Станозолол туринабол курс: Курс Туринабол Станозолол

Курс Туринабол Станозолол

Курс Туринабол Станозолол

Это сочетание стероидов в первую очередь предназначено для начинающих спортсменов. Преимуществом курса Туринабол Станозолол является отсутствие в его составе инъекционных ААС. Не каждый атлет готов начать свое знакомство с препаратов в уколах. Учитывая умеренные дозировки стероидов и небольшой срок их использования, риски развития негативных эффектов минимальны.

 

Задачи курса и характеристики препаратов

 Многие начинающие бодибилдеры проходят курс Туринабол Станозолол и получают при этом отличные результаты. С его помощью можно набрать несколько кило высококачественной массы и улучшить рельеф мускулатуры. Оба препарата обладают жиросжигающими свойствами, благодаря чему спортсмен избавиться от лишнего жира.

Не стоит забывать и о том, что Станозолол резко повышает скорость процессов утилизации воды. Кроме этого с первых дней курса Туринабол Станозолол вы ощутите прирост силовых показателей.

В организме значительно увеличится запас энергии, что благотворно скажется на результатах тренинга.

Так как одной из задач курса является улучшение рельефа, в период его проведения следует придерживаться соответствующей программы питания. Не секрет, что для активации процессов липолиза организм должен перейти в режим катаболизма. Это может привести к разрушению мышечных тканей, но только не на курсе Туринабол Станозолол. Оба препарата являются сильными антикатаболиками.

 

Таким образом, можно подвести итог и выделить основные положительные эффекты сочетания этих двух препаратов:

● Активное сжигание адипозных тканей, приводящее к увеличению энергетических резервов организма.

● только качественной мышечной массы.
● Увеличение выносливости и силовых характеристик.
● Улучшение рельефа мускулатуры.
● Мышцы приобретут дополнительную жесткость, и улучшится венозность.
● Ускоряется метаболизм.
● Обеспечивается надежная защита мышечных волокон при использовании низкокалорийной диеты.

Изучив описанные выше свойства, становится понятно желание билдеров провести курс с участием Туринабола и Станозолола.

 

Возможные побочные эффекты 

Оба стероида отличаются высокой безопасностью. Учитывая длительность курса и дозировки анаболиков, за развитие побочных эффектов можно не переживать. Однако после отмены ААС нужно провести ПКТ. Хотя используемые стероиды не так сильно подавляют работу гипофизарной дуги, без помощи организму потребуется много времени для нормализации гормонального фона.

 

Схема проведения курса

Это не только один из самых доступных по стоимости курсов, но и крайне простой в проведении. На протяжении первой недели ежесуточно нужно принимать по 20 миллиграмм Станозолола и Туринабола. Причем делать это следует в разное время. Например, утром употребляется станаза, а вечером – турик.

Начиная с третьей недели и до момента отмены препаратов, их суточная дозировка составит уже 30 миллиграмм. Напомним, что длительность курса Туринабол Станозолол составляет 4 недели. Через пару дней после приема последних таблеток, можно начинать проводить восстановительную терапию. Отличным выбором станет Кломид. Это эффективный антиэстроген. способный ускорить процесс синтеза гормонов гонадотропной группы.

Схема применения препарата также крайне проста. Каждый день на протяжении 2-3 недель нужно принимать по 50 миллиграмм Кломифен Цитрата. Также можно дополнительно использовать и тестсотероновые бустеры, например, Трибулус. Это позволит организму восстановиться еще быстрее. Так как оба стероида не обладают эстрогенными или прогестагенными свойствами, использовать на курсе вспомогательные препараты не нужно.

Тестостерон пропионат + Станозолол + Туринабол

Сообщение об ошибке

Deprecated function: The each() function is deprecated. This message will be suppressed on further calls в функции _menu_load_objects() (строка 579 в файле /var/www/bodycontrol/data/www/bodycontrol.ru/includes/menu.inc).

 

В курс входит:

Тестостерон пропионат (100мг/1мл) — 14 мл

Станозолол Депо (100мг/1мл) — 14 мл

Туринабол (1таб 10мг) — 168 табл

Клебутерол (1таб 20мкг) — 56 таб

Тамоксифен (1таб 10мг) — 91 таб

 

Неделя	Туринабол	Тестостерон П	Станозолол	Кленбутерол	Тамоксифен
1	30мг (в день)	50мг (через день)	50мг (через день)
2	30мг (в день)	50мг (через день)	50мг (через день)
3	30мг (в день)	50мг (через день)	50мг (через день)
4	30мг (в день)	50мг (через день)	50мг (через день)
5	30мг (в день)	50мг (через день)	50мг (через день)
6	30мг (в день)	50мг (через день)	50мг (через день)
7	30мг (в день)	50мг (через день)	50мг (через день)
8	30мг (в день)	50мг (через день)	50мг (через день)
9				40мкг (в день)	60мг (в день)
10				40мкг (в день)	40мг (в день)
11				40мкг (в день)	20мг (в день)
12				40мкг (в день)	10мг (в день)

 

Фактически данная схема оптимальна для набора качественной мышечной массы и силовых показателей. Ставить надо будет по 0,5мл если дозировки по 100мг в 1 мл препарата. Есть небольшой риск гинекомастии (вследствие ароматизации тестостерона), однако эстрогены положительно влияют на рост силовых показателей, а также пропионат в меньшей степени ароматизируется, по сравнению с другими более длинными эфирами типа энантата или ципионата. Для полной уверенности допустимо применение ингибиторов ароматазы (типа

Анастрозол или Эксеместан) в низких дозировках, начиная со 2-3 недели введения тестостерона.

 

анализ на тестостерон у мужчин как сдавать

анализ на тестостерон у мужчин как сдавать

Ключевые слова: как вырабатывается тестостерон, заказать анализ на тестостерон у мужчин как сдавать, как увеличить количество тестостерона.

анализ на тестостерон у мужчин как сдавать

тестостерон пропионат тренболон станозолол курс, повышенный тестостерон форум, эндокринолог тестостерон, тестостерон фармаком, тестостерон понижен прогестерон повышен

гипофиз тестостерон

тестостерон фармаком Когда следует сдавать анализ на тестостерон и где это сделать? Сдать анализы на гормоны можно в любой специализированной медицинской лаборатории. Анализ на тестостерон у мужчин: сколько стоит, когда сдавать? Анализ на тестостерон у мужчин показания к назначению, правила подготовки и сдачи, расшифровка результатов. При наличии серьезных подозрений на гормональные нарушения врачи рекомендуют мужчинам сдать анализ на тестостерон. От этого вещества полностью зависит функция половой. Определение уровня тестостерона в организме мужчины позволяет врачу составить подробную картину о здоровье пациента на основании полученных результатов, поставить точный диагноз. Анализ на тестостерон у мужчин: сколько стоит, когда сдавать? Сегодня у представителей мужского пола часто наблюдается снижение уровня тестостерона – гормона, формирующегося в области яичек посредством клеток Лейдига, в зоне надпочечников. Тестостерон, как правило, относится к мужским. Зачем нужны анализы на тестостерон у мужчины и как сдавать? Перед анализом нельзя пить жидкость и есть, как минимум за 8 часов до посещения лаборатории. Сдать анализ на тестостерон можно с 9 до 11 часов утра. Анализ на тестостерон позволяет своевременно выявить количество этого гормона, основная задача которого заключается в исполнении очень важных для организма задач. Тестостерон — главный половой гормон мужчин, однако он вырабатывается и у женщин — правда, не в столь значительных количествах. Что такое тестостерон и когда необходимо сдать кровь на анализ уровня гормона. Как сдавать анализы на тестостерон: подготовка и принципы проведения. Анализ на тестостерон у мужчин – это диагностическое исследование, отличающееся высокой точностью. Проводится при наличии показаний. Сдавать на тестостерон анализ следует в случае выявления отклонений или подозрение на их наличие в организме. Анализ на тестостерон у мужчин может показать низкие показатели, которые формируются на фоне возрастных изменений. Они вполне могут находиться в пределах нормы. тестостерон понижен прогестерон повышен тестостерон у мужчин врач тестостерон 50 лет

пик тестостерона гипофиз тестостерон индекс тестостерона у женщин как вырабатывается тестостерон как увеличить количество тестостерона тестостерон пропионат тренболон станозолол курс повышенный тестостерон форум эндокринолог тестостерон

Улучшение ситуации и восстановление потенции я заметил уже на 2-й день. Даже сначала не верилось в то, что средство так может быстро действовать. Тем более что его надо всего лишь прикрепить к коже. Но в итоге мне удалось быстро и без изнурительных процедур нормализовать отношения с женой. На выработку тестостерона влияет мощно. Проблема есть. Когда увидел информацию о пластырях Testonormin и искомую траву в их составе – сразу заказал. Остальные компоненты тоже вполне тонизирующие. Месяца 4 использую пластыри с некоторыми перерывами. Мужа особо убеждать не пришлось, ему самому некоторые нюансы были неприятны. Он сам использовал, я не лезла, просто мысль направила и заказала. Остальное комплексное лечение, включая питание, но им не ограничиваясь, уже сама обеспечила. Итогами уже через месяц очень довольна, дома регулярно принимаю благодарности в разной форме. Все ответы на тему Лечение повышенного тестостерона у женщин. Вся информация на BabyBlog. У меня тестостерон на верхнем граничном показателе, назначили оральные контрацептивы. выписали Диане35, но там столько побочек!!! это Комбинированный препарат содержащий эстроген. Отличие общего тестостерона от свободного. Повышенный уровень тестостерона у женщин. То есть лечение было комплексным и внешнее, и внутреннее. Подробнее я уже рассказывала в отзыве об анализе на демодекс. Повышенный тестостерон, Г прописала Джес на 3 месяца + Флутамид 250мг. У тебя какой тестостерон повышен. Свободный? Мне помогла снизить только. Аллергия на шеллак требует немедленного лечения. Она не только повреждает кожу рук, но и ухудшает общее самочувствие. Как её обнаружить, чем. Сообщества. Хочу ребенка. Повышенный тестостерон. Но опять же не лечение, а просто достижение цели. Вот куда идти лечиться даже не знаю. ЕвгенияЯ там не лечилась, для меня лечение это когда пролечилась и стала здоровой — появился регулярный цикл, овуляция своя, эндометрий хорошо растет т.д.. у кого нибудь получилось снизить тестостерон только травами? 🙂 поделитесь опытом, какие травы вам помогли? когда появились первые результаты? уже год я пью диане35 и верошпирон (25 мг, с 5 по 10 день цикла)но увы, результатов нет. не. 2.Какое применяли лечение? 3.Если смогли привести в норму,то какие улучшения в самочувствие и в целом в себе?. у меня повышенный тестостерон.Выпадение волос и лишний вес( килограмма 4 не могу никак сбросить). Как понизить тестостерон народными средствами Как понизить тестостерон, не обращаясь к врачу? Существует ряд целебных трав, которые помогают при повышенном тестостероне у женщин: корень солодки, дягиль, марьин корень, энотера, клопогон и витекс священный. Можно поддержать снижение. Лечение низкого уровня тестостерона. Повысить уровень тестостерона можно, не прибегая к медицинской помощи, а с помощью. Поделитесь с друзьями! причины и признаки. диагностика и лечение. инструкция по применению. отзывы о препарате. Польза морковного сока для мужчин и его применение Поднимаем тестостерон. Для тех, кому есть что рассказать рецепты, адреса клиник и прочее. Начал пить Eurycoma Longifolia Jack,как я понял это и есть тонгкат али. Пью в надежде поднять тестостерон и увеличить либидо.Пью почти месяц,но чтоб я хоть чтото почувствовал сказать нельзя.Есть все.

анализ на тестостерон у мужчин как сдавать

индекс тестостерона у женщин

Были у меня сомнения по поводу разных средств по повышению либидо и потенции. Средство, купленное на официальном сайте под названием Testonormin, как не странно, оказалось эффективным. Сначала, при первом наклеивании пластыря, прислушивался к себе и своим ощущениям. Но как только вернулась жена с работы, то страхи улетучились и все вернулось в норму. Выдался у нас удачный вечер. Тестостеро́н (от тестикулы, стерол и кетоны) — основной мужской половой гормон, андроген. Синтезируется из холестерина клетками Лейдига семенников. Тестостерон находится в непосредственном взаимодействии со своим. Тестостерон имеет непосредственного начальника ЛГ (лютеинизирующий гормон), который вырабатывается, без шуток сказать, в головном центре. Тестостерон определяет самца, альфача и доминатора. С возрастом уровень гормона мужественности неизбежно падает, вызывая кучу неприятных проблем, в том числе и с эрекцией. К счастью, тестостерон можно повысить без. Тестостерон – это мужской половой гормон, который производится из холестерина и играет значимую роль в половом развитии не только мужчин, но и женщин. Многих сторонников здорового и достаточно активного образа жизни интересует вопрос: какой должна быть норма тестостерона у мужчин? Тестостеро́н (от тестикулы и стероид) — основной мужской половой гормон, андроген. Секретируется из холестерина клетками Лейдига семенников у мужчин, а также в небольших количествах яичниками у женщин и корой. Что такое тестостерон? Как повысить его уровень и нужно ли вообще это делать? Эти вопросы рано или поздно (но, к сожалению, скорее поздно, чем рано) задает каждый мужчина. Такого рода интерес вполне логичен и оправдан. Норма тестостерона у мужчин до 28,3, а у женщин до 2,85 пг/моль. Даже незначительные отклонения в производстве тестостерона влекут за собой. Тестостерон – основной андроген, вырабатываемый, главным образом, клетками. Тестостерон циркулирует в крови как в свободном (свободный тестостерон. анализ на тестостерон у мужчин как сдавать. тестостерон у мужчин врач. Отзывы, инструкция по применению, состав и свойства. Курс Тестостерон Энантат и Туринабол. Данное сочетание стероидов позволит. Приветствую всех. Хочется оставить свой отзыв по курсу Турик + Тестостерона Энантат. Вопервых, заказываю в этом магазине неоднократно. Общие вопросы escort, совет по курсу тестостерон Э + Туринабол. доброго времени суток уважаемые Господа. неделю назад начал курсить, это мой первый курс. в наличии имею 160 таблеток туринабол и 5 ампул(250мг). Туринабол (производная тестостерона, 17а, не ароматизируется) по структуре. По отзывам в личных сообщениях я давно провёл свою статистику по препаратам. Для набора качественной сухой массы подойдет курс Туринабол и Тестостерон. Курс Туринабол и Тестостерон Энантат. Цена, схема приема, результаты. Характеристика. Данный высокоэффективный и проверенный опытом. В магазине стероидов Mensgen курс Тестостерон пропионат + Туринабол + ПКТ. Схема приема и консультации бесплатно. Скидки. Доставка по РФ. тестостерон пропионат туринабол курс. Всех приветствую!А какой лучше Тестостерон пропионат(МАРШ,Украина,Сингапур или Бритиш)??Заранее блогодарен. By Штангист, 4 Мая 2013. Все хорошие. Характеристики используемых препаратов. Популярным из стероидных гормонов считается Тестостерон Пропионат. Тестостерон предоставляет нам огромный выбор совместимых препаратов, по сути с ним можно использовать. Пропионат 50 мг в день и туринабол 6080 мг в день. Хочется отметить, что курс пропионата соло отлично используется. Re: Первый курс:Туринабол+тестостерон. Powerlifter, Туринабол отличный стероид для силовиков! Метан вещь конечно хорошая, но с него набираешь много воды, что увеличивает собственный вес и риск выйти из весовой категории. Приветствую всех. Хочется оставить свой отзыв по курсу Турик + Тестостерона Энантат. Powerlifter, Туринабол отличный стероид для силовиков! Доброго здравия братки! Начинаю свой курс тест энантат (500 в неделю) болденон (750 в неделю), и туринабол по 36 мг/д, может увеличу до 48, на выход. Туринабол отзывы многих спортсменов. О Туринаболе оставлено множество. Отзыв о приеме Туринабола. С другом занимаемся уже больше года и знакомы с Туринаболом во всех подробностях, так как многие знакомые. Тестостерон энантат – что это? Как правильно составить курс тестостерона. туринабол – 189шт. Первая неделя: энка (вторник – 250мг) + туриновер (по 10мг – утром, в обед и вечером). Вторая неделя: энка (вторник – 250мг).

Безопасные стероиды готовы показать вам короткий путь к мускулистому телу

Большинство профессиональных спортсменов активно использует стероиды для увеличения мышечной массы и придания телу красивого рельефа. Конечно, никто не застрахован от ошибок, и иногда новички отдают предпочтение дешевым аналогам, тем самым рискуя получить не только неутешительный результат, но и проблемы со здоровьем. При этом, стероиды низкого качества работают за счет задержки жидкости в организме, а по окончанию курса, мышцы спортсмена просто «сдуваются». Однако, среди широкого выбора стероидных средств есть те, которые действительно пользуются популярностью у атлетов и бодибилдеров, гарантируя им качественный и долговременный результат. Так, когда физических нагрузок и правильного питания недостаточно для достижения поставленной цели, в игру вступает Туринабол. 

К сожалению, сегодня, учитывая современные законы и недобросовестность некоторых магазинов, купить хорошие стероиды проблематично. Поэтому, чтобы использовать для достижения своих желаний качественный препарат, таблетки Туринабол можно купить на этом сайте: https://mutagen.com.ua/tabletirovannye/turinabol.

Выпускается данный препарат в виде таблеток. Его отличает от аналогов отсутствие задержки жидкости в организме и накопление жировой массы во время приема. То есть, результат от приема курса Туринабола более чем отличный, учитывая, что за счет его тело становиться рельефным, упругим и сохраняет свой внешний вид и после приема. Самое приятное, что у Туринабола нет побочных эффектов, и соблюдая заявленную производителем дозировку курс пройдет без каких-либо негативных последствий. Способ приема достаточно простой для всех спортсменов, понимающих правила, вне зависимости от опыта тренировок. Если отталкиваться от классической схемы приема Туринабола, то дозировку необходимо постепенно увеличивать. Начиная с двух таблеток в день, до седьмого дня приема можно прийти к пяти таблеткам в сутки, и это будет оптимальной дозой. 

Станозолол – это тоже работает

Также вас может заинтересовать станозолол. Его приобрести можно по этой ссылке: https://mutagen.com.ua/tabletirovannye/stanozolol/strombafort-strombafort. Как и Туринабол, он хорошо зарекомендовал себя на рынке стероидов и пользуется спросом среди спортсменов. Препарат отличается от всех существующих инъекционных стероидов тем, что создан на основе масляных растворов эфиров, то бишь инъекционный станозолол – водная суспензия. Как и во всех случаях, естественно, никаких резких дозировок проводить не нужно, и следует увеличивать количество инъекций постепенно и размеренно. Отзывы о нем достаточно положительные. Как отмечают спортсмены, курс из вышеупомянутых препаратов сам по себе эффективен, но для более качественного результата стоит принимать и активные жиросжигатели. В таком случае, результатами остаются довольны не только новички, но и профессиональные спортсмены, которые явно видят результаты всего курса.

