандартный образец. соотношение роста от 1,2 до 1,4 (например, см. Ли и др.) 5, что согласуется с диастереомерными соотношениями 1,3-ДМАА, указанными в 13 пищевых добавках Жангом и др. 3 и в образцах, проанализированных ЭльСохли и др. 4 Только хроматограмма, представленная Ли и др. На своем рисунке 6 предлагают равные количества диастереомеров на основе отношения высоты пиков.5

Похоже, что в статье есть некоторая путаница в отношении интерпретации диастереомерных соотношений и того, присутствует ли рацемическая смесь энантиомеров 1,3-ДМАА в экстрагированных растительных материалах.5 Поскольку авторы не использовали хиральную хроматографию колонке для достижения полного разделения всех изомеров 1,3-DMAA, они не смогли разделить два пика 1,3-DMAA на соответствующие пары энантиомеров.5 Как показали Zhang et al3, 1,3-DMAA может быть разделенным на две пары энантиомеров с помощью хиральной хроматографической колонки.В этом исследовании каждая пара энантиомеров 1,3-DMAA выглядит как один пик; таким образом, нет информации относительно энантиомерных соотношений и информации о том, присутствует ли 1,3-DMAA в виде рацемической смеси. Авторы предполагают, однако, что это исследование демонстрирует присутствие рацемата в растительной ткани. Как отмечалось ранее, концентрации 1,3-ДМАА в образцах гераниевого масла варьировались от 167 до 13 271 нг / г.5 Неясно, отражает ли 1000-кратная разница в концентрациях, наблюдаемая для образцов гераниевого масла, различие в типах масла, источник растительного материала герани, метод обработки или другие потенциальные факторы.

В аналогичном исследовании Fleming et al6 проанализировали растения герани, собранные в течение трех разных сезонов и из трех разных областей Китая (Чанчжоу, Гуйян и Куньмин), на присутствие 1,3- и 1,4-DMAA с помощью ВЭЖХ. Метод ESI-QQQ. Процедура экстракции была адаптирована из процедуры, описанной Ли и др. 5 Растительный материал герани сначала экстрагируется 0,5 н. HCl обработкой ультразвуком. 6 После центрифугирования водный слой один раз экстрагировали гексаном, затем разделяли и при необходимости разбавляли HCl. , и отфильтрован с 0.Нейлоновый фильтр 45 мкм перед введением в ВЭЖХ. Обратите внимание, что образцы сначала были проанализированы без стадии экстракции гексаном. Этот шаг был позже добавлен для уменьшения матричных эффектов. Таким образом, результаты представлены для некоторых образцов с этапом экстракции гексаном и без него. В этом исследовании эффективность экстракции образцов герани с шипами варьировалась от 54% до 107% для 1,3-DMAA и от 63% до 86% для 1,4-DMAA.6

Было выполнено разделение 1,3-DMAA с использованием колонки Kinetex C18 и мобильной фазы 82/18 вода / ацетонитрил, причем водная фаза содержит 1% муравьиной кислоты.6 Обнаружение было выполнено с использованием MRM переходов m / z от 116 до 57 и m / z от 116 до 99,7, соответствующих потере углеводородных фрагментов. Используя этот метод, авторам удалось достичь пределов обнаружения 1,3- и 1,4-DMAA в растительном экстракте порядка от 0,6 до 3,2 мкг / л (ppb) .6 Это соответствует пределу обнаружения в около 20 нг / г в растительном материале.

Авторы обнаружили оба диастереомера 1,3-DMAA на хроматограммах и зарегистрировали диастереомерные отношения, равные 1.14 ± 0,08 в стандартах. Были зарегистрированы отношения 1,10 ± 0,01 в образце Чанчжоу S11-1, 1,25 ± 0,03 в образце Чанчжоу S11-2, 1,02 в образце Чанчжоу 1 и 1,16 ± 0,1 в образце Чанчжоу 3, что свидетельствует о естественной изменчивости диастереомерных соотношений6

Растительный материал Changzhou S-11 был получен из Intertek Laboratories и получен из того же образца Цзянсу, о котором сообщил Ли и др. 5 Для этого образца Флеминг и др. 6 сообщили о концентрации 1,3-DMAA 94,7 ± 15,1 нг / г без учета стадия экстракции гексаном и 254 ± 17 нг / г со стадией экстракции гексаном.Для сравнения Li et al5 сообщили о 165 нг / г для образца, взятого из того же растительного материала. Аналогичным образом, Fleming et al6 сообщили о концентрации 1,4-DMAA 13,5 ± 1,8 нг / г без стадии экстракции гексаном и 39,8 нг / г с стадией экстракции гексаном 6, в то время как Li et al5 сообщили о концентрации 35,3 нг / г для образец, взятый из того же растительного материала. Сходство результатов, полученных двумя разными лабораториями, анализировавшими подвыборки из одного и того же растительного материала с использованием схожих методов, является подтверждающим доказательством присутствия 1,3- и 1,4-DMAA в некоторых китайских видах герани.

Другие образцы растительного материала, полученные из Чанчжоу, Китай, также содержали 1,3- и 1,4-ДМАА. Fleming et al6 обнаружили 213 нг / г 1,3-DMAA и 52 нг / г 1,4-DMAA в одном образце, собранном в марте 2012 г. (Changzhou 1), и 68,8 ± 36,5 нг / г 1,3-DMAA и 118 ± 45 нг / г 1,4-DMAA во втором образце, собранном в мае 2012 г. (Чанчжоу 3). Это отражает изменчивость между растениями или, возможно, сезонные эффекты6.

Некоторые образцы были повторно проанализированы с использованием метода стандартных добавок, метода, который часто используется для минимизации матричных эффектов в сложных образцах, таких как биологические материалы.Используя метод стандартных добавок, Fleming et al6 обнаружили несколько более высокие уровни 1,3- и 1,4-DMAA в образце Changzhou 3 при концентрациях 97 ± 20 нг / г и 162 ± 48 нг / г, соответственно. Несколько более высокие уровни 1,3- и 1,4-DMAA были также обнаружены в образце Changzhou S11-2 — 496 ± 46 нг / г и 68 ± 7 нг / г, соответственно.

В других образцах растительного сырья герани, полученных из Китая, концентрации 1,3- и 1,4-ДМАА были на уровне или ниже предела обнаружения около 20 нг / г.6 1,3-DMAA был обнаружен в одном образце растения герани из Куньмина, Китай, около предела обнаружения 20 нг / г. Однако повторный анализ оказался ниже предела обнаружения метода. Концентрации 1,3-DMAA и 1,4-DMAA во всех других образцах из Куньмина и Гуйяна, Китай, были ниже предела обнаружения, составляющего примерно 20 нг / г.6

В короткой статье, подготовленной Лиси и др. 2, пять различных коммерчески доступные масла герани были проанализированы на присутствие 1,3-DMAA с помощью GC-MS. Источниками масла герани в пяти образцах были Египет, Франция и Новая Зеландия.Образцы масла экстрагировали 1 М HCl и трет-бутилметиловым эфиром (ТВМЕ). После дополнительной обработки водный слой подщелачивали с использованием 6 М КОН и добавляли гексан и пентафторбензилхлорид (ПФБКЛ) в качестве дериватизирующего агента. Слой гексана выпаривали досуха и восстанавливали в этилацетате для впрыскивания в колонку для ГХ. Об эффективности экстракции не сообщалось.2

Разделение производного 1,3-ДМАА проводили с использованием колонки Agilent HP Ultra 2. Полуколичественный анализ был основан на мониторинге выбранных ионов при m / z 238.Разделение обоих диастереомеров 1,3-DMAA было достигнуто с использованием этого метода, хотя авторы неправильно относят эти два пика к энантиомерам. Авторы сообщают, что 1,3-DMAA не был обнаружен ни в одном из пяти масел герани, однако не сообщалось о пределах обнаружения и не представлены стандартные концентрации или данные калибровки.2

Наконец, в коротком сообщении Di Lorenzo et al. 7 стеблей и листьев семи различных видов / сортов Pelargonium , полученных из питомника растений в Италии, были проанализированы на присутствие 1,3-DMAA с использованием ВЭЖХ с УФ-детектированием.Стебли и листья сначала экстрагировали метанолом при кипячении с обратным холодильником. Затем метанольные экстракты фильтровали, упаривали досуха и ресуспендировали в 1-2 мл метанола.7 В то время как во всех других исследованиях, рассмотренных в этой статье, использовалась кислая экстракционная среда, кислота здесь не добавлялась. Конечные экстракты метанола были дериватизированы с использованием о-фталальдегида. Разделение достигалось с использованием обращенно-фазовой колонки Synergi 4 мкм MAX-RP или Lichrocart 5 мкм RP18 и градиентного элюирования с использованием смеси ацетата натрия / тетрагидрофурана и метанола.Обнаружение производного 1,3-DMAA-o-фталевого альдегида было выполнено с использованием детектора с диодной матрицей с количественным определением при 334 нм.7

Извлечение 1,3-DMAA с шипами в образцах стеблей и листьев было более 97%, но пределы обнаружения были повышены до 600 и 1200 нг / г для стеблей и листьев соответственно. Для сравнения, Li et al5 и Fleming et al6 сообщили о пределах обнаружения порядка от 2 до 20 нг / г. Авторы сообщают, что не было обнаружено обнаруживаемых количеств 1,3-DMAA ни в одном из семи протестированных видов / сортов Pelargonium , а также в коммерческом масле герани из P.graveolens , выращенный в Африке, который также был протестирован.7