Туринабол + Тестостерон Энантат + Анасторозол + Гонадотропин + Тамоксифен

Оплата

Оплатить товары можно несколькими способами:

• Через интернет-банк
• Прямой перевод на QIWI кошелёк
• Наличными через терминал
• Наличными курьеру, при получении товара
• Наличными продавцу, при самовывозе

Доставка

Доставка по Алматы от 500тг. При заказе на сумму 30000тг. доставка по Алматы — бесплатная.

Сроки доставки по Алматы: 1-2 дня.

---

Доставка курьерской службой по Казахстану в города:

Астана, Караганда, Актау, Актобе, Атырау, Балхаш, Жанаозен, Жезказган, Зыряновск а., Капчагай, Кокшетау, Костанай, Кызылорда, Петропавловск, Риддер, Сатпаев, Семей, Степногорск, Талдыкорган, Тараз, Темиртау, Туркестан, Уральск, Усть-Каменогорск, Шымкент, Павлодар

Способ доставки	Стоимость	Сроки доставки
транспортная компания «cdek» (до двери)	1200тг.	2-4 дня
транспортная компания «казпочта» (до двери)	1500тг.	2-4 дня

---

Стоимость доставки в небольшие города, села и поселки, находящиеся на значительном расстоянии, составляет в среднем 2000тг. Сроки доставки 3-7 дней.

---

Как происходит покупка?

После оформления заказа, менеджер присылает QIWI кошелек.

По факту поступления соответствующей суммы на указанный кошелёк QIWI, менеджер обрабатывает ваш заказ.

Затем ваш заказ отправляется службой доставки по указаному в заказе адресу.

Наш менеджер оповестит Вас об отправке заказа и вышлет трек-номер почтового отправления.

Спасибо, что выбрали наш магазин!

Еще одно из классических сочетаний препаратов для набора массы. Комбинированный прием тестостерона и туринабола позволяет увеличить мускулатуру высокого качества. Курс предназначен для опытных спортсменов и спортсменов среднего уровня. Кроме набора мускулатуры увеличивает силовые показатели.

Препараты, входящие в курс:

1. Turanabol – 100 табл., Balkan Pharmaceuticals
2. Testosterone E – 20 ампул, Balkan Pharmaceuticals
3. Anastrozol – 20 табл., Balkan Pharmaceuticals
4. Tamoximed – 20 табл., Balkan Pharmaceuticals
5. Гонадотропин – 5 ампул. Препарат приобретается отдельно, в стоимость курса не входит.

Описание компонентов:

Turanabol (Туринабол) — анаболический стероид, производное от метандростенолона, создан специально для спортсменов. При приёме данного препарата вы не только можете увеличить массу мышц, но и улучшить физические характеристики Образование рельефности проявляется медленно, но качественно. Не подвергается ароматизации. Поэтому такие нежелательные эффекты как гинекомастия, задержка воды и т. д. в большинстве случаев не проявляются. Возможно использование препарата соло женщинами.

Testosterone Е (Тестостерон энантат) — основной гормон человека с присоединенным сложным эфиром, обладающим длительным периодом действия. Без этого вещества не обходится, практически, ни один массанаборный цикл. Он ускоряет процессы гиперплазии, и провоцирует прирост мышечной массы, а также значительно увеличивает силовые показатели.

Anastrozol (Анастрозол) — ингибитор ароматазы, предупредит развитие побочных эффектов, которые вызывает повышенное содержание эстрогенов. Для того чтобы определить точную дозировку препарата необходимо сдать кровь на Эстрадиол спустя 6-8 дней после первой инъекции Тестостерона.

Если в состав цикла входят несколько сильных препаратов, то в курс также необходимо включить прием Гонадотропина. Это необходимо, для того чтобы не допустить атрофию тестикул. Так как на любом курсе стероидов половые гормоны находятся в угнетении. Препарат поможет не только избежать атрофии, но и восстановить функционирование тестикул.

Следующий препарат необходимо использовать в качестве после курсовой терапии.

Tamoximed (Тамоксифен) — эффективный антиэстроген, помогает организму начать восстановление собственного тестостерона. Помогает спортсменам быстро восстановиться после курса ААС.

Схема применения препаратов:

Неделя	Turanabol	Testosterone Е	Anastrozo	Гонадотропин	Tamoximed
1	30 мг/день	500 мг/неделя	—	—	—
2	30 мг/день	500 мг/неделя	—	—	—
3	30 мг/день	500 мг/неделя	0,5 мг через день	—	—
4	30 мг/день	500 мг/неделя	0,5 мг через день	—	—
5	—	500 мг/неделя	0,5 мг через день	—	—
6	—	500 мг/неделя	0,5 мг через день	—	—
7	—	500 мг/неделя	0,5 мг через день	500 мг 2 раза в неделю	—
8	—	500 мг/неделя	0,5 мг через день	500 мг 2 раза в неделю	—
9	—	500 мг/неделя	0,5 мг через день	500 мг 2 раза в неделю	—
10	—	500 мг/неделя	0,5 мг через день	500 мг 2 раза в неделю	—
11	—	—	0,5 мг через день	500 мг 2 раза в неделю	—
12	—	—	—	—	—
13	—	—	—	—	20 мг/день
14	—	—	—	—	20 мг/день
15	—	—	—	—	10 мг/день

Анаболические препараты являются сильнодействующими веществами.

Данные в таблице могут быть усредненными. Уточняйте информацию по дозированию препарата у специалистов.

Режим питания и тренировок на курсе:

Большего результата от курса можно добиться, если правильно питаться и тренироваться. Составляя рацион, акцентируйте внимание на продуктах, в которых много белков и углеводов. Отдавайте предпочтения сложным углеводам. Тренировки необходимо проводить 3-4 раза в неделю, разбив на группы мышцы и прорабатывать каждую группу отдельно.

Основные характеристики
Готовые схемы	Длительные курсы на массу

туринабол и сжигание жира

туринабол и сжигание жира

туринабол и сжигание жира

>>>ПЕРЕЙТИ НА ОФИЦИАЛЬНЫЙ САЙТ >>>

Что такое туринабол и сжигание жира?

Данный комплекс для похудения представляет собой средство, помогающее быстро похудеть, без вреда для организма и особых усилий. Исключительно натуральный состав обладает широким спектром действия, позволяя запустить процесс похудения и восстанавливая естественную работу всего организма: Очищает организм от зашлакованности, выводит свободные радикалы, соли тяжелых металлов и токсины за счет способности разбухать, попадая в желудок и действовать как сорбент; Восстанавливает функциональность желчного пузыря и желчевыводящих путей, стимулируя отток желчи; Нормализует уровень сахара в крови, а также препятствует образованию вредного холестерина; Улучшает работу выделительной системы, в частности почек; Восстанавливает микрофлору кишечника, приводя в норму процессы пищеварения и перистальтики кишечника. Согласно научным исследованиям пища богатая на клетчатку позволяет очистить организм естественным образом, действую как щетка и помочь наладить процесс расщепления жиров.

Эффект от применения туринабол и сжигание жира

Хотелось снизить свой вес без вреда для здоровья, но и честно скажу, не особо напрягаясь. Поэтому в интернете почитала об активаторе сжигания жира. Решила попробовать и действовала по инструкции, как я поняла он не дает жирам откладываться, а выводит их из организма. А еще я заметила, что мой организм стал работать как часы и в итоге за месяц я похудела на 9 кг.

Мнение специалиста

Активатор сжигания жира – представляет собой усовершенствованный комплекс на основе природных компонентов, в частности клетчатке, способной очищать внутреннюю поверхность пищеварительного тракта и кишечника от вредных веществ, накапливающихся долгие годы. После избавления от токсинов, организм как-бы перезапускается и начинает работать с новой силой, расходуя массу энергии, извлекаемой из жиров, отложенных в подкожных слоях. Эффективность препарата обусловлена расщеплением висцерального жира, в том числе, обволакивающего брюшную полость. Таким образом, худеют только проблемные зоны – живот, бедра, ягодицы, а мышечная масса остается без изменений. Я рекомендую принимать коктейль людям страдающим ожирением на любой стадии, так как с его помощью можно легко избавиться от лишнего веса, и нормализовать работу всего организма. Результат закрепляется на длительный период, так как организм привыкает извлекать энергию из жиров, а ускоренный метаболизм не позволяет поступающим калориям надолго задерживаться в теле.

Как заказать

Для того чтобы оформить заказ туринабол и сжигание жира необходимо оставить свои контактные данные на сайте. В течение 15 минут оператор свяжется с вами. Уточнит у вас все детали и мы отправим ваш заказ. Через 3-10 дней вы получите посылку и оплатите её при получении.

Отзывы покупателей:

Катя

АСЖ-35 мне советовал диетолог. Сказала, что сейчас это самое безопасное средство и эффект от него хороший. Принимаю уже третью неделю, результат минус 8 кило (изначальный вес был 74 кг). Для меня это хороший результат, так как до этого мне ничего не помогало сдвинуть вес с мертвой точки. Надеюсь похудеть до заветных 52 кг)) Да, кстати, в аптеках этот активатор можете даже не искать, я весь город оббегала — нигде не слышали даже про такое средство. Здесь на сайте заказываю.

Анна

Полезный комплекс для сжигания жира АСЖ 35 состоит из: вытяжки из семян льна – очищает пищеварительную систему, обволакивает слизистую ЖКТ; клетчатки – пищевые волокна насыщают организм, утоляют голод, нормализуют микрофлору кишечника; аминокислот, протеинов, пектинов – регулируют обмен веществ, ускоряют регенеративные процессы в клетках, способствуют усвоению полезных веществ с пищи; витаминов групп В, С, Е – восполняют запас важных микроэлементов, повышают защитные силы организма; полиненасыщенных жирных кислот (Омега-3, Омега-6) – нормализуют кровообращение, работу сердца, снижают уровень холестерина.

Революционное похудение без физических нагрузок стало реальностью благодаря средству АСЖ-35. Оно очищает внутренности организма от шлаков и позволяет употреблять любые блюда без опаски за прибавку в весе. Уникальный напиток улучшает пищеварение и работу кишечника, сжигает адипоциты и настраивает организм на контроль массы тела. Инновационная программа дает современным людям возможность корректировать фигуру любого типа: «Груша» (небольшая грудь при узких плечах и широких бедрах) – нормализуется метаболизм, лишние килограммы уходят с нижней части тела, целлюлит становится малозаметным. «Яблоко» (жиры скапливаются в области талии) – живот становится подтянутым, фигура – стройной, кожа – свободной от «апельсиновой корочки». Результат похудения сохраняется навсегда. «Песочные часы» (тело пропорционально набирает вес в верхней и нижней частях) – препарат воздействует на подкожный жир, производит эффект лифтинга, сгоняет равномерно вес. Где купить туринабол и сжигание жира? Активатор сжигания жира – представляет собой усовершенствованный комплекс на основе природных компонентов, в частности клетчатке, способной очищать внутреннюю поверхность пищеварительного тракта и кишечника от вредных веществ, накапливающихся долгие годы. После избавления от токсинов, организм как-бы перезапускается и начинает работать с новой силой, расходуя массу энергии, извлекаемой из жиров, отложенных в подкожных слоях. Эффективность препарата обусловлена расщеплением висцерального жира, в том числе, обволакивающего брюшную полость. Таким образом, худеют только проблемные зоны – живот, бедра, ягодицы, а мышечная масса остается без изменений. Я рекомендую принимать коктейль людям страдающим ожирением на любой стадии, так как с его помощью можно легко избавиться от лишнего веса, и нормализовать работу всего организма. Результат закрепляется на длительный период, так как организм привыкает извлекать энергию из жиров, а ускоренный метаболизм не позволяет поступающим калориям надолго задерживаться в теле.
Положительные эффекты туринабола. Туринабол обладает высокой анаболической активностью и низкой андрогенной. Несомненно, положительных эффектов туринабол дает гораздо больше, чем побочных. Но все же они могут возникнуть. К положительным эффектам от приема туринабола можно отнести: 1). Процесс сжигания жира не является стремительным, но многие его замечают, а так же отмечают хорошую . Что сильнее, или мощнее Туринабол или Станозолол очевидно даже для новичка, но только от вас зависит выбор нужного стероида. Если это первый ваш курс, тогда купите Станозолол и получите не. Туринабол – мясонаборный препарат для наращивания красивых форм за короткий промежуток времени, без побочных эффектов . В курсе препарат используется для более продолжительного воздействия Кленбутерола на сжигание жиров. Т.к. Кленбутерол эффективно воздействует на организм, как жиросжигатель. Туринабол награждает спортсмена своими эффектами: силой, скоростью, выносливостью, сухим мясом – без побочных эффектов. Turinabol– это популярнейший препарат среди легкоатлетов, бегунов, пловцов, теннисистов. На сегодняшний день туринабол является ак. 6. Как и все таблетированные препараты, туринабол токсичен для печени. Токсичность эта аналогична метану. Как правило, люди, которые не испытывают проблем с печенью, не имеют их и при приёме туринабола. Область применения. Из свойств и особенностей этого анаболического стероида логично. «Туринабол Орал» — сравнительно безопасный препарат, однако и он может нанести непоправимый удар состоянию здоровья . Как действует «Туринабол»? Являясь относительно безвредным и мягким стероидом в таблетированной форме, он при регулярном употреблении является достаточно эффективным для. На цикле туринабол и кленбутерол можно принимать совместно и раздельно. Оральный Туринабол пьют в . Кленбутерол — не стероид, а больше после курсовой препарат, который помогает улучшить рельеф методом сжигания жира. Еще он хороший анти катаболик, который блокирует повышение кортизола после. Туринабола: Побочные эффекты и Руководство пользователя для экстремальных тощей массы Прибыли. Использование Turinabol приносит умеренную природу мышечной массы, но хорошего качества, без жира и воды. Орал Туринабол – стероид анаболического типа, по структуре и свойствам схожий с метандростенолоном. . Анаболический препарат туринабол считается одним из самых эффективных среди ему подобных. Даже за короткий курс приема он позволяет набрать мышечную массу, максимально снизив при этом количество. Туринабол — является лидером нашего обзора. Топ продаж среди таблетированных препаратов. . Ключевым фактором, без которого невозможно сжигание жира является диета, на втором месте — правильные тренировки и отдых. Туринабол, по сути, выполнял функции препарата, поддерживающего силовые. В подарке от дилера помимо моего заказа пришел стромбофорт – тот же станозолол, только в дозировке 5мг в таблетке, а не 10мг. План курса Туринабол (также известен под названиями: туранабол, turamoth, turanabol, турик, turinabolos, туриновер, орал туринабол, Oral Tbol) – это оральное анаболическое и андрогенное средство (ААС) на основе хлордегидрометилтестостерона (4-chlorodehydromethyltestosterone). Фармакологическая активность и. Станозолол или Винстрол является препаратом для сжигания липидных запасов и создания рельефа тела. Приём обеспечивает наращивание мышечной массы без задержки воды в организме, поэтому станозолол часто используют на сушку. Количество содержащегося тестостерона в препарате является. Туринабол (также известен под названиями: туранабол, turamoth, turanabol, турик, turinabolos, туриновер, орал туринабол, Oral Tbol) – это оральное анаболическое и андрогенное средство (ААС) на основе хлордегидрометилтестостерона (4-chlorodehydromethyltestosterone). Фармакологическая активность и.
http://piotrdolny.pl/files/upload/protein_dlia_szhiganiia_zhira_u_zhenshchin8773.xml
http://budohurtsa.pl/userfiles/dieta_dlia_szhiganiia_zhira_na_zhivote8734.xml

http://pnp-studio.com/fckeditorfiles/silnye_slabitelnye_sredstva_bystrogo_deistviia_dlia_pokhudeniia3597.xml
http://aturtle.ru/upload/knigi_allen_karr_legkii_sposob_pokhudet9001.xml
Хотелось снизить свой вес без вреда для здоровья, но и честно скажу, не особо напрягаясь. Поэтому в интернете почитала об активаторе сжигания жира. Решила попробовать и действовала по инструкции, как я поняла он не дает жирам откладываться, а выводит их из организма. А еще я заметила, что мой организм стал работать как часы и в итоге за месяц я похудела на 9 кг.
туринабол и сжигание жира
Данный комплекс для похудения представляет собой средство, помогающее быстро похудеть, без вреда для организма и особых усилий. Исключительно натуральный состав обладает широким спектром действия, позволяя запустить процесс похудения и восстанавливая естественную работу всего организма: Очищает организм от зашлакованности, выводит свободные радикалы, соли тяжелых металлов и токсины за счет способности разбухать, попадая в желудок и действовать как сорбент; Восстанавливает функциональность желчного пузыря и желчевыводящих путей, стимулируя отток желчи; Нормализует уровень сахара в крови, а также препятствует образованию вредного холестерина; Улучшает работу выделительной системы, в частности почек; Восстанавливает микрофлору кишечника, приводя в норму процессы пищеварения и перистальтики кишечника. Согласно научным исследованиям пища богатая на клетчатку позволяет очистить организм естественным образом, действую как щетка и помочь наладить процесс расщепления жиров.
Как запустить процесс жиросжигания, сохранив мышцы? 7 проверенных must-know принципов в питании, тренировках и восстановлении. . Если процесс сжигания жира является для тебе обременением, не приносящим удовольствие, можешь забыть о поставленной цели. Не нравится тренажерка – тренируйся. Кардио для сжигания жира. Как научить организм быстрее жечь жир? Как понять, что вы согнали именно жир, а не мышцы или воду? Чтобы запустить жиросжигание, надо, фактически, перехитрить свой организм. Потому что он-то будет беречь свои отложения до последнего, жертвуя водой, мускулатурой и вашим. Что такое сжигание жира. Под жиросжиганием подразумевается часть сложнейшего процесса в . Сжечь жир на животе и боках быстро и результативно можно при помощи . Как запустить процесс жиросжигания. Быстрее всего сжигается жир в организме при совмещении правильного и сбалансированного питания с. Гормоны играют огромную роль в том, что касается сжигания жира, и регулирование гормонального фона будет иметь решающее значение в этом процессе Инсулин Каждый раз, когда мы едим, наш организм вырабатывает инсулин. Сжигание жира: основные правила. 27 Августа, 2018. Диеты. Валерия Дашкевич. Как запустить процесс жиросжигания в организме? . Как происходит процесс жиросжигания в организме? По-другому дела обстоят с внутренним жиром, который не реагирует на уровень инсулина и поддается расщеплению. Поэтому висцеральный жир сжигать проще. Правда, есть одно, но: расщепляясь на жирные кислоты, внутренний жир пополняет запасы… подкожного жира! Итак, что же делать, чтобы максимально запустить процесс жиросжигания? Процесс накопления жиров в жировую ткань называется липогенез. Происходит этот процесс в первую очередь из-за . Как запустить жиросжигание. Для того чтобы организм запустил процесс жиросжигания, ему нужна стрессовая ситуация. Такая как недостаток калорий. Допустим, что для нормальной. Рассказываем, что быстро сжигает жир — как происходит процесс похудения и жиросжигания в организме, физиология, как сжигаются липиды во время тренировки и на. . Как ускорить сжигание жиров в организме. Что бы ускорить процесс сжигания жира в организме необходимо поддерживать водный баланс. Для этого необходимо выпивать 1,5-2 литра воды в сутки. Вода нормализует работу желудочно-кишечного тракта, ускоряет процесс обмена веществ, повышая скорость метаболизма на 30%. Белок. Для того что.

Узнаем как принимать Станозолол в таблетках. Курс лечения препаратом Станозолол

Как принимать «Станозолол»? Ответ на поставленный вопрос вы найдете в материалах данной статьи. Кроме того, мы расскажем вам о том, что представляет собой этот препарат, для чего он используется и как воздействует на организм человека.

Общая информация

Препарат «Станозолол» (таблетки) представляет собой анаболический синтетический стероид, который используется атлетами с целью придания мышцам рельефности и увеличения силовых показателей. Данное средство является производным дигидротестостерона.

Выпускается такой препарат официально и активно применяется в боксе, бодибилдинге, боях без правил, тяжелой и легкой атлетике, а также во многих других видах спорта.

Фармакологическое действие

Перед тем как принимать «Станозолол», следует обязательно ознакомиться с его принципом действия. Проникая в ткани, представленное средство активизирует генетический аппарат клеток, что в дальнейшем приводит к увеличению синтеза РНК и ДНК, а также структурных белков. Кроме того, данный препарат усиливает окислительное фосфорилирование, тканевое дыхание, синтез АТФ, повышает активность ферментов и увеличивает накопление макроэргов.

Следует также отметить, что «Станозолол» способен стимулировать выработку кальция, а также подавлять катаболические процессы, которые были вызваны глюкокортикоидами.

Помимо всего прочего, такое средство способствует отложению кальция в костях, заметно улучшает трофику тканей, задерживает в организме серу, фосфор и азот. Гемопоэтические свойства данного препарата связаны с увеличением синтеза эритропоэтина. Что касается противоаллергического эффекта, то он обусловлен повышением концентрации C1 фракции комплемента. Нельзя оставить без внимания и тот факт, что андрогенная активность этого средства способствует развитию вторичных мужских половых признаков.

Показания к применению

Помимо того что данный препарат активно применяется спортсменами для сжигания лишних жировых отложений, усиления аппетита и формирования более четкой рельефности мышечной массы, его довольно часто используют в комплексной терапии таких отклонений, как:

• ожоги, травмы, после- и дооперационные периоды;
• для восстановления после облучения и инфекционных болезней;
• в случае нарушении синтеза белков;
• при токсическом зобе, мышечной дистрофии, остеопорозе, отрицательном азотистом балансе при кортикостероидной терапии, а также при гипо- и апластической анемии.

Противопоказания к применению

Как принимать «Станозолол» в таблетках, знает практически каждый атлет. Однако далеко не все владеют информацией о том, что такой препарат имеет довольно большое количество противопоказаний.

Итак, перед тем как принимать «Станозолол», следует обязательно ознакомиться с его инструкцией, где четко указано, что такое средство не рекомендуется использовать при:

• раке предстательной железы, раке молочной железы у представителей сильного пола и карциноме молочной железы у женщин;
• повышенной чувствительности к основным веществам средства;
• почечной и печеночной недостаточности;
• ишемической болезни сердца и атеросклерозе;
• остром и хроническом простатите;
• во время лактации и беременности;
• в детском возрасте.

Формы выпуска

Данный препарат выпускается в двух формах: в виде таблеток и инъекционных растворов. Однако особой разницы, кроме способа применения, между ними нет, так как растворы основаны на водной суспензии. Следует отметить, что это является еще одним положительным свойством данного средства. Ведь если спортсмен устанет от уколов, то в любой момент он может заменить их таблетками.

Как принимать «Станозолол»?

По нескольким причинам в бодибилдинге спортсмены отдают предпочтение именно инъекционной форме представленного препарата. Во-первых, это связывают с тем, что оральное средство намного дороже уколов. А, во-вторых, было выявлено, что чаще всего подделывают именно таблетки.

Как принимать средство «Станозолол» соло? Первый курс этого орального препарата предусматривает использование 10-50 мг средства в день. Однако представленная дозировка относится только к мужчинам. Что касается инъекций, то специалисты рекомендуют производить уколы через день в объеме 50-100 мг. Курс приема в таблетках длится примерно 30-42 дня. Такой короткий период объясняется тем, что препарат является чересчур токсичным для печени.

Следует отметить, что данное средство популярно не только среди представителей сильного пола, но и среди женщин. Как им необходимо принимать медикамент «Станозолол» соло? Первый курс этого препарата включает в себя дозировку, равную 5-10 мг в сутки (орально). Что касается инъекционной формы, то она обычно не применяется у представительниц слабого пола во избежание побочных явлений.

Перед тем как использовать представленное средство, многие спортсмены интересуются и тем, как принимать «Станозолол» в таблетках: до еды или после? Ведь во многих случаях такой нюанс имеет огромное значение. Согласно инструкции данный препарат желательно принимать во время еды, запивая большим количеством воды. Более того, если атлетом используется максимальная дозировка, то ее желательно разделить на два приема (утром и вечером).

Комплексный прием

Такой синтетический анаболический стероид чаще всего принимают соло. Но нередко его используют и вместе с другими препаратам. К примеру, довольно популярно такое сочетание, как средства «Станозолол» + «Кленбутерол». Как принимать их в этом случае? Используются они по отдельности. Дозировка средства «Станозолол» представлена выше. Что касается препарата «Кленбутерол», то его следует принимать по 10-20 мкг дважды в день.

Плюсы комплексного применения

Следует особо отметить, что представленное сочетание препаратов идеально подходит для набора сухой мышечной массы без задержки жидкости в теле. Более того, данные средства дают чистый прирост мускулатуры с явно выраженным проявлением рельефности.

Если такие препараты используются параллельно в течение 5-ти недель, это дает мышечным тканям невероятную плотность. После пройденного курса мускулатура спортсмена будет иметь постоянно напряженный вид с красивым рельефом. Следует также отметить, что после окончания приема препаратов атлет сможет сохранить свои результаты на очень долгий срок.

Курс «Туринабол» + «Станозолол»

Такое восьминедельное совмещение препаратов позволяет набрать сухую мышечную массу в количестве 3-4 килограммов. В течение первых 56 дней курса «Туринабол» и «Станозолол» следует принимать в равных количествах. При этом всю дневную дозировку рекомендуется разделить на 3 или 4 приема. Такой способ использования связан с тем, что у представленных средств довольно маленький период полураспада.

Чтобы у спортсменов не было резкого обвала мышечной массы после восьминедельного приема препаратов, специалисты рекомендуют подключить и медикамент «Кленбутерол». Это средство желательно принимать потому, что оно обладает очень сильным антикатаболическим эффектом и не является гормональным. Более того, препарат «Кленбутерол» способен оказать легкий жиросжигающий эффект, что тоже немаловажно для спортсменов. Ввиду того что у данного препарата такой же период полураспада, как и у медикаментов «Туринабол» и «Станозолол», его дневную дозу также рекомендуется разделить на 2 или 3 приема.

Как быстро сделать свои мышцы рельефными?

Чтобы обрести красивое и рельефное тело, можно использовать любой анаболический курс. «Станозолол» + «Тестостерон Пропионат» — это самое эффективное сочетание для быстрого набора мышечной массы и ее сушки. Такой курс особенно подходит для бодибилдеров. Как правило, он используется и новичками, и теми, кто тренируется уже достаточно длительное время.

Средство «Тестостерон» представляет собой аналог мужского полового гормона. В связи с этим он действует на организм более естественно и мягко. Но если использовать его без препарата «Станозолол», то эффекта вам придется ждать довольно долго. Кроме того, такое средство имеет способность трансформироваться в эстрогены, а также задерживать жидкость в организме. Что касается препарата «Станозолол», то это стероид, который обладает достаточно мощным, но при этом мягким эффектом. Специалисты относят его к средствам кратковременного и быстрого действия. Следует особо отметить, что он помогает значительно усилить эффект от тех препаратов, которые используются вместе с ним.

Побочные явления

Теперь вам известно, что представляет собой препарат «Станозолол». Этот анаболический стероид можно принимать и в комплексе, и соло. Однако следует отметить, что все его формы (инъекционные растворы и таблетки) гепатотоксичны. Они оказывают негативное влияние на простату. Кроме того, такие средства способствуют появлению угревой сыпи.

Помимо всего прочего, препарат «Станозолол» незначительно подавляет выработку эндогенного тестостерона и редко приводит к возникновению гинекомастии. У представительниц прекрасного пола он может легко вызвать выраженную вирилизацию. Также средство «Станозолол» значительно повышает артериальное давление. Согласно инструкции препарат нередко вызывал у женщин нарушение менструального цикла, угнетение функции яичников, а также гиперкальциемию. Что касается мужчин, то у них очень часто проявлялись признаки вирилизации, наблюдалась идиопатическая гиперпигментация кожи, замедлялся или вовсе прекращался рост трубчатых костей. Кроме того, после применения препарата представители сильного пола могли наблюдать у себя раздражение мочевого пузыря, приапизм, гипертрофию и карциному предстательной железы.

Другие побочные эффекты

Согласно отзывам специалистов, препарат «Станозолол» может вызвать прогрессивный атеросклероз, периферическую отечность, диспепсические расстройства, изменения в лейкоцитарной формуле, нарушения в функциях печени с проявлением желтухи, боли в костях и пр.

Прием станозолола в сочетании с упражнениями приводит к снижению активности теломеразы, возможно, связанному со старением печени

Int J Mol Med. 2018 июл; 42 (1): 405–413.

, ^{# 1, *} , ^{# 1, *} , ² , ³ , ³ , ⁴ , ³ , ^{3 9000} , ³ и ¹

Эрен Озкагли

¹ Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и

Мехтап Кара

¹ Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета

Тугба Котиль

² Кафедра гистологии и эмбриологии медицинского факультета Стамбульского университета, Стамбул 34116, Турция

Персефони Фрагкиадаки

³ Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Манолис Н.Цацаракис

³ Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Кристина Цицимпику

⁴ Государственная химическая лаборатория Греции, 11521 Афины

Polychronis D. Stivaktakis

³ Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Димитриос Цукалас

³ Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Деметриос А.Spandidos

⁵ Лаборатория клинической вирусологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион, Греция

Аристидес М. Цацакис

³ Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Букет Альпертунга

¹ Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и

¹ Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и

² Кафедра гистологии и эмбриологии медицинского факультета Стамбульского университета, Стамбул 34116, Турция

³ Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

⁴ Государственная химическая лаборатория Греции, 11521 Афины

⁵ Лаборатория клинической вирусологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион, Греция

^# Внесено поровну.

Для корреспонденции: профессору Букету Альпертунга, кафедра фармацевтической токсикологии, фармацевтический факультет, Стамбульский университет, Беязит, Стамбул 34116, Турция, электронная почта: rt.ude.lubnatsi@agnutПрофессору Аристидесу М. Цацакису, Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинская школа, Университет Крита, ПО Box 1393, 71003 Heraklion, Greece, E-mail: [email protected]

^* Внесено поровну

Получено 28 февраля 2018 г .; Принято 11 апреля 2018 г.

Эта статья цитировалась в других статьях в PMC.

Заявление о доступности данных

Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по разумному запросу.

Реферат

Анаболические вещества — это допинговые вещества, которые обычно используются в спорте. Станозолол, 17α-алкилированное производное тестостерона, широко используется спортсменами и бодибилдерами. Некоторые медицинские и поведенческие побочные эффекты связаны со злоупотреблением анаболическими андрогенными стероидами (ААС), в то время как печень остается наиболее узнаваемым органом-мишенью.В настоящем исследовании изучалось влияние на печень введения станозолола крысам в высоких дозах, напоминающих дозы, применяемые для допинга, в присутствии или отсутствии упражнений. Станозолол и его метаболиты, 16-β-гидроксистанозолол и 3′-гидроксистанозолол, были обнаружены в печени крыс с помощью жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС). Активность теломеразы, которая участвует в клеточном старении и онкогенезе, была обнаружена путем исследования уровней экспрессии обратной транскриптазы теломеразы (TERT) и фосфатазы и гомолога тензина (PTEN) в печени крыс, получавших станозолол.Станозолол индуцировал теломеразную активность на молекулярном уровне в ткани печени крыс, и упражнения обращали эту индукцию, отражая возможное преждевременное старение ткани печени. На экспрессию гена PTEN в печени крыс практически не влияли ни упражнения, ни прием станозолола.

Ключевые слова: станозолол, гомолог фосфатазы и тензина, теломеразная обратная транскриптаза, теломеразная активность, 16-β-гидроксистанозолол, 3′-гидроксистанозолол

Введение

Станозолол является стероидом, повышающим эффективность (AAS, андрогенным).Среди всех ААС станозолол является одним из наиболее часто используемых стероидов профессиональными спортсменами и молодыми людьми для улучшения внешнего вида и работоспособности. Станозолол представляет собой 17α-алкилированное производное тестостерона с анаболическими и высокими андрогенными свойствами (1,2), и его использование в спорте запрещено Всемирным антидопинговым агентством (WADA) (3).

В прошлом ААС использовались только элитными спортсменами и бодибилдерами для целей допинга. Однако в настоящее время даже молодые люди злоупотребляют ААС в супрафизиологических дозах для улучшения внешнего вида (4,5).Сообщается, что станозолол является одним из наиболее часто используемых ААС (6), и он отвечает за несколько медицинских и поведенческих побочных эффектов, являясь признанным фактором риска заболеваний печени как у экспериментальных животных, так и у людей (7-13). . Станозолол широко биотрансформируется ферментативными путями в печени. Сообщалось, что основными метаболитами станозолола являются 3′-гидроксистанозолол, 4-β-гидроксистанозолол и 16-β-гидроксистанозолол (14,15). В общем, ААС проявляют свои эффекты посредством нескольких различных механизмов, таких как модуляция экспрессии рецепторов андрогенов (16).Неблагоприятные эффекты, связанные с печенью, чаще связаны с 17α-алкильными производными ААС и, как сообщается, не связаны с путем введения. Однако точные механизмы еще полностью не изучены (17).

Теломеры представляют собой гетерохроматиновые нуклеопротеидные комплексы на концах хромосом, участвующие в ряде основных биологических функций (). Известно, что теломеры играют ключевую роль в формировании и прогрессировании до 90% злокачественных новообразований. Теломеразная активность играет ключевую роль в клеточном старении и онкогенезе (18).Повышенная активность теломеразы обнаруживается в большинстве случаев рака человека (19). Теломераза — это рибонуклеопротеин, отвечающий за поддержание длины теломер. Ядро теломеразы состоит из двух компонентов: каталитической обратной транскриптазы теломеразы (TERT) и компонента теломеразной РНК (TERC) ().

Теломеры — это защитные колпачки хромосом (59) (адаптировано с разрешения Shutterstock).

Теломераза добавляет теломерные повторы (TTAGGG) к 3′-гидроксильному концу ведущей цепи теломеры.Компонент РНК служит шаблоном для добавления нуклеотидов. Это комплекс теломеразы, который состоит из компонента обратной транскриптазы (TERT), компонента РНК (TERC), белка дискерина и других связанных белков (NHP2, NOP10 и GAR1).

Уровень экспрессии мРНК TERT был изучен как биомаркер, поскольку было показано, что он является лимитирующим детерминантом активности теломеразы при различных злокачественных новообразованиях (20). Ген фосфатазы и белка-гомолога тензина (PTEN) кодирует белок-супрессор опухоли с фосфатазной активностью.Сообщается, что частота гетерозиготности PTEN при гепатоцеллюлярной карциноме человека (ГЦК) человека снижается до 33% (21). PTEN участвует в подавлении активности теломеразы посредством регуляции активности TERT (22). PTEN является белком-негативным регулятором сигнального пути фосфоинозитид-3-киназы / AKT механизма регуляции выживания клеток и индуцирует клеточный апоптоз (23). PTEN предотвращает активацию AKT посредством дефосфорилирования фосфатидилинозитол (3,4,5) -трисфосфата (PIP3) до фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфата (PIP2).Подавление PTEN связано с онкогенной активностью в клетке (24).

Целью этого исследования было изучить, по крайней мере, насколько нам известно, роль теломеразы в вызванной станозололом гепатотоксичности путем изучения корреляции между активностью теломеразы и уровнями экспрессии гена PTEN-TERT. Также исследовали биоаккумуляцию станозолола и двух его основных метаболитов (3′-гидроксистанозолол и 16-β-гидроксистанозолол) в ткани печени, а также его связь с активностью теломеразы.

Материалы и методы

Эксперименты на животных

Всего было получено 34 крысы-самца Sprague-Dawley в возрасте 8 недель и размещено в помещениях для лабораторных животных Департамента лабораторных наук о животных Института экспериментальной медицины Стамбульского университета. (Стамбул, Турция) в соответствии с Комитетом по этике экспериментов на животных Стамбульского университета, HADYEK (номер утверждения 2013/100). Крысы были разделены на 5 групп следующим образом: i) контрольная (C) группа; ii) группу обработки пропилена (PG); iii) группу обработки станозололом (ST); iv) группа лечения и упражнений с пропиленом (PGE); и v) группа лечения станозололом и физических упражнений (STE).Животных размещали по 4 животных в одной металлической клетке и содержали в 12-часовом цикле темнота / свет при температуре 20–23 ° C. Количество крыс в экспериментальной группе, уход за крысами, обращение и используемые экспериментальные процедуры соответствовали руководящим принципам HADYEK. Вес крыс при покупке регистрировали и использовали для корректировки дозы (). Гуманными конечными точками, определенными в нашем исследовании, были боль, дистресс, неправильная осанка и судороги в соответствии с Руководящим документом ОЭСР (25). Ни у одного животного не было клинических признаков гуманных конечных точек, которые оправдывали бы их жертвоприношение до окончания эксперимента.Экспериментальный план исследования представлен в.

Таблица I

Вес крыс при покупке.

9018 9018 9018 9018 276 9018 9018 9018 9018 9018 9018 264 9018 9019 9018 9018 9018 9018 9019 9018 4 9018 9018 9018 9018 группа Ster 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018

Количество крыс	Вес крыс при покупке (г)
Контроль
1	259
2	9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018
4	264
5	282
Пропиленгликоль
1	255
2	261
5	272
Пропиленгликоль и упражнение
1	262
2	276
5	278
6	263 901 88
7	260
8	277
Стероидная группа
1	280
2	272
5	277
6	272
7	263
8
275
2	277
3	290
4	263
5	280
8	273

Таблица II

Experi мысленный дизайн исследования.

мл / кг пропиленгликоля в день

Группы	Количество крыс	Подкожные инъекции	Упражнение
Контроль	5	Без инъекций	Без упражнений
Без упражнений
Лечение станозололом	8	5 мг / кг станозолола в день	Без упражнений
Лечение пропиленгликолем и упражнения	8 1	8 1	8 1	кг пропиленгликоля в день	Плавание: 20 мин / день, 5 дней в неделю
Лечение станозололом и упражнения	8	5 мг / кг станозолола в день	Плавание: 20 мин / день, 5 дней / неделя

Плавание было выбрано в качестве модели упражнений (26, 27) и началось за 1 неделю до схемы лечения, чтобы мальчики адаптироваться.Крыс плавали в прямоугольном полиэтиленовом резервуаре (длина 120 см × глубина 50 см × ширина 43 см), наполненном водой при 29 ± 1 ° C. Во время экспериментов в течение 20 минут в день, 5 дней в неделю крыс подвергали плаванию после периода адаптации в течение 1 недели. Животных адаптировали к процессу плаванием в воде в течение 5 минут в течение первых 2 дней, а затем время плавания постепенно увеличивали до 5 минут в день до конечной продолжительности 20 минут на 5 день.