Анализы эфирных масел

Растения герани в основном выращиваются для производства эфирных масел для использования в косметике, парфюмерии и ароматерапии. Были опубликованы многочисленные исследования, определяющие основные составляющие и документирующие условия, влияющие на выход и состав добытого масла, включая метод дистилляции, 9,10 сезонные эффекты и климатические условия, 11–13 обработки проб (т.е. возраст листьев, высушены ли они. перед перегонкой) 14, а также почвенно-влажностные условия.15 Эти и другие исследования16–19 обычно обеспечивают химический распад компонентов масла, однако ни одно из этих исследований не подтвердило присутствие 1,3-DMAA. Некоторые ссылаются на эту работу как на дополнительное подтверждающее доказательство отсутствия 1,3-DMAA в растениях герани. 2,20 Однако существует ряд потенциальных причин, по которым эти исследования не сообщают об обнаружении 1,3-DMAA в растениях герани. масло.

Во-первых, существует значительный разброс в составе эфирных масел, полученных из растений герани.Международные стандарты классифицируют масла герани на три основных типа: африканский тип, включая масла из Алжира, Марокко и Египта; тип Бурбон с острова Реюньон; и китайский тип. Сообщается, что 90% эфирного масла состоит из примерно 30 соединений, относительные концентрации которых различаются среди различных типов масел.21 Остальные соединения, присутствующие в следовых количествах, могут значительно различаться. Например, Lalli et al16 идентифицировали в общей сложности 315 различных соединений в эфирных маслах, дистиллированных из 13 различных южноафриканских видов Pelargonium (18 образцов) с помощью ГХ и ГХ-МС.Однако общее количество компонентов, идентифицированных в одном образце эфирного масла, варьировалось от 52 до 87, и почти треть соединений (101 из 315) была обнаружена только в одном из 18 проанализированных образцов. Джалали-Херави и др. 19 идентифицировали 61 соединение в образце эфирного масла, полученного из растений герани, культивируемых в Иране, с помощью ГХ-МС. Этот список, однако, был неполным и в конечном итоге расширился до 85 соединений с добавлением методов хемометрического разделения. Шелли и Марриотт20 идентифицировали 65 различных соединений в эфирном масле египетской герани с использованием метода двумерной ГХ-МС.Kulkarni et al17 идентифицировали 48 компонентов эфирного масла, экстрагированного из трех клонов Бурбона, выращенных в Индии. Очевидно, что состав эфирных масел, извлеченных из различных типов растений, значительно варьируется.

Во-вторых, хотя пределы обнаружения обычно не сообщаются, кажется, что пределы обнаружения недостаточно низкие для обнаружения 1,3-DMAA в масле. Большинство этих исследований эфирных масел сообщают, что следовые уровни компонентов составляют порядка 0,01% масляной фракции, что эквивалентно 100 000 нг / г.Напротив, Li et al5 и Fleming et al6 сообщили о концентрациях 1,3-DMAA порядка 500 нг / г или менее в частях растения герани и масле, за исключением одного образца масла с концентрацией 1,3-DMAA 13000. нг / г или 0,0013%. Низкие пределы обнаружения, достигнутые Ли и др., 5, Флемингом и др., 6 и др. 3,4, требуют стадии кислотной экстракции и концентрирования перед анализом, что обычно не выполняется для анализа эфирных масел. Однако в одном исследовании, проведенном Вернином и др. [22], была выделена основная фракция масла бурбона герани путем экстракции 10% -ным раствором HCl с последующей промывкой диэтиловым эфиром, нейтрализацией гидроксидом натрия и экстракцией эфиром.Авторы обнаружили 2-метил-3-амино-1-пентен на низких уровнях вместе с двумя соединениями пиридина и другими неидентифицированными аминосоединениями в масле, однако 1,3-DMAA не было идентифицировано. Тем не менее, это исследование предполагает, что низкие уровни аминов, которые в противном случае остались бы незамеченными, могут быть обнаружены в некоторых маслах герани после кислотной экстракции и очистки.

Наконец, методы ГХ, используемые для анализа эфирных масел во всех вышеупомянутых исследованиях, не могут быть оптимизированы для анализа 1,3-DMAA, который имеет относительно низкую температуру кипения и будет быстро элюироваться через колонку. .Первые элюирующие соединения, о которых сообщалось в большинстве анализов эфирных масел, такие как цис-3-гексенол и α-пинен, имеют температуру кипения порядка 155–157 ° C.23 Поскольку 1,3-DMAA имеет сравнительно более низкая точка кипения от 130 ° C до 135 ° C, 24 она будет иметь тенденцию появляться как один из самых ранних пиков элюирования и потенциально находится за пределами области интереса для многих из этих исследований, особенно если имеется запрограммированная задержка растворителя24 Vorce et al. al24 отмечают, что анализ 1,3-DMAA возможен с помощью ГХ-МС, но необходимо проявлять большую осторожность для оптимизации параметров ГХ для этого соединения.