Пропиленгликоль (PG ) (Tekkim, Стамбул, Турция) использовался в качестве носителя для станозолола (Sigma, Schnelldorf, Германия).Известно, что PG является хорошим проводником для экспериментальных исследований in vivo (28,29). Однако сообщалось, что высокие концентрации PG могут вызывать повреждение ДНК в эукариотических клетках и ооцитах мышей (30,31). Подкожное введение было выбрано, а дозы были выбраны в соответствии с предыдущими исследованиями (32–34). Группы, подвергшиеся воздействию, получали однократную дозу PG (1 мл / кг) и ST (5 мл / кг) подкожно в течение 5 дней в неделю.

После 28 дней лечения животным была проведена легкая анестезия с использованием процента 1.9% диэтиловый эфир в анестезиологической камере и эвтаназия путем шейного вывиха, проводимая обученным персоналом. Были собраны образцы ткани печени и разделены на 2 секции. Один срез немедленно замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° C, а другой фиксировали 10% забуференным формалином и залитым парафином для гистохимического анализа.

Жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (ЖХ-МС) анализ

Стандарты станозолола, 3′-гидроксистанозолола и 16-β-гидроксистанозолола в концентрациях 0,0.1, 0,25, 0,5 и 1 частей на миллион были приготовлены из стандартных исходных растворов с концентрацией 20 частей на миллион. Туринабол (LGC, Лидс, Великобритания) использовали в качестве внутреннего стандарта (IS) с целевыми ионами m / z 317,25 и m / z 335,25. Калибровочные кривые были получены путем измерения отношения площадей пиков целевых ионов к IS следующим образом: для станозолола m / z 370,4 , 352,3 и 329,35, для 3′-гидроксистанозолола m / z 386,4 , 345,35, для 16-β- гидроксистанозолол m / z 386,4 , 366,3 и 345,35 для IS туринабол () (ион m / z, используемый для количественной оценки, выделен жирным шрифтом).Образцы печени необработанных животных, которые дали отрицательные результаты (

Таблица III

Параметры анализа ЖХ-МС.