В недавней патентной заявке компании Northern Innovations and Formulations Corp. на травяную добавку, приготовленную из герани, описан метод экстракции, который утверждает, что оптимизирует содержание 1,3-DMAA в масле путем экстракции масла смесью спирта и воды, разделение масляной и водной фаз, концентрирование и сушка водной фазы до порошка, а затем, после очистки масла, смешивание порошка с очищенным маслом.25 Этот процесс заявлен для достижения концентраций 1,3-DMAA в диапазоне От 1% до 3%, что свидетельствует о том, что большая часть 1,3-DMAA, экстрагированного при производстве эфирных масел, может оказаться в водной фазе.Это может быть еще одной потенциальной причиной того, почему анализы эфирных масел не могут определить измеримые уровни 1,3-DMAA.

Выводы

Недавние исследования, обобщенные в этом отчете, предоставляют противоречивые доказательства того, что 1,3-DMAA естественным образом встречается в некоторых видах растений герани. Однако различия в источниках проб, процедурах извлечения и методах анализа могут быть причиной противоречивых результатов. Род Pelargonium включает более 270 различных видов, большинство из которых являются коренными жителями Южной Африки, но многие из них в настоящее время широко культивируются в России, Египте, Индии и Китае, который в настоящее время является крупнейшим производителем гераниевого масла.16,21,26 Многие сорта, выращиваемые для производства эфирного масла, являются межвидовыми гибридами21, и исследования показали, что состав и качество экстрагированного масла зависят от сорта растения, метода экстракции, типа почвы и климатических условий. 9,16,17,21 Таким образом, неудивительно, что некоторые образцы растительного сырья и экстрагированных масел содержат 1,3-DMAA, тогда как другие нет.

На основании исследований, рассмотренных в этой статье, обработка может также играть роль, поскольку 1,3-DMAA с большей вероятностью будет обнаружен в образцах, извлеченных в лаборатории из стеблей и листьев растений, чем в коммерчески доступных продуктах, продаваемых для использования в медицине и ароматерапия.27 Причина этого может быть связана с коммерческими процедурами экстракции, разработанными для повышения извлечения эфирных масел, а не 1,3-DMAA. Недавняя патентная заявка предполагает, что большая часть 1,3-ДМАА, экстрагированного в процессе производства эфирных масел, может оказаться в водной фазе.25

Три исследования, оцененных в этом отчете, включали анализ листьев и стеблей растений герани, собранных в Китай и Индия. Ли и др. 5 обнаружили 1,3-ДМАА в аутентифицированных растительных материалах, собранных в трех областях Китая (Юньнань, Цзянсу и Гуйчжоу), а Флеминг и др .6 обнаружили 1,3-ДМАА в аутентифицированных растительных материалах из Чанчжоу, Китай и, при низких уровнях, в растительном сырье из Гуйяна, Китай.Однако 1,3-DMAA не было обнаружено в растительных материалах, собранных в Куньмине, Китай. ElSohly et al4 проанализировали аутентичные растительные материалы из Индии и США (штат Миссисипи) и сообщили об отсутствии обнаруживаемых количеств 1,3-DMAA при пределе обнаружения 100 частей на миллиард. Однако проверка хроматограмм предполагает качественное присутствие 1,3-ДМАА на уровнях ниже 100 частей на миллиард в некоторых образцах аутентифицированного растительного материала. Авторы также не сообщили об обнаружении 1,3-DMAA с помощью метода ВЭЖХ с гораздо более низкими пределами обнаружения (2.5 частей на миллиард). Однако этот метод не позволил разделить диастереомеры 1,3-DMAA. Третий метод (UPLC-ESI-QTOF) с расчетным пределом обнаружения 10 частей на миллиард также использовался для анализа образцов. Хотя никаких данных по этому методу представлено не было, сводная таблица, представленная авторами, предполагает, что 1,3-DMAA мог быть обнаружен в высушенных стеблях растений на уровне ниже 10 частей на миллиард. Таким образом, все три исследования, включающие экстракцию растительного сырья, обеспечивают количественную или качественную поддержку естественного присутствия 1,3-DMAA в растениях герани.

Четыре из рассмотренных исследований включали анализ коммерчески доступных масел герани. Чжан и др. 3 проанализировали восемь различных масел герани, полученных из Китая и Египта. Lisi et al2 проанализировали пять масел герани, полученных из Египта, Франции и Новой Зеландии. ElSohly et al4 проанализировали 20 различных образцов коммерческого масла герани, но не сообщили об источниках; и Ли и др. проанализировали образцы гераниевого масла, полученные на фабрике по производству ароматизаторов в провинции Цзянси, Китай. Только Ли и др. 5 обнаружили 1,3-ДМАА в товарном нефтепродукте.

Все восемь образцов гераниевого масла, проанализированные Чжаном и др. 3, как сообщается, были извлечены из растений герани с использованием паровой дистилляции. Lisi et al2 предполагают, что из-за летучести 1,3-DMAA паровая дистилляция не может быть подходящей техникой для его экстракции вместе с нефтепродуктом, и что альтернативный процесс холодного отжима дает больше шансов удерживать 1,3- ДМАА в масле. Zhang et al3 сообщили об отсутствии обнаружения 1,3-DMAA ни в одном из образцов гераниевого масла с использованием метода HPLC-ESI-LIT с пределом обнаружения 50 частей на миллиард, а также об отсутствии обнаружения 1,3-DMAA с помощью альтернативного HPLC-ESI. -QQQ метод с пределом обнаружения 10 частей на миллиард.Авторы использовали несколько сложную многоступенчатую технику экстракции для проб масла и не сообщили об эффективности экстракции для этого метода. В методе HPLC-ESI-LIT использовалась хроматографическая колонка с хиральной стационарной фазой, которая, как сообщается, способна адекватно удерживать первичные амины. Однако авторам не удалось добиться разделения ни энантиомеров 1,3-ДМАА, ни диастереомеров в стандартах. Аналогичным образом, только один пик был зарегистрирован с использованием метода HPLC-ESI-QQQ3.

Lisi et al2 проанализировали пять образцов масла герани из Египта, Франции и Новой Зеландии; три образца были извлечены с помощью перегонки с водяным паром.1,3-DMAA не был обнаружен ни в одном из образцов масла, но о пределах обнаружения не сообщалось. ElSohly et al4 также сообщили об отсутствии детектируемых количеств 1,3-DMAA с пределом обнаружения 100 частей на миллиард с использованием одного метода. Однако опубликованные хроматограммы для одного из образцов масла до и после добавления 1,3-DMAA на пределе обнаружения предполагают качественное присутствие 1,3-DMAA в исходном образце. Кроме того, сводная таблица, включенная в документ, предполагает, что 1,3-DMAA может присутствовать в 25% (5 из 20) промышленных проб масла на уровнях ниже 10 частей на миллиард.4

Наконец, Ли и др. 5 обнаружили 1,3- и 1,4-ДМАА в образцах гераниевого масла, полученных на заводе ароматизаторов в Цзиане, провинция Цзянси, Китай. Концентрации 1,3-DMAA варьировались от 167 до 13 271 нг / г в трех образцах. 1,4-ДМАА был обнаружен только в одном из образцов в концентрации 220 нг / г. За исключением одного образца гераниевого масла, проанализированного Ли и др., 5 концентраций 1,3-DMAA, обнаруженных в растительных материалах герани и экстрагированных маслах, обычно меньше 500 частей на миллиард.

Только Zhang et al4 сообщают о разделении 1,3-DMAA на его четыре стереоизомера, выполненном с использованием GC-FID, снабженного хиральной неподвижной фазой.Однако этот метод использовался для анализа пищевых добавок, а не растительного сырья герани. Таким образом, ни в одном из пяти исследований не было представлено данных, касающихся энантиомерной чистоты 1,3-ДМАА, экстрагированного из растений и масел герани. Во всех пяти исследованиях сообщалось о разделении 1,3-DMAA на его диастереомеры, а диастереомерные соотношения были аналогичными для 1,3-DMAA, обнаруженного в коммерчески доступных стандартах, пищевых добавках, экстрактах растительного сырья герани и масле герани.

В целом, эти исследования показывают, что 1,3-DMAA естественным образом содержится в некоторых, но не во всех, растениях герани и экстрагированных гераниевых маслах. Количественные5,6 и / или качественные4 доказательства присутствия 1,3-DMAA в растительных материалах с большей вероятностью можно найти в исследованиях, включающих экстракцию растительных материалов в лаборатории, а не в анализе коммерчески доступных продуктов, продаваемых для использования в медицине и ароматерапии. . Вероятно, это связано с различиями в обработке. Паровая дистилляция, которая, по-видимому, является предпочтительной процедурой экстракции товарных масел, может не подходить для удержания 1,3-DMAA.В лаборатории обнаружению 1,3-DMAA, по-видимому, способствуют процедуры экстракции, включающие меньшее количество этапов экстракции, что сводит к минимуму возможность потерь. В этом обзоре все исследования, сообщающие об отрицательных результатах присутствия 1,3-DMAA, включают процедуры экстракции, включающие стадию выпаривания до высыхания или удаление растворителя в вакууме, что может отрицательно повлиять на эффективность экстракции из-за летучести 1,3-DMAA.