Агент	Rt	m / z target	m / z	m / z	Mw
4α-гидроксистанозолол	9 386.4	345,35
4β-hydroxystanozolol	9,3	386,4	345,35
3-hydroxystanozolol	10,15	386,4	345,35		344,49
16-β-гидроксистанозолол	10,45	386,4	366,3	345,35	344,49
Станозолол	12.95	370,4	352,3	329,35	328,49
Туринабол (IS)	13,9	317,25	335,25		334 каждого животного Примерно по 0,1 механическая гомогенизация на высокой скорости в течение 2 мин с 1,0 мл воды. Гомогенаты сильно встряхивали и затем инкубировали в ультразвуковой бане в течение 10 мин. Затем добавляли 1,5 мл этилацетата и проводили экстракцию аналитов в течение 10 мин.Образцы центрифугировали при 1820 × g в течение 2 мин при 4 ° C. Супернатанты переносили в пустую пробирку и упаривали досуха в атмосфере азота при 30 ° C. После выпаривания добавляли 100– мкл л ацетонитрила и сильно встряхивали. Супернатанты переносили во флаконы, и 10 мкл мкл из них вводили в систему ЖХ-МС для анализа. Система ЖХ-МС состоит из бинарного насоса ЖХ (Shimadzu Prominence, Киото, Япония), вакуумного дегазатора, автоматического пробоотборника и термостата для колонок.В качестве подвижной фазы был выбран градиент 0,1% муравьиной кислоты в воде (растворитель A) и ацетонитриле (растворитель B). Разделение аналитов было достигнуто на колонке для ВЭЖХ Discovery C18 (250 × 4,6 мм, 5 мкм, м), термостатированной при 30 ° C. Масс-спектрометр (LCMS-2010 EV; Shimadzu Prominence) в сочетании с интерфейсом химической ионизации при атмосферном давлении (APCI) и одиночным квадрупольным масс-фильтром использовался в выбранном положительном режиме ионного мониторинга (SIM). Температура интерфейса, CDL и теплового блока составляла 400, 200 и 200 ° C соответственно.Напряжение детектора составляло 1,5 кВ, поток распыляющего газа составлял 2,5 л / мин, а осушающий газ составлял 0,02 МПа. Анализ активности теломеразы Определение активности теломеразы в образцах ткани печени крысы выполняли количественно с использованием набора teloTAGGG telomerase PCR ELISA PLUS (Roche Diagnostic GmbH, Mannheim, Germany). Протокол набора следовал для оценки активности теломеразы, как описано ранее (35,36). Оценка экспрессии гена Выделение РНК проводили из залитых парафином срезов ткани печени крысы с использованием выделения РНК High Pure FFPET (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя.Для синтеза кДНК использовали фиксированное количество РНК из каждого образца. кДНК получали с использованием набора Transcriptor First Strand cDNA Synthesis (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. Уровни экспрессии генов TERT и PTEN анализировали с помощью количественной (в реальном времени) полимеразной цепной реакции (кПЦР) с использованием аппарата Light Cycler 480 (Roche Diagnostic GmbH) с анализом каталога Real Time Ready (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. Последовательности праймеров были следующими: PTEN прямой, 5′-AGAACAAGATGCTCAAAAAGGACAA-3 ‘и обратный, 5′-TGTCAGGGTGAGCACAAGAT-3′; TERT вперед, 5’-GACATGGAGAACAAGCTGTTTGC-3 ‘; и наоборот, 5’-ACAGGGAAGTTCACCACTGTC-3 ‘; и GAPDH прямой, 5’-TTCAACGGCACAGTCAAGG-3 ‘и обратный, 5′-CTCAGCACCAGCATCACC-3’.ПЦР-амплификации выполняли в соответствии с инструкциями производителя в трех экземплярах. Реакционную смесь без матрицы кДНК использовали в качестве отрицательного контроля. Уровни экспрессии (2 -ΔΔCt ) рассчитывали, как описано ранее (37,38). Иммуногистохимический (ИГХ) анализ ИГХ-анализы были выполнены с использованием наборов для определения ультра стрептавидина HRP [BioLegend Sig-32248, набор для определения ультра стрептавидина HRP (Multi-Specation, DAB)] и BioLegend Sig-32250, набор для определения ультра стрептавидина HRP (Multi-views, AEC) (BioLegend, San Diego, CA, USA) для уровней экспрессии PTEN и TERT соответственно.Залитые парафином срезы помещали на предметные стекла Superfrost (Menzel-Gläser, Брауншвейг, Германия). После сушки в течение ночи был проведен ИГХ-анализ PTEN и TERT с использованием метода меченой стрептавидин-биотин-пероксидазы. Предметные стекла обрабатывали ксилолом и регидратировали в растворах этанола возрастающих классов. Извлечение антигена осуществляли путем кипячения предметных стекол в течение 5 мин / 3 раза в цитратном буфере (0,01 М). Для подавления активности эндогенной пероксидазы срезы ткани обрабатывали блокирующим реагентом 1 в течение 15 минут и промывали PBS.Все срезы инкубировали с блокирующим реагентом 2 в течение 5 минут при комнатной температуре, чтобы избежать неспецифического связывания. Инкубации поликлональных антител PTEN (251264) и TERT (250509) (оба от Abbiotec, Aachen, Germany) проводили в течение ночи при 4 ° C с разведениями 1/100. Слайды инкубировали со связывающим реагентом 4, а затем с реагентом для маркировки 5 в течение 20 минут при комнатной температуре. Слайды визуализировали хромогенами DAB и AEC, контрастировали гематоксилином Майера и, наконец, монтировали.Уровни экспрессии PTEN и TERT оценивали под световым микроскопом (Olympus BX40F4; Olympus, Токио, Япония). Анализы TERT и PTEN IHC были классифицированы невооруженным глазом на 4 категории на основе интенсивности окрашивания следующим образом: 0 — нет окрашивания; +, слабое окрашивание; ++, умеренное окрашивание; и +++, сильное окрашивание). Анализ проводился с использованием считывающего устройства для одного слайда для минимизации вариабельности из-за субъективной оценки. Статистический анализ Средние значения ± стандартное отклонение и медиана были использованы для экспрессии уровней станозолола и его метаболитов, а также для PTEN, TERT и относительной теломеразной активности в процентах.Изменения между двумя значениями были выражены в виде относительных изменений в процентах или иным образом на основе следующей формулы: (фактическое изменение / контрольное значение) * 100%. Тест Колмогорова-Смирнова с поправкой Лилиэфорса применялся для проверки нормальности непрерывных переменных. R Спирмена применяли для измерения двумерных корреляций между двумя непрерывными переменными (например, относительная активность теломеразы в процентах по сравнению с уровнями экспрессии гена 3′-гидроксистанозолола TERT). Непараметрический тест Краскела-Уоллиса и параметрический односторонний дисперсионный анализ ANOVA применялись для сравнения различий в уровнях станозолола и его метаболитов между исследуемыми группами (контрольная, станозолол, PG и группы упражнений).Непараметрические апостериорные сравнения оценивали с использованием тестов Данна (непараметрические) и HSD Тьюки для параметрических тестов. Для статистического анализа использовалось программное обеспечение IBM SPSS Statistics 21.0 (IBM Corp., Армонк, Нью-Йорк, США). Уровень 0,05 был установлен для принятия или отклонения нулевой гипотезы (статистическая значимость). Размеры выборок для отдельных анализов незначительно различались из-за того, что некоторые недостающие значения возникли из-за условий эксперимента. Результаты Тесты на нормальность Тесты на нормальность показали, что только процентная относительная активность теломеразы сохранила нулевую гипотезу, предполагая нормальное распределение данных (P = 0.137). Все другие протестированные непрерывные переменные, такие как TERT, PTEN и 3′-гидроксистанозолол, не следовали нормальному распределению (P <0,01) (данные не показаны). Биоаккумуляция станозолола и его метаболитов в тканях печени Результаты суммированы в. Уровни станозолола и его метаболитов были незначительно выше в группе STE по сравнению с группой ST (P> 0,05). Таблица IV Уровни концентрации (нг / мг) станозолола и его метаболитов в группах станозолола (ST) и станозолола в сочетании с упражнениями (STE). Агент Группа ST (среднее ± стандартное отклонение) Группа ST (среднее ± стандартное отклонение) Манна-Уитни (значение P) % относительное изменение Станозолол (нг / мг ) 2,98 ± 1,01 3,89 ± 1,09 0,240 30,5 3′-гидроксистанозолол (нг / мг) 0,34 ± 0,06 0,44 ± 0,18 0,418 0,44 16-β-гидроксистанозолол (нг / мг) 0.25 ± 0,11 0,32 ± 0,15 0,485 28,0 Оценка теломеразной активности и экспрессии генов Уровни экспрессии генов PTEN и TERT и относительная теломеразная активность в процентах в исследуемых группах представлены в. Значительная разница наблюдалась для экспрессии гена TERT в различных группах (χ 2 = 17,585, df = 4, P <0,001). На основании теста Данна, упражнения снижали экспрессию TERT на (71,0%; P = 0,001), а введение ST увеличивало экспрессию TERT на (160%; P <0.001) по сравнению с группой PG. Следует отметить, что вызванное станозололом увеличение экспрессии TERT по сравнению с группой станозолола было ограничено (68,0%; P = 0,042) у животных, подвергшихся физической нагрузке. Аналогичная картина наблюдалась и для процентной активности теломеразы. На экспрессию гена PTEN практически не влияли ни упражнения, ни прием станозолола. Следует отметить, что не все значения, представленные выше, показаны в из-за большого количества попарных сравнений. Таблица V Уровни экспрессии генов PTEN и TERT (2 -ΔΔCt ) и% относительной активности теломеразы на группу. 9019 Обработка пропиленгликолем 5188 9019 9018 Параметры Группы N Среднее SD Сравнение групп Экспрессия гена PTEN (2 -ΔΔCt ) Контроль Kruskal-Wallis Обработка пропиленгликолем 5 0,37 0,25 χ 2 = 3,643, Обработка станозололом 6 40 0,42 df = 4, P = 0,456 Лечение пропиленгликолем и упражнения 5 0,98 1,62 Станозолол 1,16 0,86 Экспрессия гена TERT (2 -ΔΔCt ) Контроль 5 0,40 0,41 Краскал-Уоллис 8 2,66 χ 2 = 17,585, Лечение станозололом 6 7,25 1,40 df = 4, P = 0,001 упражнения 0,81 0,96 Лечение станозололом и упражнения 6 2,29 0,97 % относительная теломеразная активность30 0,58 ANOVA: Обработка пропиленгликолем 5 1,92 0,96 F = 3,015, df = 4, 9018 93 P = 0,040 Лечение пропиленгликолем и упражнения 5 0,76 0,61 Лечение станозололом и упражнения 6 1.33 0,96 Умеренная корреляция между относительной процентной активностью теломеразы и уровнями экспрессии гена TERT наблюдалась с использованием коэффициента корреляции Спирмена (r = 0,424, P = 0,028) (). Уровни 3′-гидроксистанозолола, измеренные в группах ST и STE, имели тенденцию отрицательно коррелировать с относительной процентной активностью теломеразы (r Спирмена r = -0,566, P = 0,055) (). Не наблюдалось корреляции между какими-либо параметрами, отслеживаемыми с помощью станозолола и 16-β-гидроксистанозолола (данные не показаны). Диаграмма разброса экспрессии гена TERT и относительной активности теломеразы в процентах. TERT, обратная транскриптаза теломеразы. Диаграмма рассеяния 3′-гидроксистанозолола и относительная активность теломеразы в процентах. Анализы ИГХ Изображения окрашивания ИГХ показаны в, а результаты суммированы в. Уровни экспрессии гена PTEN наблюдались вокруг центральной вены и паренхимы. В группе STE окрашивание гепатоцитов, окружающих эти области, было умеренным.Анализ TERT IHC выявил сильное окрашивание в группе ST вокруг портального поля, центральной вены и паренхимы, в то время как упражнения ослабляли увеличение экспрессии гена TERT (умеренное окрашивание в группе STE). Таким образом, наши результаты показали, что упражнения оказывают положительное влияние на экспрессию гена PTEN, как показано на рис. Иммуногистохимическое окрашивание белков PTEN и TERT во всех экспериментальных группах (шкала, 50 мкм мкм). Группы крыс были следующими: i) контрольная (C) группа; ii) группу обработки пропилена (PG); iii) группу обработки станозололом (ST); iv) группа лечения и упражнений с пропиленом (PGE); и v) группа лечения станозололом и физических упражнений (STE).PTEN, белок-гомолог фосфатазы и тензина, TERT, обратная транскриптаза теломеразы. Таблица VI Результаты подсчета для иммуногистохимических анализов PTEN и TERT. Группы Оценка PTEN IHC a Оценка TERT IHC a Контроль + + Лечение станозололом + +++ Лечение пропиленгликолем и упражнения + + Лечение станозололом и упражнения ++3 ++ ++ ++ ++ ++ Обсуждение Станозолол — широко используемый и наиболее мощный ААС, ответственный за ряд побочных эффектов, включая сердечно-сосудистые, репродуктивные, поведенческие эффекты и гепатотоксичность (17).Насколько нам известно, это первое исследование, посвященное изучению вызванных станозололом молекулярных путей активности теломеразы в печени крыс и любых соответствующих эффектов физических упражнений. Станозолол вызывает внутрипеченочные структурные изменения с холестазом и увеличивает риск ГЦК (37). Кроме того, было обнаружено, что злоупотребление ААС в целом является причиной гепатоцеллюлярных аденом (12,39). Несмотря на то, что механизмы, ответственные за вызванную станозололом гепатотоксичность, еще четко не идентифицированы, пролиферативные эффекты на клетки печени могут играть центральную роль в наблюдаемой гепатотоксичности (12,40,41).В нашем предыдущем исследовании мы продемонстрировали, что станозолол оказывает повреждающее действие на ДНК в лимфоцитах периферической крови, что, вероятно, связано с изменениями активности теломеразы (35). Хотя известно, что различные факторы окружающей среды повышают и понижают активность теломеразы, влияние физических упражнений на активность теломеразы еще не было четко идентифицировано (42). Было показано, что на длину теломер и активность теломеразы влияет несколько факторов, включая оксидативный стресс, психологический стресс и социально-экономический статус.Одним из возможных механизмов укорочения теломер является окислительный стресс из-за продуктов окисления оснований ДНК (8-OHdG) в гуаниновых или белковых аддуктах (43,44). Согласно недавним исследованиям, повышенная активность теломеразы обнаруживается почти в 90% случаев рака человека и в 80% случаев ГЦК. Кроме того, хорошо задокументировано, что большинство здоровых клеток не проявляют активности теломеразы (19,20,45). Результаты этого исследования продемонстрировали повышенные уровни относительной активности теломеразы в тканях печени в группе ST, в соответствии с нандролоном, другим хорошо известным ASS, который продемонстрировал аналогичные эффекты за счет увеличения активности теломеразы в зависимости от дозы как при ткань сердца и моноциты периферической крови (2,46).Это может представлять собой компенсирующий механизм восстановления на тканевом уровне, в то время как повышенные уровни циркулирующей активности теломеразы могут указывать на системное воспаление. Связь повышенной активности и экспрессии теломеразы с пролиферативными эффектами в этом исследовании вряд ли возникла из-за короткого времени воздействия (28 дней). В целом механизмы, лежащие в основе влияния ААС на активность теломеразы, не выяснены и остаются практически неизвестными. TERT представляет собой каталитическую субъединицу теломеразы, которая играет роль в ее регуляции на уровне транскрипции.Сообщалось, что мутации TERT связаны с переходом от аденомы к карциноме в печени (47). Следовательно, изменения в регуляции и экспрессии TERT играют важную роль при ГЦК (48). Было показано, что ген-супрессор опухолей PTEN отрицательно коррелирует с белком TERT человека в тканях HCC (21). Следовательно, PTEN и TERT играют противоположные роли в канцерогенезе. Сообщалось, что PTEN косвенно регулирует активность TERT через путь PI3K-PKB / Akt при ГЦК человека (21).Согласно результатам настоящего исследования, не наблюдалось значительных изменений уровней экспрессии PTEN между группами. Однако экспрессия гена TERT была значительно увеличена при лечении ST. Упражнения обращали вспять увеличение экспрессии TERT, вызванное станозололом, особенно в паренхиме, где сообщается о метаболической зональности: высвобождение глюкозы из гликогена и посредством глюконеогенеза, утилизация аминокислот и детоксикация аммиака, защитный метаболизм, образование желчи и синтез определенных белков плазмы, такие как альбумин и фибриноген, происходят в основном в перивенальной зоне, тогда как утилизация глюкозы, метаболизм ксенобиотиков и образование других белков плазмы, таких как альфа-1-антитрипсин или альфа-фетопротеин, происходят преимущественно в перивенальной зоне (49,50). В этом исследовании уровни 3′-гидроксистанозолола и 16-β-гидроксистанозолола, основных метаболитов станозолола, были определены в образцах ткани печени животных, получавших станозолол, и были определены доза-ответная связь между активностью теломеразы и TERT / PTEN. экспрессия генов была определена. Измеренные уровни 3′-гидроксистанозолола в группах ST и STE были связаны с процентной относительной теломеразной активностью, тогда как для уровней станозолола или 16-β-гидроксистанозолола никакой связи не наблюдалось.Это может быть связано с тем, что 3′-гидроксистанозолол является наиболее мощным метаболитом станозолола (2,51). Несколько исследований показали, что физические упражнения увеличивают активность теломеразы в различных типах клеток (52,53). Однако, насколько нам известно, на сегодняшний день нет доступных исследований, изучающих влияние станозолола на активность теломеразы в присутствии / отсутствии упражнений, за исключением нашего предыдущего исследования, которое было сосредоточено на циркуляции активности теломеразы в мононуклеарных клетках периферической крови (PBMCs). ) (35).Наши результаты показали повышение активности теломеразы и экспрессии TERT в ткани печени, что может быть связано либо с повышенным риском пролиферации из-за лечения станозололом (10), что маловероятно для такого короткого периода воздействия, либо может представлять собой механизм противодействия ( 54). Упражнения обращают вспять вызванное станозололом повышение активности теломеразы. Ряд исследований подтвердил, что упражнения обладают гепатопротекторным действием. Huang и др. продемонстрировали, что 12-недельная программа упражнений по плаванию подавляла маркеры старения и подавляла регуляцию воспалительных медиаторов в тканях печени у крыс, вызванных D-галактозой (55).Yi и др. продемонстрировали, что как острые, так и хронические упражнения оказывают профилактическое действие на печень крыс с диабетом 2 типа (56). С другой стороны, сообщалось, что физические упражнения увеличивают количество печеночных ферментов у людей (57), и существуют опасения относительно влияния физических упражнений на портальную гипертензию у пациентов с циррозом печени (58). В заключение, станозолол индуцирует активность теломеразы на молекулярном уровне, и упражнения обращают эту индукцию, по крайней мере, в отношении экспрессии TERT.Это может отражать преждевременное старение тканей из-за снижения активности теломеразы. Необходимы дальнейшие исследования для изучения механизмов, с помощью которых упражнения могут быть использованы для предотвращения неблагоприятного воздействия станазолола на здоровье, и для выяснения молекулярных гепатоцеллюлярных механизмов побочных эффектов, вызванных станозололом. Благодарности Авторы хотели бы поблагодарить доктора Алегакиса Афанасиоса за его ценную помощь в статистических советах и ​​комментариях. Аббревиатуры . DOI: 10.1371 / journal.pone.00. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 53. Ludlow AT, Gratidão L, Ludlow LW, Spangenburg EE, Roth SM. Острая физическая нагрузка активирует p38 MAPK и увеличивает экспрессию генов, защищающих теломеры, в сердечной мышце.Exp Physiol. 2017; 102: 397–410. DOI: 10.1113 / EP086189. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 54. Вардавас А.И., Стивактакис П.Д., Цацаракис М.Н., Фрагкиадаки П., Василаки Ф., Царди М., Дацери Г., Циаусис Дж., Алегакис А.К., Цицимпику С. и др. Длительное воздействие циперметрина и пиперонилбутоксида вызывает воспаление печени и почек и индуцирует генотоксичность у новозеландских белых кроликов-самцов. Food Chem Toxicol. 2016; 94: 250–259. DOI: 10.1016 / j.fct.2016.06.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 55.Хуан С.К., Чианг В.Д., Хуанг В.К., Хуанг С.Й., Сюй М.К., Лин В.Т. Гепатопротекторные эффекты упражнений по плаванию на крысиной модели индуцированного D-галактозой старения. Evid Based Complement Alternat Med. 2013; 2013: 275431. DOI: 10.1155 / 2013/275431. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 56. Yi X, Cao S, Chang B, Zhao D, Gao H, Wan Y, Shi J, Wei W., Guan Y. Влияние острых и хронических упражнений на сигнальный путь лептин-AMPK-ACC в печени у крыс с диабетом 2 типа . J Diabetes Res. 2013; 2013: 946432.DOI: 10.1155 / 2013/946432. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 57. Петтерссон Дж., Хиндорф Ю., Перссон П., Бенгтссон Т., Мальмквист Ю., Веркстрём В., Экелунд М. Мышечные упражнения могут вызывать крайне патологические тесты функции печени у здоровых мужчин. Br J Clin Pharmacol. 2008. 65: 253–259. DOI: 10.1111 / j.1365-2125.2007.03001.x. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 58. Brustia R, Savier E, Scatton O. Физические упражнения у пациентов с циррозом: к реабилитации в листе ожидания трансплантации печени.Систематический обзор и метаанализ. Клин Рес Гепатол Гастроэнтерол. 2017 ноябрь 18; Epub впереди печати. [PubMed] [Google Scholar] Прием станозолола в сочетании с упражнениями приводит к снижению активности теломеразы, возможно, связанному со старением печени Int J Mol Med. 2018 июл; 42 (1): 405–413. , # 1, * , # 1, * , 2 , 3 , 3 , 4 , 3 , 3 9000 , 3 и 1 Эрен Озкагли 1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и Мехтап Кара 1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета Тугба Котиль 2 Кафедра гистологии и эмбриологии медицинского факультета Стамбульского университета, Стамбул 34116, Турция Персефони Фрагкиадаки 3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион Манолис Н.Цацаракис 3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион Кристина Цицимпику 4 Государственная химическая лаборатория Греции, 11521 Афины Polychronis D. Stivaktakis 3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион Димитриос Цукалас 3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион Деметриос А.Spandidos 5 Лаборатория клинической вирусологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион, Греция Аристидес М. Цацакис 3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион Букет Альпертунга 1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и 1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и 2 Кафедра гистологии и эмбриологии медицинского факультета Стамбульского университета, Стамбул 34116, Турция 3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион 4 Государственная химическая лаборатория Греции, 11521 Афины 5 Лаборатория клинической вирусологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион, Греция # Внесено поровну. Для корреспонденции: профессору Букету Альпертунга, кафедра фармацевтической токсикологии, фармацевтический факультет, Стамбульский университет, Беязит, Стамбул 34116, Турция, электронная почта: rt.ude.lubnatsi@agnutПрофессору Аристидесу М. Цацакису, Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинская школа, Университет Крита, ПО Box 1393, 71003 Heraklion, Greece, E-mail: [email protected] * Внесено поровну Получено 28 февраля 2018 г .; Принято 11 апреля 2018 г. Эта статья цитировалась в других статьях в PMC. Заявление о доступности данных Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по разумному запросу. Реферат Анаболические вещества — это допинговые вещества, которые обычно используются в спорте. Станозолол, 17α-алкилированное производное тестостерона, широко используется спортсменами и бодибилдерами. Некоторые медицинские и поведенческие побочные эффекты связаны со злоупотреблением анаболическими андрогенными стероидами (ААС), в то время как печень остается наиболее узнаваемым органом-мишенью.В настоящем исследовании изучалось влияние на печень введения станозолола крысам в высоких дозах, напоминающих дозы, применяемые для допинга, в присутствии или отсутствии упражнений. Станозолол и его метаболиты, 16-β-гидроксистанозолол и 3′-гидроксистанозолол, были обнаружены в печени крыс с помощью жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС). Активность теломеразы, которая участвует в клеточном старении и онкогенезе, была обнаружена путем исследования уровней экспрессии обратной транскриптазы теломеразы (TERT) и фосфатазы и гомолога тензина (PTEN) в печени крыс, получавших станозолол.Станозолол индуцировал теломеразную активность на молекулярном уровне в ткани печени крыс, и упражнения обращали эту индукцию, отражая возможное преждевременное старение ткани печени. На экспрессию гена PTEN в печени крыс практически не влияли ни упражнения, ни прием станозолола. Ключевые слова: станозолол, гомолог фосфатазы и тензина, теломеразная обратная транскриптаза, теломеразная активность, 16-β-гидроксистанозолол, 3′-гидроксистанозолол Введение Станозолол является стероидом, повышающим эффективность (AAS, андрогенным).Среди всех ААС станозолол является одним из наиболее часто используемых стероидов профессиональными спортсменами и молодыми людьми для улучшения внешнего вида и работоспособности. Станозолол представляет собой 17α-алкилированное производное тестостерона с анаболическими и высокими андрогенными свойствами (1,2), и его использование в спорте запрещено Всемирным антидопинговым агентством (WADA) (3). В прошлом ААС использовались только элитными спортсменами и бодибилдерами для целей допинга. Однако в настоящее время даже молодые люди злоупотребляют ААС в супрафизиологических дозах для улучшения внешнего вида (4,5).Сообщается, что станозолол является одним из наиболее часто используемых ААС (6), и он отвечает за несколько медицинских и поведенческих побочных эффектов, являясь признанным фактором риска заболеваний печени как у экспериментальных животных, так и у людей (7-13). . Станозолол широко биотрансформируется ферментативными путями в печени. Сообщалось, что основными метаболитами станозолола являются 3′-гидроксистанозолол, 4-β-гидроксистанозолол и 16-β-гидроксистанозолол (14,15). В общем, ААС проявляют свои эффекты посредством нескольких различных механизмов, таких как модуляция экспрессии рецепторов андрогенов (16).Неблагоприятные эффекты, связанные с печенью, чаще связаны с 17α-алкильными производными ААС и, как сообщается, не связаны с путем введения. Однако точные механизмы еще полностью не изучены (17). Теломеры представляют собой гетерохроматиновые нуклеопротеидные комплексы на концах хромосом, участвующие в ряде основных биологических функций (). Известно, что теломеры играют ключевую роль в формировании и прогрессировании до 90% злокачественных новообразований. Теломеразная активность играет ключевую роль в клеточном старении и онкогенезе (18).Повышенная активность теломеразы обнаруживается в большинстве случаев рака человека (19). Теломераза — это рибонуклеопротеин, отвечающий за поддержание длины теломер. Ядро теломеразы состоит из двух компонентов: каталитической обратной транскриптазы теломеразы (TERT) и компонента теломеразной РНК (TERC) (). Теломеры — это защитные колпачки хромосом (59) (адаптировано с разрешения Shutterstock). Теломераза добавляет теломерные повторы (TTAGGG) к 3′-гидроксильному концу ведущей цепи теломеры.Компонент РНК служит шаблоном для добавления нуклеотидов. Это комплекс теломеразы, который состоит из компонента обратной транскриптазы (TERT), компонента РНК (TERC), белка дискерина и других связанных белков (NHP2, NOP10 и GAR1). Уровень экспрессии мРНК TERT был изучен как биомаркер, поскольку было показано, что он является лимитирующим детерминантом активности теломеразы при различных злокачественных новообразованиях (20). Ген фосфатазы и белка-гомолога тензина (PTEN) кодирует белок-супрессор опухоли с фосфатазной активностью.Сообщается, что частота гетерозиготности PTEN при гепатоцеллюлярной карциноме человека (ГЦК) человека снижается до 33% (21). PTEN участвует в подавлении активности теломеразы посредством регуляции активности TERT (22). PTEN является белком-негативным регулятором сигнального пути фосфоинозитид-3-киназы / AKT механизма регуляции выживания клеток и индуцирует клеточный апоптоз (23). PTEN предотвращает активацию AKT посредством дефосфорилирования фосфатидилинозитол (3,4,5) -трисфосфата (PIP3) до фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфата (PIP2).Подавление PTEN связано с онкогенной активностью в клетке (24). Целью этого исследования было изучить, по крайней мере, насколько нам известно, роль теломеразы в вызванной станозололом гепатотоксичности путем изучения корреляции между активностью теломеразы и уровнями экспрессии гена PTEN-TERT. Также исследовали биоаккумуляцию станозолола и двух его основных метаболитов (3′-гидроксистанозолол и 16-β-гидроксистанозолол) в ткани печени, а также его связь с активностью теломеразы. Материалы и методы Эксперименты на животных Всего было получено 34 крысы-самца Sprague-Dawley в возрасте 8 недель и размещено в помещениях для лабораторных животных Департамента лабораторных наук о животных Института экспериментальной медицины Стамбульского университета. (Стамбул, Турция) в соответствии с Комитетом по этике экспериментов на животных Стамбульского университета, HADYEK (номер утверждения 2013/100). Крысы были разделены на 5 групп следующим образом: i) контрольная (C) группа; ii) группу обработки пропилена (PG); iii) группу обработки станозололом (ST); iv) группа лечения и упражнений с пропиленом (PGE); и v) группа лечения станозололом и физических упражнений (STE).Животных размещали по 4 животных в одной металлической клетке и содержали в 12-часовом цикле темнота / свет при температуре 20–23 ° C. Количество крыс в экспериментальной группе, уход за крысами, обращение и используемые экспериментальные процедуры соответствовали руководящим принципам HADYEK. Вес крыс при покупке регистрировали и использовали для корректировки дозы (). Гуманными конечными точками, определенными в нашем исследовании, были боль, дистресс, неправильная осанка и судороги в соответствии с Руководящим документом ОЭСР (25). Ни у одного животного не было клинических признаков гуманных конечных точек, которые оправдывали бы их жертвоприношение до окончания эксперимента.Экспериментальный план исследования представлен в. Таблица I Вес крыс при покупке. AAS анаболический андрогенный стероид TERT теломераза обратная транскриптаза TERC 9018 компонент теломеразы 9018 9183 9018 9183 , компонент теломеразы мира HCC гепатоцеллюлярная карцинома PG пропиленгликоль IS внутренний стандарт APCI APCI химическая ионизация при атмосферном давлении PB11 ПБК на периферической крови Финансирование Это исследование было поддержано Научно-исследовательскими проектами Стамбульского университета (грант №54169-24416). Доступность данных и материалов Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по разумному запросу. Вклад авторов EO, MK, AMT, BA и DAS разработали и разработали исследование, написали рукопись и внесли ценные предложения при ее подготовке. MK, TK, PF и MNT выполнили LC-MS анализ, оценку активности теломеразы и экспрессии генов; CT, PDS и DT выполнили статистический анализ и интерпретацию данных.EO, MK и BA внесли свой вклад в заявку на финансирование. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи. Одобрение этики и согласие на участие Эксперименты на животных были одобрены Комитетом по этике экспериментов на животных Стамбульского университета, HADYEK (разрешение № 2013/100). Согласие на публикацию Не применимо. Конкурирующие интересы DAS является главным редактором журнала, но не принимал личного участия в процессе рецензирования или какого-либо влияния с точки зрения вынесения окончательного решения по этой статье. Ссылки 1. Balcells G, Matabosch X, Ventura R. Обнаружение метаболитов O- и N-сульфата станозолола и их оценка в качестве дополнительных маркеров в допинг-контроле. Анальный тест на наркотики. 2017; 9: 1001–1010. DOI: 10.1002 / dta.2107. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 2. Цицимпико Ц., Василаки Ф., Царохас К., Фрагкиадаки П., Царди М., Гутзурелас Н., Непка Ц., Калогераки А., Херетис I, Эпитропаки З. и др. Нефротоксичность у кроликов после длительного приема нандролона деканоата. Toxicol Lett.2016; 259: 21–27. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2016.06.1122. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3. Всемирное антидопинговое агентство Список запрещенных веществ и методов за 2017 год. https://www.wada-ama.org/. Проверено 14 февраля 2018 г. 4. Kioukia-Fougia N, Georgiadis N, Tsarouhas K, Vasilaki F, Fragiadaki P, Meimeti E, Tsitsimpikou C. Синтетические и натуральные пищевые добавки: «союзники» здоровья или риски для общественного здоровья. Недавние открытия Pat Inflamm Allergy Drug. 2017; 10: 72–85. DOI: 10,2174 / 1872213X10666160 3700.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 5. Цицимпику С., Хрисостому Н., Папалексис П., Царухас К., Цацакис А., Джамуртас А. Использование пищевых добавок спортсменами-любителями в Афинах, Греция. Int J Sport Nutr Exerc Exerc Metab. 2011; 21: 377–384. DOI: 10.1123 / ijsnem.21.5.377. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6. Саго Д., Мольде Х., Андреассен С.С., Торсхайм Т., Паллесен С. Глобальная эпидемиология использования анаболических андрогенных стероидов: метаанализ и мета-регрессионный анализ. Ann Epidemiol. 2014; 24: 383–398.DOI: 10.1016 / j.annepidem.2014.01.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 7. Ампуэро Дж., Гарсия Э.С., Лоренцо М.М., Калле Р, Ферреро П., Гомес МР. Вызванный станозололом мягкий холестаз. Гастроэнтерол Гепатол. 2014; 37: 71–72. DOI: 10.1016 / j.gastrohep.2013.09.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8. Баусерман Л.Л., Сарителли А.Л., Герберт П.Н. Влияние кратковременного приема станозолола на липопротеины сыворотки крови при печеночной липазной недостаточности. Обмен веществ. 1997; 46: 992–996. DOI: 10.1016 / S0026-0495 (97) -5. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9.Эль-Сераг HB, Крамер Дж., Дуан З., Канвал Ф. Расовые различия в прогрессировании цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы у ветеранов, инфицированных ВГС. Am J Gastroenterol. 2014; 109: 1427–1435. DOI: 10.1038 / ajg.2014.214. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 10. Hansma P, Diaz FJ, Njiwaji C. Смертельный разрыв кисты печени из-за использования анаболических стероидов: презентация случая. Am J Forensic Med Pathol. 2016; 37: 21–22. DOI: 10.1097 / PAF.0000000000000218. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Харкин К.Р., Коуэн Л.А., Эндрюс Г.А., Басараба Р.Дж., Фишер Дж.Р., Дебоуз Л.Дж., Руш Дж.К., Гульельмино М.Л., Кирк, Калифорния.Гепатотоксичность станозолола у кошек. J Am Vet Med Assoc. 2000. 217: 681–684. DOI: 10.2460 / javma.2000.217.681. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Сокас Л., Зумбадо М., Перес-Лусардо О., Рамос А., Перес С., Эрнандес Дж. Р., Боада Л. Д.. Гепатоцеллюлярные аденомы, связанные со злоупотреблением анаболическими андрогенными стероидами у бодибилдеров: отчет о двух случаях и обзор литературы. Br J Sports Med. 2005; 39: e27. DOI: 10.1136 / bjsm.2004.013599. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13. Стимак Д., Милич С., Динтиньяна Р.Д., Ковач Д., Ристич С.Андрогенный / анаболический стероид-индуцированный токсический гепатит. J Clin Gastroenterol. 2002. 35: 350–352. DOI: 10.1097 / 00004836-200210000-00013. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Дешмук Н.И., Захар Г., Петроци А., Секели А.Д., Баркер Дж., Нотон Д.П. Определение станозолола и 3′-гидроксистанозолола в шерсти, моче и сыворотке крыс с использованием тандемной масс-спектрометрии с жидкостной хроматографией. Chem Cent J. 2012; 6: 162. DOI: 10.1186 / 1752-153X-6-162. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Mateus-Avois L, Mangin P, Saugy M.Использование газовой хроматографии с ионной ловушкой и множественной масс-спектрометрии для обнаружения и подтверждения следовых уровней 3′-гидроксистанозолола в моче для допинг-контроля. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2005; 816: 193–201. DOI: 10.1016 / j.jchromb.2004.11.033. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Бюттнер А., Тим Д. Побочные эффекты анаболических андрогенных стероидов: патологические данные и взаимосвязь между структурой и активностью. Handb Exp Pharmacol. 2010; 195: 459–484. DOI: 10.1007 / 978-3-540-79088-4_19.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18. Рентукас Э., Царухас К., Капланис I, Короу Э, Николау М., Марафонитис G, Коккиноу С., Халиассос А., Мамалаки А., Куретас Д. и др. Связь активности теломеразы в МКПК с маркерами воспаления и эндотелиальной дисфункции у пациентов с метаболическим синдромом. PLoS One. 2012; 7: e35739. DOI: 10.1371 / journal.pone.0035739. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Zhou X, Zhu H, Lu J. Экспрессия генов PTEN и hTERT и корреляция с гепатоцеллюлярной карциномой человека.Pathol Res Pract. 2015; 211: 316–319. DOI: 10.1016 / j.prp.2014.11.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 23. Ян Ц., Ли С., Ван М., Чанг А.К., Лю И, Чжао Ф, Сяо Л., Хань Л., Ван Д., Ли С., Ву Х. PTEN подавляет онкогенную функцию AIB1 за счет снижения стабильности его белка с помощью механизма, включающего Fbw7 альфа. . Молочный рак. 2013; 12:21. DOI: 10.1186 / 1476-4598-12-21. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24. Jung S, Li C, Jeong D, Lee S, Ohk J, Park M, Han S, Duan J, Kim C, Yang Y и др.Онкогенная функция p34SEI-1 через NEDD4 1 опосредована убиквитинизацией / деградацией PTEN и активацией пути PI3K / AKT. Int J Oncol. 2013; 43: 1587–1595. DOI: 10.3892 / ijo.2013.2064. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25. ОЭСР. Руководящий документ по распознаванию, оценке и использованию клинических признаков в качестве гуманных конечных точек для экспериментальных животных, используемых при оценке безопасности. ОЭСР; Париж: 2000. [Google Scholar] 26. Черичи Камарго IC, Баррейрос де Соуза Р., Фатима Паккола Мескита С., Чуффа Л.Г., Фрей Ф.Гистология яичников и оценка фолликулов у самок крыс, получавших деканоат нандролона и подвергавшихся физическим нагрузкам. Acta Biol Hung. 2009. 60: 253–261. DOI: 10.1556 / ABiol.60.2009.3.2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 27. де Алмейда Чуффа Л.Г., де Соуза Р.Б., Фрей Ф., де Фатима Паккола Мескита С., Камарго IC. Деканоат нандролона и физическое усилие: гистологическая и морфометрическая оценка в матке взрослой крысы. Анат Рек (Хобокен) 2011; 294: 335–341. DOI: 10.1002 / ar.21314. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 28.Гопинатан С., О’Нил Э, Родригес Л.А., Чемпион Р., Филлипс М., Нуралдин А., Вендт М., Уилсон Эйдж, Крамер Дж. Токсикология наполнителей in vivo, обычно используемых при открытии лекарств на крысах. J Pharmacol Toxicol Methods. 2013; 68: 284–295. DOI: 10.1016 / j.vascn.2013.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 29. Healing G, Sulemann T, Cotton P, Harris J, Hargreaves A, Finney R, Kirk S, Schramm C, Garner C, Pivette P, Burdett L.Данные о безопасности 19 транспортных средств для использования в доклинических исследованиях на грызунах в течение 1 месяца: Введение гидроксипропил-β-циклодекстрина вызывает почечную токсичность.J Appl Toxicol. 2016; 36: 140–150. DOI: 10.1002 / jat.3155. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 30. Aye M, Di Giorgio C, De Mo M, Botta A, Perrin J, Courbiere B. Оценка генотоксичности трех криопротекторов, используемых для витрификации человеческих ооцитов: диметилсульфоксида, этиленгликоля и пропиленгликоля. Food Chem Toxicol. 2010; 48: 1905–1912. DOI: 10.1016 / j.fct.2010.04.032. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 31. Бертло-Рику А., Перрин Дж., Ди Джорджио С., де Мео М., Ботта А., Курбьер Б. Оценка генотоксичности 1,2-пропандиола (PrOH) на ооциты мышей с помощью анализа комет.Fertil Steril. 2011; 96: 1002–1007. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2011.07.1106. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 32. Каннингем Р.Л., Макгиннис М.Ю. Физическая провокация самцов крыс, подвергшихся воздействию пубертатных анаболических андрогенных стероидов, вызывает агрессию по отношению к самкам. Horm Behav. 2006; 50: 410–416. DOI: 10.1016 / j.yhbeh.2006.05.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 33. Matrisciano F, Modafferi AM, Togna GI, Barone Y, Pinna G, Nicoletti F, Scaccianoce S. Повторное лечение анаболическими андрогенными стероидами вызывает обратимые антидепрессантами изменения гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой оси, уровней BDNF и поведения.Нейрофармакология. 2010. 58: 1078–1084. DOI: 10.1016 / j.neuropharm.2010.01.015. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 34. Tucci P, Morgese MG, Colaianna M, Zotti M, Schiavone S, Cuomo V, Trabace L. Нейрохимические последствия злоупотребления стероидами: моноаминергические изменения, вызванные станозололом. Стероиды. 2012; 77: 269–275. DOI: 10.1016 / j.steroids.2011.12.014. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 35. Кара М., Озджагли Э., Фрагкиадаки П., Котил Т., Стивактакис П.Д., Спандидос Д.А., Цацакис А.М., Альпертунга Б. Определение повреждения ДНК и активности теломеразы у крыс, получавших станозолол.Exp Ther Med. 2017; 13: 614–618. DOI: 10.3892 / etm.2016.3974. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 36. Цицимпико Ц., Цацаракис М., Фрагкиадаки П., Коваци Л., Стивактакис П., Калогераки А., Куретас Д., Цацакис А. М.. Гистопатологические поражения, окислительный стресс и генотоксические эффекты в печени и почках после длительного воздействия диазинона и пропоксура на кроликов. Токсикология. 2013; 307: 109–114. DOI: 10.1016 / j.tox.2012.11.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 37. Сольбах П., Поттхофф А., Раатшен Х.Дж., Суда Б., Леманн Ю., Шнайдер А., Гебель М.Дж., Маннс М.П., ​​Фогель А.Гепатоцеллюлярная карцинома с положительным тестостерон-рецептором у 29-летнего бодибилдера с историей злоупотребления анаболическими андрогенными стероидами: отчет о болезни. BMC Gastroenterol. 2015; 15:60. DOI: 10.1186 / s12876-015-0288-0. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 38. Ливак К.Дж., Шмитген Т.Д. Анализ данных относительной экспрессии генов с использованием количественной ПЦР в реальном времени и метода 2 (-4Delta Delta C (T)). Методы. 2001; 25: 402–408. DOI: 10.1006 / meth.2001.1262. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 39.Кеслер Т., Сандху Р.С., Кришнамурти С. Гепатология: гепатоцеллюлярная карцинома у молодого человека, вторичная по отношению к злоупотреблению андрогенными анаболическими стероидами. J Gastroenterol Hepatol. 2014; 29: 1852. DOI: 10.1111 / jgh.12809. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 40. Боада Л.Д., Зумбадо М., Торрес С., Лопес А., Диас-Чико Б.Н., Кабрера Дж. Дж., Лусардо ОП. Оценка острых и хронических гепатотоксических эффектов анаболического андрогенного стероида станозолола у взрослых самцов крыс. Arch Toxicol. 1999. 73: 465–472. DOI: 10.1007 / s002040050636.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 41. Канаяма Дж., Хадсон Дж. И., Поуп Х. Дж., Младший. Долгосрочные психиатрические и медицинские последствия злоупотребления анаболическими андрогенными стероидами: надвигающаяся проблема общественного здравоохранения? Зависимость от наркотиков и алкоголя. 2008; 98: 1–12. DOI: 10.1016 / j.drugalcdep.2008.05.004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 42. Орниш Д., Лин Дж., Чан Дж. М., Эпель Э, Кемп С., Вайднер Дж., Марлин Р., Френда С. Дж., Магбануа М. Дж. М., Даубенмьер Дж. И др. Влияние всесторонних изменений образа жизни на активность теломеразы и длину теломер у мужчин с подтвержденным биопсией раком простаты низкого риска: 5-летнее наблюдение за описательным пилотным исследованием.Ланцет Онкол. 2013; 14: 1112–1120. DOI: 10.1016 / S1470-2045 (13) 70366-8. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 43. Мишра С., Кумар Р., Малхотра Н., Сингх Н., Дада Р. Мягкий окислительный стресс полезен для поддержания длины теломер сперматозоидов. World J Methodol. 2016; 6: 163–170. DOI: 10.5662 / wjm.v6.i2.163. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 44. Зар Т., Грэбер С., Перацелла М.А. Распознавание, лечение и профилактика токсичности пропиленгликоля. Semin Dial. 2007. 20: 217–219. DOI: 10.1111 / j.1525-139X.2007.00280.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 45. Djojosubroto MW, Chin AC, Go N, Schaetzlein S, Manns MP, Gryaznov S, Harley CB, Rudolph KL. Антагонисты теломеразы GRN163 и GRN163L подавляют рост опухоли и повышают химиочувствительность гепатомы человека. Гепатология. 2005; 42: 1127–1136. DOI: 10.1002 / hep.20822. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 46. Василаки Ф., Цицимпико Ц., Цароухас К., Германакис I, Царди М., Каввалакис М., Озкагли Э., Куретас Д., Цацакис А. М.. Кардиотоксичность у кроликов после длительного приема нандролона деканоата.Toxicol Lett. 2016; 241: 143–151. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2015.10.026. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 47. Пилати С., Летузе Э., Нолт Дж. К., Имбо С., Булай А., Кальдераро Дж., Пуссен К., Франкони А., Куши Дж., Моркретт Дж. И др. Геномное профилирование гепатоцеллюлярных аденом позволяет выявить повторяющиеся мутации, активирующие FRK, и механизмы злокачественной трансформации. Раковая клетка. 2014; 25: 428–441. DOI: 10.1016 / j.ccr.2014.03.005. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 49. Юнгерманн К., Кицманн Т. Зонирование паренхиматозного и непаренхиматозного метаболизма в печени.Анну Рев Нутр. 1996. 16: 179–203. DOI: 10.1146 / annurev.nu.16.070196.001143. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 50. Юнгерманн К. Метаболическое зонирование паренхимы печени. Semin Liver Dis. 1988. 8: 329–341. DOI: 10,1055 / с-2008-1040554. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 51. Сальвадор Дж. П., Санчес-Баеза Ф, Марко М. П.. Одновременное иммунохимическое определение станозолола и основного метаболита человека, 3′-гидроксистанозолола, в образцах мочи и сыворотки крови. Анальная биохимия. 