Наконец, эти исследования показывают, что существует значительная вариабельность содержания 1,3-DMAA от растения к растению.В растительных материалах, в которых был количественно обнаружен 1,3-DMAA, все из которых получены из Китая, концентрации обычно менее 500 частей на миллиард. Однако некоторые растения из Китая не содержат обнаруживаемых уровней 1,3-DMAA, в то время как одно масло герани, полученное из Китая, содержало более 13 ppm 1,3-DMAA.

Время действовать в отношении неавторизованных спортивных товаров DMAA-geranium в Европе?

DMAA, который обычно известен под другими названиями, включая 1,3-диметиламиламин и метилгексанамин (MHA), не разрешен для использования в пищевых добавках в Европейском Союзе, но включен во многие продукты для похудания и бодибилдинга, обычно обозначаемые как экстракты герани.

Такие продукты, как «Jack3d» от USPLabs, продаются на многих веб-сайтах розничной торговли по всему ЕС, несмотря на то, что на панели ингредиентов продукта указан 1,3-диметиламиламин, который, как утверждается, является производным от «стебля герани».

Ситуация побудила одного итальянского комментатора на недавнем торговом мероприятии NUCE в Милане задуматься, почему власти его страны не предпринимают каких-либо действий.

«Конечно, проблема в том, что DMAA и масло герани — даже в натуральной форме — не могут использоваться в Италии в пищевых добавках», — сказал он . «Но пока ничего не делается».

Jack3d, который может похвастаться этим, «вызывает сильное ощущение драйва, сосредоточенности, энергии, мотивации и осведомленности» и «позволяет быстро увеличивать силу, скорость, мощность и выносливость» Продается по цене около 30 евро на втором по популярности сайте розничной торговли пищевыми добавками в Италии.

Ситуация, как известно, расследуется по крайней мере одной европейской торговой организацией, и она вышла из поля зрения финансируемого ЕС ботанического исследовательского проекта PlantLIBRA.

Источник

Продолжаются споры, особенно в Северной Америке, о том, действительно ли DMAA, впервые произведенный синтетическим путем фармацевтическим гигантом Эли Лили в 1940-х годах и под торговой маркой Forthane в 1971 году, действительно является составной частью герани. растет консенсус, что это не так.

Министерство здравоохранения Канады в августе опубликовало заявление о том, что DMAA не содержится в герани в естественных условиях, и подтвердило, что любые продукты, содержащие его, требуют разрешения на лекарство. Но Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) еще не приняло мер по этому поводу, в то время как торговые группы проводят собственные исследования.

В то время как законность несколько мрачна, практика маркировки зависит от того факта, что в пищевых добавках допускается использование натуральных веществ; синтетически произведенное вещество не так, если оно не имеет явного разрешения. Тем не менее, во многих юрисдикциях, включая США, природные экстракты также требуют разрешения.

Допинг

DMAA и экстракты герани запрещены Всемирным антидопинговым агентством (ВАДА), и имели место допинговые нарушения, некоторые из которых находятся в процессе, и которые могут привлечь внимание общественности к проблеме возможной фальсификации с большей интенсивностью, чем это произошло до настоящего времени.

Американский теннисист Роберт Кендрик был запрещен на 12 месяцев ранее в этом году после положительного результата теста на «герани» после приема продукта, подобного Jack3d, содержащего 1,3-диметиламиламин.

«Это продается как безопасная и законная пищевая добавка», — сказал Трэвис Тайгарт, глава Антидопингового агентства США (USADA), DMAA. «Это не так. Это имело трагические последствия для спортсменов. И есть целая группа потребителей, которые не имеют ни малейшего понятия».

Многие в промышленности хотели бы, чтобы DMAA был удален из продуктов, потому что они опасаются, что неправильное использование сильнодействующего стимулятора может привести к серьезным травмам, как это произошло с другим мощным растительным стимулятором, эфедрином, до того, как FDA США запретило его в 2003 году.Он по-прежнему запрещен в большинстве стран.

Однако поиск в базе данных отчетов FDA о побочных эффектах (AER) не выявил явлений, связанных с DMAA, в 2008 и 2009 годах.

Присутствует в герани?

Согласно единственному анализу, проведенному китайскими исследователями с использованием методов газовой хроматографии и масс-спектрометрии (ГХ-МС) и опубликованным в Журнале Технологического института Гуйчжоу (1996 г., том 25, стр. 82-85), DMAA входит в состав масла герани, но ни один другой опубликованный анализ не сообщил о его присутствии.

Министерство здравоохранения Канады раскритиковало китайскую статью за «ошибки» и отметило, что по крайней мере семь других статей не обнаружили DMAA в гераниевом масле.

Агентство сообщило, что «нет достоверных научных доказательств того, что DMAA улавливается как изолят растения… и, следовательно, не может быть классифицирован как натуральный продукт для здоровья».