2008; 376: 221–228. DOI: 10.1016 / j.ab.2008.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 52. Чилтон В.Л., Маркес Ф.З., Вест Дж., Канноуракис Дж., Берзиньш С.П., О’Брайен Б.Дж., Чарчар Ф.Дж. Острая физическая нагрузка приводит к регуляции генов, связанных с теломерами, и экспрессии микроРНК в иммунных клетках. PLoS One. 2014; 9: e 9018 9018 9018 9018 276 9018 9018 9018 9018 9018 9018 264 9018 9019 9018 9018 9018 9018 9019 9018 4 9018 9018 9018 9018 группа Ster 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018 Количество крыс Вес крыс при покупке (г) Контроль 1 259 2 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018 4 264 5 282 Пропиленгликоль 1 255 2 261 5 272 Пропиленгликоль и упражнение 1 262 2 276 5 278 6 263 901 88 7 260 8 277 Стероидная группа 1 280 2 272 5 277 6 272 7 263 8 275 2 277 3 290 4 263 5 280 8 273 Таблица II Experi мысленный дизайн исследования. мл / кг пропиленгликоля в день Группы Количество крыс Подкожные инъекции Упражнение Контроль 5 Без инъекций Без упражнений Без упражнений Лечение станозололом 8 5 мг / кг станозолола в день Без упражнений Лечение пропиленгликолем и упражнения 8 1 8 1 8 1 кг пропиленгликоля в день Плавание: 20 мин / день, 5 дней в неделю Лечение станозололом и упражнения 8 5 мг / кг станозолола в день Плавание: 20 мин / день, 5 дней / неделя Плавание было выбрано в качестве модели упражнений (26, 27) и началось за 1 неделю до схемы лечения, чтобы мальчики адаптироваться.Крыс плавали в прямоугольном полиэтиленовом резервуаре (длина 120 см × глубина 50 см × ширина 43 см), наполненном водой при 29 ± 1 ° C. Во время экспериментов в течение 20 минут в день, 5 дней в неделю крыс подвергали плаванию после периода адаптации в течение 1 недели. Животных адаптировали к процессу плаванием в воде в течение 5 минут в течение первых 2 дней, а затем время плавания постепенно увеличивали до 5 минут в день до конечной продолжительности 20 минут на 5 день. Пропиленгликоль (PG ) (Tekkim, Стамбул, Турция) использовался в качестве носителя для станозолола (Sigma, Schnelldorf, Германия).Известно, что PG является хорошим проводником для экспериментальных исследований in vivo (28,29). Однако сообщалось, что высокие концентрации PG могут вызывать повреждение ДНК в эукариотических клетках и ооцитах мышей (30,31). Подкожное введение было выбрано, а дозы были выбраны в соответствии с предыдущими исследованиями (32–34). Группы, подвергшиеся воздействию, получали однократную дозу PG (1 мл / кг) и ST (5 мл / кг) подкожно в течение 5 дней в неделю. После 28 дней лечения животным была проведена легкая анестезия с использованием процента 1.9% диэтиловый эфир в анестезиологической камере и эвтаназия путем шейного вывиха, проводимая обученным персоналом. Были собраны образцы ткани печени и разделены на 2 секции. Один срез немедленно замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° C, а другой фиксировали 10% забуференным формалином и залитым парафином для гистохимического анализа. Жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (ЖХ-МС) анализ Стандарты станозолола, 3′-гидроксистанозолола и 16-β-гидроксистанозолола в концентрациях 0,0.1, 0,25, 0,5 и 1 частей на миллион были приготовлены из стандартных исходных растворов с концентрацией 20 частей на миллион. Туринабол (LGC, Лидс, Великобритания) использовали в качестве внутреннего стандарта (IS) с целевыми ионами m / z 317,25 и m / z 335,25. Калибровочные кривые были получены путем измерения отношения площадей пиков целевых ионов к IS следующим образом: для станозолола m / z 370,4 , 352,3 и 329,35, для 3′-гидроксистанозолола m / z 386,4 , 345,35, для 16-β- гидроксистанозолол m / z 386,4 , 366,3 и 345,35 для IS туринабол () (ион m / z, используемый для количественной оценки, выделен жирным шрифтом).Образцы печени необработанных животных, которые дали отрицательные результаты ( Таблица III Параметры анализа ЖХ-МС. Агент Rt m / z target m / z m / z Mw 4α-гидроксистанозолол 9 386.4 345,35 4β-hydroxystanozolol 9,3 386,4 345,35 3-hydroxystanozolol 10,15 386,4 345,35 344,49 16-β-гидроксистанозолол 10,45 386,4 366,3 345,35 344,49 Станозолол 12.95 370,4 352,3 329,35 328,49 Туринабол (IS) 13,9 317,25 335,25 334 каждого животного Примерно по 0,1 механическая гомогенизация на высокой скорости в течение 2 мин с 1,0 мл воды. Гомогенаты сильно встряхивали и затем инкубировали в ультразвуковой бане в течение 10 мин. Затем добавляли 1,5 мл этилацетата и проводили экстракцию аналитов в течение 10 мин.Образцы центрифугировали при 1820 × g в течение 2 мин при 4 ° C. Супернатанты переносили в пустую пробирку и упаривали досуха в атмосфере азота при 30 ° C. После выпаривания добавляли 100– мкл л ацетонитрила и сильно встряхивали. Супернатанты переносили во флаконы, и 10 мкл мкл из них вводили в систему ЖХ-МС для анализа. Система ЖХ-МС состоит из бинарного насоса ЖХ (Shimadzu Prominence, Киото, Япония), вакуумного дегазатора, автоматического пробоотборника и термостата для колонок.В качестве подвижной фазы был выбран градиент 0,1% муравьиной кислоты в воде (растворитель A) и ацетонитриле (растворитель B). Разделение аналитов было достигнуто на колонке для ВЭЖХ Discovery C18 (250 × 4,6 мм, 5 мкм, м), термостатированной при 30 ° C. Масс-спектрометр (LCMS-2010 EV; Shimadzu Prominence) в сочетании с интерфейсом химической ионизации при атмосферном давлении (APCI) и одиночным квадрупольным масс-фильтром использовался в выбранном положительном режиме ионного мониторинга (SIM). Температура интерфейса, CDL и теплового блока составляла 400, 200 и 200 ° C соответственно.Напряжение детектора составляло 1,5 кВ, поток распыляющего газа составлял 2,5 л / мин, а осушающий газ составлял 0,02 МПа. Анализ активности теломеразы Определение активности теломеразы в образцах ткани печени крысы выполняли количественно с использованием набора teloTAGGG telomerase PCR ELISA PLUS (Roche Diagnostic GmbH, Mannheim, Germany). Протокол набора следовал для оценки активности теломеразы, как описано ранее (35,36). Оценка экспрессии гена Выделение РНК проводили из залитых парафином срезов ткани печени крысы с использованием выделения РНК High Pure FFPET (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя.Для синтеза кДНК использовали фиксированное количество РНК из каждого образца. кДНК получали с использованием набора Transcriptor First Strand cDNA Synthesis (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. Уровни экспрессии генов TERT и PTEN анализировали с помощью количественной (в реальном времени) полимеразной цепной реакции (кПЦР) с использованием аппарата Light Cycler 480 (Roche Diagnostic GmbH) с анализом каталога Real Time Ready (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. Последовательности праймеров были следующими: PTEN прямой, 5′-AGAACAAGATGCTCAAAAAGGACAA-3 ‘и обратный, 5′-TGTCAGGGTGAGCACAAGAT-3′; TERT вперед, 5’-GACATGGAGAACAAGCTGTTTGC-3 ‘; и наоборот, 5’-ACAGGGAAGTTCACCACTGTC-3 ‘; и GAPDH прямой, 5’-TTCAACGGCACAGTCAAGG-3 ‘и обратный, 5′-CTCAGCACCAGCATCACC-3’.ПЦР-амплификации выполняли в соответствии с инструкциями производителя в трех экземплярах. Реакционную смесь без матрицы кДНК использовали в качестве отрицательного контроля. Уровни экспрессии (2 -ΔΔCt ) рассчитывали, как описано ранее (37,38). Иммуногистохимический (ИГХ) анализ ИГХ-анализы были выполнены с использованием наборов для определения ультра стрептавидина HRP [BioLegend Sig-32248, набор для определения ультра стрептавидина HRP (Multi-Specation, DAB)] и BioLegend Sig-32250, набор для определения ультра стрептавидина HRP (Multi-views, AEC) (BioLegend, San Diego, CA, USA) для уровней экспрессии PTEN и TERT соответственно.Залитые парафином срезы помещали на предметные стекла Superfrost (Menzel-Gläser, Брауншвейг, Германия). После сушки в течение ночи был проведен ИГХ-анализ PTEN и TERT с использованием метода меченой стрептавидин-биотин-пероксидазы. Предметные стекла обрабатывали ксилолом и регидратировали в растворах этанола возрастающих классов. Извлечение антигена осуществляли путем кипячения предметных стекол в течение 5 мин / 3 раза в цитратном буфере (0,01 М). Для подавления активности эндогенной пероксидазы срезы ткани обрабатывали блокирующим реагентом 1 в течение 15 минут и промывали PBS.Все срезы инкубировали с блокирующим реагентом 2 в течение 5 минут при комнатной температуре, чтобы избежать неспецифического связывания. Инкубации поликлональных антител PTEN (251264) и TERT (250509) (оба от Abbiotec, Aachen, Germany) проводили в течение ночи при 4 ° C с разведениями 1/100. Слайды инкубировали со связывающим реагентом 4, а затем с реагентом для маркировки 5 в течение 20 минут при комнатной температуре. Слайды визуализировали хромогенами DAB и AEC, контрастировали гематоксилином Майера и, наконец, монтировали.Уровни экспрессии PTEN и TERT оценивали под световым микроскопом (Olympus BX40F4; Olympus, Токио, Япония). Анализы TERT и PTEN IHC были классифицированы невооруженным глазом на 4 категории на основе интенсивности окрашивания следующим образом: 0 — нет окрашивания; +, слабое окрашивание; ++, умеренное окрашивание; и +++, сильное окрашивание). Анализ проводился с использованием считывающего устройства для одного слайда для минимизации вариабельности из-за субъективной оценки. Статистический анализ Средние значения ± стандартное отклонение и медиана были использованы для экспрессии уровней станозолола и его метаболитов, а также для PTEN, TERT и относительной теломеразной активности в процентах.Изменения между двумя значениями были выражены в виде относительных изменений в процентах или иным образом на основе следующей формулы: (фактическое изменение / контрольное значение) * 100%. Тест Колмогорова-Смирнова с поправкой Лилиэфорса применялся для проверки нормальности непрерывных переменных. R Спирмена применяли для измерения двумерных корреляций между двумя непрерывными переменными (например, относительная активность теломеразы в процентах по сравнению с уровнями экспрессии гена 3′-гидроксистанозолола TERT). Непараметрический тест Краскела-Уоллиса и параметрический односторонний дисперсионный анализ ANOVA применялись для сравнения различий в уровнях станозолола и его метаболитов между исследуемыми группами (контрольная, станозолол, PG и группы упражнений).Непараметрические апостериорные сравнения оценивали с использованием тестов Данна (непараметрические) и HSD Тьюки для параметрических тестов. Для статистического анализа использовалось программное обеспечение IBM SPSS Statistics 21.0 (IBM Corp., Армонк, Нью-Йорк, США). Уровень 0,05 был установлен для принятия или отклонения нулевой гипотезы (статистическая значимость). Размеры выборок для отдельных анализов незначительно различались из-за того, что некоторые недостающие значения возникли из-за условий эксперимента. Результаты Тесты на нормальность Тесты на нормальность показали, что только процентная относительная активность теломеразы сохранила нулевую гипотезу, предполагая нормальное распределение данных (P = 0.137). Все другие протестированные непрерывные переменные, такие как TERT, PTEN и 3′-гидроксистанозолол, не следовали нормальному распределению (P <0,01) (данные не показаны). Биоаккумуляция станозолола и его метаболитов в тканях печени Результаты суммированы в. Уровни станозолола и его метаболитов были незначительно выше в группе STE по сравнению с группой ST (P> 0,05). Таблица IV Уровни концентрации (нг / мг) станозолола и его метаболитов в группах станозолола (ST) и станозолола в сочетании с упражнениями (STE). Агент Группа ST (среднее ± стандартное отклонение) Группа ST (среднее ± стандартное отклонение) Манна-Уитни (значение P) % относительное изменение Станозолол (нг / мг ) 2,98 ± 1,01 3,89 ± 1,09 0,240 30,5 3′-гидроксистанозолол (нг / мг) 0,34 ± 0,06 0,44 ± 0,18 0,418 0,44 16-β-гидроксистанозолол (нг / мг) 0.25 ± 0,11 0,32 ± 0,15 0,485 28,0 Оценка теломеразной активности и экспрессии генов Уровни экспрессии генов PTEN и TERT и относительная теломеразная активность в процентах в исследуемых группах представлены в. Значительная разница наблюдалась для экспрессии гена TERT в различных группах (χ 2 = 17,585, df = 4, P <0,001). На основании теста Данна, упражнения снижали экспрессию TERT на (71,0%; P = 0,001), а введение ST увеличивало экспрессию TERT на (160%; P <0.001) по сравнению с группой PG. Следует отметить, что вызванное станозололом увеличение экспрессии TERT по сравнению с группой станозолола было ограничено (68,0%; P = 0,042) у животных, подвергшихся физической нагрузке. Аналогичная картина наблюдалась и для процентной активности теломеразы. На экспрессию гена PTEN практически не влияли ни упражнения, ни прием станозолола. Следует отметить, что не все значения, представленные выше, показаны в из-за большого количества попарных сравнений. Таблица V Уровни экспрессии генов PTEN и TERT (2 -ΔΔCt ) и% относительной активности теломеразы на группу. 9019 Обработка пропиленгликолем 5188 9019 9018 Параметры Группы N Среднее SD Сравнение групп Экспрессия гена PTEN (2 -ΔΔCt ) Контроль Kruskal-Wallis Обработка пропиленгликолем 5 0,37 0,25 χ 2 = 3,643, Обработка станозололом 6 40 0,42 df = 4, P = 0,456 Лечение пропиленгликолем и упражнения 5 0,98 1,62 Станозолол 1,16 0,86 Экспрессия гена TERT (2 -ΔΔCt ) Контроль 5 0,40 0,41 Краскал-Уоллис 8 2,66 χ 2 = 17,585, Лечение станозололом 6 7,25 1,40 df = 4, P = 0,001 упражнения 0,81 0,96 Лечение станозололом и упражнения 6 2,29 0,97 % относительная теломеразная активность30 0,58 ANOVA: Обработка пропиленгликолем 5 1,92 0,96 F = 3,015, df = 4, 9018 93 P = 0,040 Лечение пропиленгликолем и упражнения 5 0,76 0,61 Лечение станозололом и упражнения 6 1.33 0,96 Умеренная корреляция между относительной процентной активностью теломеразы и уровнями экспрессии гена TERT наблюдалась с использованием коэффициента корреляции Спирмена (r = 0,424, P = 0,028) (). Уровни 3′-гидроксистанозолола, измеренные в группах ST и STE, имели тенденцию отрицательно коррелировать с относительной процентной активностью теломеразы (r Спирмена r = -0,566, P = 0,055) (). Не наблюдалось корреляции между какими-либо параметрами, отслеживаемыми с помощью станозолола и 16-β-гидроксистанозолола (данные не показаны). Диаграмма разброса экспрессии гена TERT и относительной активности теломеразы в процентах. TERT, обратная транскриптаза теломеразы. Диаграмма рассеяния 3′-гидроксистанозолола и относительная активность теломеразы в процентах. Анализы ИГХ Изображения окрашивания ИГХ показаны в, а результаты суммированы в. Уровни экспрессии гена PTEN наблюдались вокруг центральной вены и паренхимы. В группе STE окрашивание гепатоцитов, окружающих эти области, было умеренным.Анализ TERT IHC выявил сильное окрашивание в группе ST вокруг портального поля, центральной вены и паренхимы, в то время как упражнения ослабляли увеличение экспрессии гена TERT (умеренное окрашивание в группе STE). Таким образом, наши результаты показали, что упражнения оказывают положительное влияние на экспрессию гена PTEN, как показано на рис. Иммуногистохимическое окрашивание белков PTEN и TERT во всех экспериментальных группах (шкала, 50 мкм мкм). Группы крыс были следующими: i) контрольная (C) группа; ii) группу обработки пропилена (PG); iii) группу обработки станозололом (ST); iv) группа лечения и упражнений с пропиленом (PGE); и v) группа лечения станозололом и физических упражнений (STE).PTEN, белок-гомолог фосфатазы и тензина, TERT, обратная транскриптаза теломеразы. Таблица VI Результаты подсчета для иммуногистохимических анализов PTEN и TERT. Группы Оценка PTEN IHC a Оценка TERT IHC a Контроль + + Лечение станозололом + +++ Лечение пропиленгликолем и упражнения + + Лечение станозололом и упражнения ++3 ++ ++ ++ ++ ++ Обсуждение Станозолол — широко используемый и наиболее мощный ААС, ответственный за ряд побочных эффектов, включая сердечно-сосудистые, репродуктивные, поведенческие эффекты и гепатотоксичность (17).Насколько нам известно, это первое исследование, посвященное изучению вызванных станозололом молекулярных путей активности теломеразы в печени крыс и любых соответствующих эффектов физических упражнений. Станозолол вызывает внутрипеченочные структурные изменения с холестазом и увеличивает риск ГЦК (37). Кроме того, было обнаружено, что злоупотребление ААС в целом является причиной гепатоцеллюлярных аденом (12,39). Несмотря на то, что механизмы, ответственные за вызванную станозололом гепатотоксичность, еще четко не идентифицированы, пролиферативные эффекты на клетки печени могут играть центральную роль в наблюдаемой гепатотоксичности (12,40,41).В нашем предыдущем исследовании мы продемонстрировали, что станозолол оказывает повреждающее действие на ДНК в лимфоцитах периферической крови, что, вероятно, связано с изменениями активности теломеразы (35). Хотя известно, что различные факторы окружающей среды повышают и понижают активность теломеразы, влияние физических упражнений на активность теломеразы еще не было четко идентифицировано (42). Было показано, что на длину теломер и активность теломеразы влияет несколько факторов, включая оксидативный стресс, психологический стресс и социально-экономический статус.Одним из возможных механизмов укорочения теломер является окислительный стресс из-за продуктов окисления оснований ДНК (8-OHdG) в гуаниновых или белковых аддуктах (43,44). Согласно недавним исследованиям, повышенная активность теломеразы обнаруживается почти в 90% случаев рака человека и в 80% случаев ГЦК. Кроме того, хорошо задокументировано, что большинство здоровых клеток не проявляют активности теломеразы (19,20,45). Результаты этого исследования продемонстрировали повышенные уровни относительной активности теломеразы в тканях печени в группе ST, в соответствии с нандролоном, другим хорошо известным ASS, который продемонстрировал аналогичные эффекты за счет увеличения активности теломеразы в зависимости от дозы как при ткань сердца и моноциты периферической крови (2,46).Это может представлять собой компенсирующий механизм восстановления на тканевом уровне, в то время как повышенные уровни циркулирующей активности теломеразы могут указывать на системное воспаление. Связь повышенной активности и экспрессии теломеразы с пролиферативными эффектами в этом исследовании вряд ли возникла из-за короткого времени воздействия (28 дней). В целом механизмы, лежащие в основе влияния ААС на активность теломеразы, не выяснены и остаются практически неизвестными. TERT представляет собой каталитическую субъединицу теломеразы, которая играет роль в ее регуляции на уровне транскрипции.Сообщалось, что мутации TERT связаны с переходом от аденомы к карциноме в печени (47). Следовательно, изменения в регуляции и экспрессии TERT играют важную роль при ГЦК (48). Было показано, что ген-супрессор опухолей PTEN отрицательно коррелирует с белком TERT человека в тканях HCC (21). Следовательно, PTEN и TERT играют противоположные роли в канцерогенезе. Сообщалось, что PTEN косвенно регулирует активность TERT через путь PI3K-PKB / Akt при ГЦК человека (21).Согласно результатам настоящего исследования, не наблюдалось значительных изменений уровней экспрессии PTEN между группами. Однако экспрессия гена TERT была значительно увеличена при лечении ST. Упражнения обращали вспять увеличение экспрессии TERT, вызванное станозололом, особенно в паренхиме, где сообщается о метаболической зональности: высвобождение глюкозы из гликогена и посредством глюконеогенеза, утилизация аминокислот и детоксикация аммиака, защитный метаболизм, образование желчи и синтез определенных белков плазмы, такие как альбумин и фибриноген, происходят в основном в перивенальной зоне, тогда как утилизация глюкозы, метаболизм ксенобиотиков и образование других белков плазмы, таких как альфа-1-антитрипсин или альфа-фетопротеин, происходят преимущественно в перивенальной зоне (49,50). В этом исследовании уровни 3′-гидроксистанозолола и 16-β-гидроксистанозолола, основных метаболитов станозолола, были определены в образцах ткани печени животных, получавших станозолол, и были определены доза-ответная связь между активностью теломеразы и TERT / PTEN. экспрессия генов была определена. Измеренные уровни 3′-гидроксистанозолола в группах ST и STE были связаны с процентной относительной теломеразной активностью, тогда как для уровней станозолола или 16-β-гидроксистанозолола никакой связи не наблюдалось.Это может быть связано с тем, что 3′-гидроксистанозолол является наиболее мощным метаболитом станозолола (2,51). Несколько исследований показали, что физические упражнения увеличивают активность теломеразы в различных типах клеток (52,53). Однако, насколько нам известно, на сегодняшний день нет доступных исследований, изучающих влияние станозолола на активность теломеразы в присутствии / отсутствии упражнений, за исключением нашего предыдущего исследования, которое было сосредоточено на циркуляции активности теломеразы в мононуклеарных клетках периферической крови (PBMCs). ) (35).Наши результаты показали повышение активности теломеразы и экспрессии TERT в ткани печени, что может быть связано либо с повышенным риском пролиферации из-за лечения станозололом (10), что маловероятно для такого короткого периода воздействия, либо может представлять собой механизм противодействия ( 54). Упражнения обращают вспять вызванное станозололом повышение активности теломеразы. Ряд исследований подтвердил, что упражнения обладают гепатопротекторным действием. Huang и др. продемонстрировали, что 12-недельная программа упражнений по плаванию подавляла маркеры старения и подавляла регуляцию воспалительных медиаторов в тканях печени у крыс, вызванных D-галактозой (55).Yi и др. продемонстрировали, что как острые, так и хронические упражнения оказывают профилактическое действие на печень крыс с диабетом 2 типа (56). С другой стороны, сообщалось, что физические упражнения увеличивают количество печеночных ферментов у людей (57), и существуют опасения относительно влияния физических упражнений на портальную гипертензию у пациентов с циррозом печени (58). В заключение, станозолол индуцирует активность теломеразы на молекулярном уровне, и упражнения обращают эту индукцию, по крайней мере, в отношении экспрессии TERT.Это может отражать преждевременное старение тканей из-за снижения активности теломеразы. Необходимы дальнейшие исследования для изучения механизмов, с помощью которых упражнения могут быть использованы для предотвращения неблагоприятного воздействия станазолола на здоровье, и для выяснения молекулярных гепатоцеллюлярных механизмов побочных эффектов, вызванных станозололом. Благодарности Авторы хотели бы поблагодарить доктора Алегакиса Афанасиоса за его ценную помощь в статистических советах и ​​комментариях. Аббревиатуры . DOI: 10.1371 / journal.pone.00. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 53. Ludlow AT, Gratidão L, Ludlow LW, Spangenburg EE, Roth SM. Острая физическая нагрузка активирует p38 MAPK и увеличивает экспрессию генов, защищающих теломеры, в сердечной мышце.Exp Physiol. 