Эд Висзумиала, генеральный менеджер программ диетических добавок в NSF International, сказал NutraIngredients-USA в то время: «Это еще раз показывает, что DMAA является активным фармацевтическим ингредиентом (API), а не диетическим ингредиентом.”

Исследование не обнаружило DMAA в герани

Согласно новому исследованию, проведенному ElSohly Laboratories Inc. ( J Anal Toxicol. , 25 июня 2012 г.),

OXFORD, Miss DMAA, получают не из гераниевого масла, а добавки, содержащие DMAA, скорее всего, имеют синтетическое происхождение.

1,3-Диметиламиламин (DMAA), также известный как метилгексанамин (MHA), является спорным ингредиентом, который недавно испытал огонь со стороны FDA, которое разослало предупреждающие письма 10 компаниям, продающим ингредиент, с вопросом, был ли ингредиент получен из герани.Были поданы и другие иски, утверждающие, что DMAA является синтетическим. Ранее в этом году Американская ассоциация травяных продуктов (AHPA) запретила своим членам маркировать синтезированный человеком вариант как производное масла герани или любой части растения герани.

Nutrex, одна из компаний, получивших письмо с предупреждением FDA о DMAA, не утверждала, что ее DMAA не является синтетическим; вместо этого он сказал, что FDA неправильно полагать, что синтетические формы встречающихся в природе веществ не могут быть диетическими ингредиентами.Кроме того, Nutrex предоставила агентству семь исследований, чтобы показать, что DMAA безопасен для использования в соответствии с указаниями.

В исследовании ElSohly Lab исследователи использовали как газовую хроматографию-масс-спектрометрию (CG-MS), так и жидкостную хроматографию-тандемную масс-спектрометрию (LCTMS) для изучения аутентифицированной герани ( Pelargonium graveolens ), чтобы определить, содержит ли она определяемые количества DMAA. . Результаты были дополнительно подтверждены с помощью жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии высокого разрешения.

Они исследовали 20 коммерческих эфирных масел герани, три проверенных эфирных масла и проверенные листья и стебли герани (молодые и зрелые, свежие и сушеные). Они также протестировали три пищевые добавки, содержащие DMAA, источником которых была герань.

Данные показали, что ни одно из проверенных эфирных масел или растительного материала герани, а также какое-либо коммерческое масло герани не содержит DMAA на обнаруживаемых уровнях 10 частей на миллиард. Они обнаружили, что пищевые добавки содержат большое количество DMAA.Однако «измеренные количества MHA [DMAA] несовместимы с использованием разумных количеств экстракта или концентрата P. graveolens, что позволяет предположить, что MHA имеет синтетическое происхождение», — пишут исследователи.

Узнайте, как проблема DMAA влияет на индустрию пищевых добавок, из статьи Роберта Дж. Херрингтона и Джастина Дж. Прохнова в INSIDER «DMAA: Industry Under Siege».

Фитохимические анализы не позволяют идентифицировать метилгексанамин (MHA или DMAA) как естественный компонент пеларгониевых масел или душистых листьев или стеблей герани «роза»

ElSohly MA, Gul W., ElSohly KM, et al. Пеларгония масло и метилгексанамин (MHA): аналитические подходы, подтверждающие отсутствие MHA в аутентифицированной пеларгонии graveolens растительный материал и масло. Дж Анальный токсикол . 25 июня 2012 г .; [epub перед печатью]. DOI: 10.1093 / jat / bks055.

Хотя Пеларгония и Герань — это два разных растения. родов семейства Geraniaceae, масло из пеларгоний видов составляет часто обозначается общим названием как масло герани.Одно предыдущее исследование на душистой «розовой» герани ( P. graveolens ) нефть сообщила присутствие соединения, известного как 4-метил-2-гексанамин (MHA), в дополнение к другие соединения, такие как терпены и сесквитерпены. ¹ Также известен как диметиламиламин (DMAA), MHA получил новое лекарство, одобренное Управлением по контролю за продуктами питания и Управление по лекарствам (FDA) и использовалось как назальное противозастойное средство до тех пор, пока не производитель, Eli Lilly and Company, снял его с рынка в 1983 году. случаи неблагоприятных побочных эффектов, связанных с использованием этого стимулятора, имеют привело к ограничениям в Канаде и Новой Зеландии, а также к Всемирному антидопинговому Агентство недавно запретило его использование.

В соответствии с правилами, изложенными в Диетических добавках для здоровья и Закон об образовании 1994 г. (DSHEA), растительные и травяные вещества разрешены продаваться как диетические добавки; это относится к продуктам, содержащим MHA если соединение присутствует в растении, таком как герань. Если соединение или продукт не подпадает под эти определения DSHEA, он подлежит FDA Система уведомления о новых диетических ингредиентах (NDI) и данные о безопасности должны быть представлен в это агентство для его использования.Поскольку синтетический ГМК широко используется в доступны, и недавние исследования не подтвердили наличие MHA в герани, авторы этого аналитического исследования исследовали, может ли MHA можно найти в листьях, стеблях или эфирном масле розовой герани.

Настоящий душистый растительный материал герани был закуплен в обеих странах. Индийский институт интегративной медицины в Джамму, Индия и Национальный Центр исследования натуральных продуктов (NCNPR) Университета Миссисипи, Оксфорд, штат Миссисипи.Эфирное масло производили паровой дистилляцией листьев для выход 0,16% сырой массы. Дополнительные образцы коммерческого существенного масла, закупленные для исследования, состояли из этой и другой герани, т. е. дикой герань ( G. maculatum ) и герань яблоня (P. odoratissimum ), масел. Коммерческие спортивные добавки, в которых утверждается, что продукты содержат «диметиламиламин (стебель герани)» или «1,3-диметиламиламин» также были проанализированы. Все материалы были извлечены и разделены по мере необходимости, перед анализом с помощью газовой хроматографии-масс-спектрометрии (ГХ-МС), жидкостная хроматография-тандемная масс-спектрометрия (ЖХ-МС-МС) и / или ЖХ-МС высокого разрешения (ЖХ-QTOF-MS).Стандарт MHA использовался для количественной оценки, а внутренний стандарт (2-амино-6-метилгептан) использовали для подтверждения экстракции и методы обнаружения. Кроме того, был проведен эксперимент с подачей импульсов, чтобы убедиться, что что любое отсутствие MHA не было связано с отсутствием извлечения MHA при экстракции процессы.

Всего 20 товарных масел (включая по 1 пробе каждого другого 2 видов), 3 аутентичных масла и аутентичные свежие и сушеные душистые листья и стебли герани оценивались.Метод ГХ-МС имел предел обнаружение (LOD; концентрация, выше которой соединение может быть обнаружено КИПиА) 0,1 ppm; MHA не был обнаружен выше этой концентрации в любое из масел, использующих этот метод. Затем масла были проанализированы с помощью ЖХ-МС-МС. метод с гораздо более низким уровнем детализации, равным 2,5 частей на миллиард, и концентрацией MHA выше этого LOD также не наблюдались. Когда все образцы растений и масел были проанализированы с методом LC-QTOF-MS не было обнаружено ГАМ с уровнем детализации выше 10 частей на миллиард. Конкретно, листья душистой герани на разных стадиях роста не обнаруживали MHA выше 10 нг / мл в любой момент; это также наблюдалось при анализе высушенных Растительный материал.

Однако из проанализированных коммерческих продуктов концентрации выше Было обнаружено 1 мг / г MHA; вместе с приведенными выше результатами, это маловероятно, что листья, стебли или масло герани являются источником ГМК в этих продукты. Поскольку массовый MHA коммерчески доступен, предлагается, чтобы MHA в спортивных добавках могут быть синтетического происхождения. Если это так, как строго подтверждается данными, представленными здесь, MHA может подпадать под NDI руководящие принципы, требующие данных о безопасности или установленной истории использования, показывающие, что соединение и добавка «можно разумно ожидать, что они безопасны.«

Использование MHA в спортивных добавках, продаваемых в США, получает пристальное внимание в последнее время. ^{2, 3} В свете сообщений о серьезных неблагоприятных побочные эффекты, связанные с использованием MHA, такие как кровоизлияние в мозг, повышенное кровяное давление без одновременного увеличения частоты сердечных сокращений, кома и смерть, безопасность потребления MHA находится под вопросом. В этом исследовании была проведена тщательное и широкое расследование не только их собственных приготовлений аутентичный материал герани и эфирное масло, а также товарное масло и продукты, содержащие MHA.В исследовании также выяснялось, может ли развитие растений и препарат повлиял на присутствие MHA. Кроме того, несколько инструментов и методы, строгое использование стандартов и валидация методов были заняты. Таким образом, в исследовании представлены чрезвычайно убедительные доказательства того, что MHA в анализируемые коммерческие добавки имеют синтетическое происхождение. Распространенный и заслуженный внимание к этой статье в идеале поможет предотвратить дальнейшую токсичность от расход MHA.

— Эми С.Келлер, доктор философии

Список литературы

¹ Ping Z, Jun Q, Qing L. Исследование химических составляющих масла герани. Журнал Технологического института Гуйчжоу . 1996; 25 (1): 82-85.

² Коэн PA. DMAA как ингредиент диетической добавки. Arch Intern Med . 2012; 172 (13): 1038-1039. DOI: 10.1001 / archinternmed.2012.1677.

³ Smith T. FDA, промышленность организации принимают меры против спорного DMAA.