2017; 102: 397–410. DOI: 10.1113 / EP086189. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 54. Вардавас А.И., Стивактакис П.Д., Цацаракис М.Н., Фрагкиадаки П., Василаки Ф., Царди М., Дацери Г., Циаусис Дж., Алегакис А.К., Цицимпику С. и др. Длительное воздействие циперметрина и пиперонилбутоксида вызывает воспаление печени и почек и индуцирует генотоксичность у новозеландских белых кроликов-самцов. Food Chem Toxicol. 2016; 94: 250–259. DOI: 10.1016 / j.fct.2016.06.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 55.Хуан С.К., Чианг В.Д., Хуанг В.К., Хуанг С.Й., Сюй М.К., Лин В.Т. Гепатопротекторные эффекты упражнений по плаванию на крысиной модели индуцированного D-галактозой старения. Evid Based Complement Alternat Med. 2013; 2013: 275431. DOI: 10.1155 / 2013/275431. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 56. Yi X, Cao S, Chang B, Zhao D, Gao H, Wan Y, Shi J, Wei W., Guan Y. Влияние острых и хронических упражнений на сигнальный путь лептин-AMPK-ACC в печени у крыс с диабетом 2 типа . J Diabetes Res. 2013; 2013: 946432.DOI: 10.1155 / 2013/946432. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 57. Петтерссон Дж., Хиндорф Ю., Перссон П., Бенгтссон Т., Мальмквист Ю., Веркстрём В., Экелунд М. Мышечные упражнения могут вызывать крайне патологические тесты функции печени у здоровых мужчин. Br J Clin Pharmacol. 2008. 65: 253–259. DOI: 10.1111 / j.1365-2125.2007.03001.x. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 58. Brustia R, Savier E, Scatton O. Физические упражнения у пациентов с циррозом: к реабилитации в листе ожидания трансплантации печени.Систематический обзор и метаанализ. Клин Рес Гепатол Гастроэнтерол. 2017 ноябрь 18; Epub впереди печати. [PubMed] [Google Scholar] Прием станозолола в сочетании с упражнениями приводит к снижению активности теломеразы, возможно, связанному со старением печени Int J Mol Med. 2018 июл; 42 (1): 405–413. , # 1, * , # 1, * , 2 , 3 , 3 , 4 , 3 , 3 9000 , 3 и 1 Эрен Озкагли 1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и Мехтап Кара 1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета Тугба Котиль 2 Кафедра гистологии и эмбриологии медицинского факультета Стамбульского университета, Стамбул 34116, Турция Персефони Фрагкиадаки 3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион Манолис Н.Цацаракис 3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион Кристина Цицимпику 4 Государственная химическая лаборатория Греции, 11521 Афины Polychronis D. Stivaktakis 3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион Димитриос Цукалас 3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион Деметриос А.Spandidos 5 Лаборатория клинической вирусологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион, Греция Аристидес М. Цацакис 3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион Букет Альпертунга 1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и 1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и 2 Кафедра гистологии и эмбриологии медицинского факультета Стамбульского университета, Стамбул 34116, Турция 3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион 4 Государственная химическая лаборатория Греции, 11521 Афины 5 Лаборатория клинической вирусологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион, Греция # Внесено поровну. Для корреспонденции: профессору Букету Альпертунга, кафедра фармацевтической токсикологии, фармацевтический факультет, Стамбульский университет, Беязит, Стамбул 34116, Турция, электронная почта: rt.ude.lubnatsi@agnutПрофессору Аристидесу М. Цацакису, Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинская школа, Университет Крита, ПО Box 1393, 71003 Heraklion, Greece, E-mail: [email protected] * Внесено поровну Получено 28 февраля 2018 г .; Принято 11 апреля 2018 г. Эта статья цитировалась в других статьях в PMC. Заявление о доступности данных Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по разумному запросу. Реферат Анаболические вещества — это допинговые вещества, которые обычно используются в спорте. Станозолол, 17α-алкилированное производное тестостерона, широко используется спортсменами и бодибилдерами. Некоторые медицинские и поведенческие побочные эффекты связаны со злоупотреблением анаболическими андрогенными стероидами (ААС), в то время как печень остается наиболее узнаваемым органом-мишенью.В настоящем исследовании изучалось влияние на печень введения станозолола крысам в высоких дозах, напоминающих дозы, применяемые для допинга, в присутствии или отсутствии упражнений. Станозолол и его метаболиты, 16-β-гидроксистанозолол и 3′-гидроксистанозолол, были обнаружены в печени крыс с помощью жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС). Активность теломеразы, которая участвует в клеточном старении и онкогенезе, была обнаружена путем исследования уровней экспрессии обратной транскриптазы теломеразы (TERT) и фосфатазы и гомолога тензина (PTEN) в печени крыс, получавших станозолол.Станозолол индуцировал теломеразную активность на молекулярном уровне в ткани печени крыс, и упражнения обращали эту индукцию, отражая возможное преждевременное старение ткани печени. На экспрессию гена PTEN в печени крыс практически не влияли ни упражнения, ни прием станозолола. Ключевые слова: станозолол, гомолог фосфатазы и тензина, теломеразная обратная транскриптаза, теломеразная активность, 16-β-гидроксистанозолол, 3′-гидроксистанозолол Введение Станозолол является стероидом, повышающим эффективность (AAS, андрогенным).Среди всех ААС станозолол является одним из наиболее часто используемых стероидов профессиональными спортсменами и молодыми людьми для улучшения внешнего вида и работоспособности. Станозолол представляет собой 17α-алкилированное производное тестостерона с анаболическими и высокими андрогенными свойствами (1,2), и его использование в спорте запрещено Всемирным антидопинговым агентством (WADA) (3). В прошлом ААС использовались только элитными спортсменами и бодибилдерами для целей допинга. Однако в настоящее время даже молодые люди злоупотребляют ААС в супрафизиологических дозах для улучшения внешнего вида (4,5).Сообщается, что станозолол является одним из наиболее часто используемых ААС (6), и он отвечает за несколько медицинских и поведенческих побочных эффектов, являясь признанным фактором риска заболеваний печени как у экспериментальных животных, так и у людей (7-13). . Станозолол широко биотрансформируется ферментативными путями в печени. Сообщалось, что основными метаболитами станозолола являются 3′-гидроксистанозолол, 4-β-гидроксистанозолол и 16-β-гидроксистанозолол (14,15). В общем, ААС проявляют свои эффекты посредством нескольких различных механизмов, таких как модуляция экспрессии рецепторов андрогенов (16).Неблагоприятные эффекты, связанные с печенью, чаще связаны с 17α-алкильными производными ААС и, как сообщается, не связаны с путем введения. Однако точные механизмы еще полностью не изучены (17). Теломеры представляют собой гетерохроматиновые нуклеопротеидные комплексы на концах хромосом, участвующие в ряде основных биологических функций (). Известно, что теломеры играют ключевую роль в формировании и прогрессировании до 90% злокачественных новообразований. Теломеразная активность играет ключевую роль в клеточном старении и онкогенезе (18).Повышенная активность теломеразы обнаруживается в большинстве случаев рака человека (19). Теломераза — это рибонуклеопротеин, отвечающий за поддержание длины теломер. Ядро теломеразы состоит из двух компонентов: каталитической обратной транскриптазы теломеразы (TERT) и компонента теломеразной РНК (TERC) (). Теломеры — это защитные колпачки хромосом (59) (адаптировано с разрешения Shutterstock). Теломераза добавляет теломерные повторы (TTAGGG) к 3′-гидроксильному концу ведущей цепи теломеры.Компонент РНК служит шаблоном для добавления нуклеотидов. Это комплекс теломеразы, который состоит из компонента обратной транскриптазы (TERT), компонента РНК (TERC), белка дискерина и других связанных белков (NHP2, NOP10 и GAR1). Уровень экспрессии мРНК TERT был изучен как биомаркер, поскольку было показано, что он является лимитирующим детерминантом активности теломеразы при различных злокачественных новообразованиях (20). Ген фосфатазы и белка-гомолога тензина (PTEN) кодирует белок-супрессор опухоли с фосфатазной активностью.Сообщается, что частота гетерозиготности PTEN при гепатоцеллюлярной карциноме человека (ГЦК) человека снижается до 33% (21). PTEN участвует в подавлении активности теломеразы посредством регуляции активности TERT (22). PTEN является белком-негативным регулятором сигнального пути фосфоинозитид-3-киназы / AKT механизма регуляции выживания клеток и индуцирует клеточный апоптоз (23). PTEN предотвращает активацию AKT посредством дефосфорилирования фосфатидилинозитол (3,4,5) -трисфосфата (PIP3) до фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфата (PIP2).Подавление PTEN связано с онкогенной активностью в клетке (24). Целью этого исследования было изучить, по крайней мере, насколько нам известно, роль теломеразы в вызванной станозололом гепатотоксичности путем изучения корреляции между активностью теломеразы и уровнями экспрессии гена PTEN-TERT. Также исследовали биоаккумуляцию станозолола и двух его основных метаболитов (3′-гидроксистанозолол и 16-β-гидроксистанозолол) в ткани печени, а также его связь с активностью теломеразы. Материалы и методы Эксперименты на животных Всего было получено 34 крысы-самца Sprague-Dawley в возрасте 8 недель и размещено в помещениях для лабораторных животных Департамента лабораторных наук о животных Института экспериментальной медицины Стамбульского университета. (Стамбул, Турция) в соответствии с Комитетом по этике экспериментов на животных Стамбульского университета, HADYEK (номер утверждения 2013/100). Крысы были разделены на 5 групп следующим образом: i) контрольная (C) группа; ii) группу обработки пропилена (PG); iii) группу обработки станозололом (ST); iv) группа лечения и упражнений с пропиленом (PGE); и v) группа лечения станозололом и физических упражнений (STE).Животных размещали по 4 животных в одной металлической клетке и содержали в 12-часовом цикле темнота / свет при температуре 20–23 ° C. Количество крыс в экспериментальной группе, уход за крысами, обращение и используемые экспериментальные процедуры соответствовали руководящим принципам HADYEK. Вес крыс при покупке регистрировали и использовали для корректировки дозы (). Гуманными конечными точками, определенными в нашем исследовании, были боль, дистресс, неправильная осанка и судороги в соответствии с Руководящим документом ОЭСР (25). Ни у одного животного не было клинических признаков гуманных конечных точек, которые оправдывали бы их жертвоприношение до окончания эксперимента.Экспериментальный план исследования представлен в. Таблица I Вес крыс при покупке. AAS анаболический андрогенный стероид TERT теломераза обратная транскриптаза TERC 9018 компонент теломеразы 9018 9183 9018 9183 , компонент теломеразы мира HCC гепатоцеллюлярная карцинома PG пропиленгликоль IS внутренний стандарт APCI APCI химическая ионизация при атмосферном давлении PB11 ПБК на периферической крови Финансирование Это исследование было поддержано Научно-исследовательскими проектами Стамбульского университета (грант №54169-24416). Доступность данных и материалов Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по разумному запросу. Вклад авторов EO, MK, AMT, BA и DAS разработали и разработали исследование, написали рукопись и внесли ценные предложения при ее подготовке. MK, TK, PF и MNT выполнили LC-MS анализ, оценку активности теломеразы и экспрессии генов; CT, PDS и DT выполнили статистический анализ и интерпретацию данных.EO, MK и BA внесли свой вклад в заявку на финансирование. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи. Одобрение этики и согласие на участие Эксперименты на животных были одобрены Комитетом по этике экспериментов на животных Стамбульского университета, HADYEK (разрешение № 2013/100). Согласие на публикацию Не применимо. Конкурирующие интересы DAS является главным редактором журнала, но не принимал личного участия в процессе рецензирования или какого-либо влияния с точки зрения вынесения окончательного решения по этой статье. Ссылки 1. Balcells G, Matabosch X, Ventura R. Обнаружение метаболитов O- и N-сульфата станозолола и их оценка в качестве дополнительных маркеров в допинг-контроле. Анальный тест на наркотики. 2017; 9: 1001–1010. DOI: 10.1002 / dta.2107. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 2. Цицимпико Ц., Василаки Ф., Царохас К., Фрагкиадаки П., Царди М., Гутзурелас Н., Непка Ц., Калогераки А., Херетис I, Эпитропаки З. и др. Нефротоксичность у кроликов после длительного приема нандролона деканоата. Toxicol Lett.2016; 259: 21–27. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2016.06.1122. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3. Всемирное антидопинговое агентство Список запрещенных веществ и методов за 2017 год. https://www.wada-ama.org/. Проверено 14 февраля 2018 г. 4. Kioukia-Fougia N, Georgiadis N, Tsarouhas K, Vasilaki F, Fragiadaki P, Meimeti E, Tsitsimpikou C. Синтетические и натуральные пищевые добавки: «союзники» здоровья или риски для общественного здоровья. Недавние открытия Pat Inflamm Allergy Drug. 2017; 10: 72–85. DOI: 10,2174 / 1872213X10666160 3700.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 5. Цицимпику С., Хрисостому Н., Папалексис П., Царухас К., Цацакис А., Джамуртас А. Использование пищевых добавок спортсменами-любителями в Афинах, Греция. Int J Sport Nutr Exerc Exerc Metab. 2011; 21: 377–384. DOI: 10.1123 / ijsnem.21.5.377. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6. Саго Д., Мольде Х., Андреассен С.С., Торсхайм Т., Паллесен С. Глобальная эпидемиология использования анаболических андрогенных стероидов: метаанализ и мета-регрессионный анализ. Ann Epidemiol. 2014; 24: 383–398.DOI: 10.1016 / j.annepidem.2014.01.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 7. Ампуэро Дж., Гарсия Э.С., Лоренцо М.М., Калле Р, Ферреро П., Гомес МР. Вызванный станозололом мягкий холестаз. Гастроэнтерол Гепатол. 2014; 37: 71–72. DOI: 10.1016 / j.gastrohep.2013.09.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8. Баусерман Л.Л., Сарителли А.Л., Герберт П.Н. Влияние кратковременного приема станозолола на липопротеины сыворотки крови при печеночной липазной недостаточности. Обмен веществ. 1997; 46: 992–996. DOI: 10.1016 / S0026-0495 (97) -5. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9.Эль-Сераг HB, Крамер Дж., Дуан З., Канвал Ф. Расовые различия в прогрессировании цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы у ветеранов, инфицированных ВГС. Am J Gastroenterol. 2014; 109: 1427–1435. DOI: 10.1038 / ajg.2014.214. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 10. Hansma P, Diaz FJ, Njiwaji C. Смертельный разрыв кисты печени из-за использования анаболических стероидов: презентация случая. Am J Forensic Med Pathol. 2016; 37: 21–22. DOI: 10.1097 / PAF.0000000000000218. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Харкин К.Р., Коуэн Л.А., Эндрюс Г.А., Басараба Р.Дж., Фишер Дж.Р., Дебоуз Л.Дж., Руш Дж.К., Гульельмино М.Л., Кирк, Калифорния.Гепатотоксичность станозолола у кошек. J Am Vet Med Assoc. 2000. 217: 681–684. DOI: 10.2460 / javma.2000.217.681. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Сокас Л., Зумбадо М., Перес-Лусардо О., Рамос А., Перес С., Эрнандес Дж. Р., Боада Л. Д.. Гепатоцеллюлярные аденомы, связанные со злоупотреблением анаболическими андрогенными стероидами у бодибилдеров: отчет о двух случаях и обзор литературы. Br J Sports Med. 2005; 39: e27. DOI: 10.1136 / bjsm.2004.013599. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13. Стимак Д., Милич С., Динтиньяна Р.Д., Ковач Д., Ристич С.Андрогенный / анаболический стероид-индуцированный токсический гепатит. J Clin Gastroenterol. 2002. 35: 350–352. DOI: 10.1097 / 00004836-200210000-00013. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Дешмук Н.И., Захар Г., Петроци А., Секели А.Д., Баркер Дж., Нотон Д.П. Определение станозолола и 3′-гидроксистанозолола в шерсти, моче и сыворотке крыс с использованием тандемной масс-спектрометрии с жидкостной хроматографией. Chem Cent J. 2012; 6: 162. DOI: 10.1186 / 1752-153X-6-162. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Mateus-Avois L, Mangin P, Saugy M.Использование газовой хроматографии с ионной ловушкой и множественной масс-спектрометрии для обнаружения и подтверждения следовых уровней 3′-гидроксистанозолола в моче для допинг-контроля. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2005; 816: 193–201. DOI: 10.1016 / j.jchromb.2004.11.033. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Бюттнер А., Тим Д. Побочные эффекты анаболических андрогенных стероидов: патологические данные и взаимосвязь между структурой и активностью. Handb Exp Pharmacol. 2010; 195: 459–484. DOI: 10.1007 / 978-3-540-79088-4_19.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18. Рентукас Э., Царухас К., Капланис I, Короу Э, Николау М., Марафонитис G, Коккиноу С., Халиассос А., Мамалаки А., Куретас Д. и др. Связь активности теломеразы в МКПК с маркерами воспаления и эндотелиальной дисфункции у пациентов с метаболическим синдромом. PLoS One. 2012; 7: e35739. DOI: 10.1371 / journal.pone.0035739. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Zhou X, Zhu H, Lu J. Экспрессия генов PTEN и hTERT и корреляция с гепатоцеллюлярной карциномой человека.Pathol Res Pract. 2015; 211: 316–319. DOI: 10.1016 / j.prp.2014.11.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 23. Ян Ц., Ли С., Ван М., Чанг А.К., Лю И, Чжао Ф, Сяо Л., Хань Л., Ван Д., Ли С., Ву Х. PTEN подавляет онкогенную функцию AIB1 за счет снижения стабильности его белка с помощью механизма, включающего Fbw7 альфа. . Молочный рак. 2013; 12:21. DOI: 10.1186 / 1476-4598-12-21. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24. Jung S, Li C, Jeong D, Lee S, Ohk J, Park M, Han S, Duan J, Kim C, Yang Y и др.Онкогенная функция p34SEI-1 через NEDD4 1 опосредована убиквитинизацией / деградацией PTEN и активацией пути PI3K / AKT. Int J Oncol. 2013; 43: 1587–1595. DOI: 10.3892 / ijo.2013.2064. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25. ОЭСР. Руководящий документ по распознаванию, оценке и использованию клинических признаков в качестве гуманных конечных точек для экспериментальных животных, используемых при оценке безопасности. ОЭСР; Париж: 2000. [Google Scholar] 26. Черичи Камарго IC, Баррейрос де Соуза Р., Фатима Паккола Мескита С., Чуффа Л.Г., Фрей Ф.Гистология яичников и оценка фолликулов у самок крыс, получавших деканоат нандролона и подвергавшихся физическим нагрузкам. Acta Biol Hung. 2009. 60: 253–261. DOI: 10.1556 / ABiol.60.2009.3.2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 27. де Алмейда Чуффа Л.Г., де Соуза Р.Б., Фрей Ф., де Фатима Паккола Мескита С., Камарго IC. Деканоат нандролона и физическое усилие: гистологическая и морфометрическая оценка в матке взрослой крысы. Анат Рек (Хобокен) 2011; 294: 335–341. DOI: 10.1002 / ar.21314. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 28.Гопинатан С., О’Нил Э, Родригес Л.А., Чемпион Р., Филлипс М., Нуралдин А., Вендт М., Уилсон Эйдж, Крамер Дж. Токсикология наполнителей in vivo, обычно используемых при открытии лекарств на крысах. J Pharmacol Toxicol Methods. 2013; 68: 284–295. DOI: 10.1016 / j.vascn.2013.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 29. Healing G, Sulemann T, Cotton P, Harris J, Hargreaves A, Finney R, Kirk S, Schramm C, Garner C, Pivette P, Burdett L.Данные о безопасности 19 транспортных средств для использования в доклинических исследованиях на грызунах в течение 1 месяца: Введение гидроксипропил-β-циклодекстрина вызывает почечную токсичность.J Appl Toxicol. 2016; 36: 140–150. DOI: 10.1002 / jat.3155. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 30. Aye M, Di Giorgio C, De Mo M, Botta A, Perrin J, Courbiere B. Оценка генотоксичности трех криопротекторов, используемых для витрификации человеческих ооцитов: диметилсульфоксида, этиленгликоля и пропиленгликоля. Food Chem Toxicol. 2010; 48: 1905–1912. DOI: 10.1016 / j.fct.2010.04.032. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 31. Бертло-Рику А., Перрин Дж., Ди Джорджио С., де Мео М., Ботта А., Курбьер Б. Оценка генотоксичности 1,2-пропандиола (PrOH) на ооциты мышей с помощью анализа комет.Fertil Steril. 2011; 96: 1002–1007. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2011.07.1106. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 32. Каннингем Р.Л., Макгиннис М.Ю. Физическая провокация самцов крыс, подвергшихся воздействию пубертатных анаболических андрогенных стероидов, вызывает агрессию по отношению к самкам. Horm Behav. 2006; 50: 410–416. DOI: 10.1016 / j.yhbeh.2006.05.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 33. Matrisciano F, Modafferi AM, Togna GI, Barone Y, Pinna G, Nicoletti F, Scaccianoce S. Повторное лечение анаболическими андрогенными стероидами вызывает обратимые антидепрессантами изменения гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой оси, уровней BDNF и поведения.Нейрофармакология. 2010. 58: 1078–1084. DOI: 10.1016 / j.neuropharm.2010.01.015. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 34. Tucci P, Morgese MG, Colaianna M, Zotti M, Schiavone S, Cuomo V, Trabace L. Нейрохимические последствия злоупотребления стероидами: моноаминергические изменения, вызванные станозололом. Стероиды. 2012; 77: 269–275. DOI: 10.1016 / j.steroids.2011.12.014. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 35. Кара М., Озджагли Э., Фрагкиадаки П., Котил Т., Стивактакис П.Д., Спандидос Д.А., Цацакис А.М., Альпертунга Б. Определение повреждения ДНК и активности теломеразы у крыс, получавших станозолол.Exp Ther Med. 2017; 13: 614–618. DOI: 10.3892 / etm.2016.3974. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 36. Цицимпико Ц., Цацаракис М., Фрагкиадаки П., Коваци Л., Стивактакис П., Калогераки А., Куретас Д., Цацакис А. М.. Гистопатологические поражения, окислительный стресс и генотоксические эффекты в печени и почках после длительного воздействия диазинона и пропоксура на кроликов. Токсикология. 2013; 307: 109–114. DOI: 10.1016 / j.tox.2012.11.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 37. Сольбах П., Поттхофф А., Раатшен Х.Дж., Суда Б., Леманн Ю., Шнайдер А., Гебель М.Дж., Маннс М.П., ​​Фогель А.Гепатоцеллюлярная карцинома с положительным тестостерон-рецептором у 29-летнего бодибилдера с историей злоупотребления анаболическими андрогенными стероидами: отчет о болезни. BMC Gastroenterol. 2015; 15:60. DOI: 10.1186 / s12876-015-0288-0. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 38. Ливак К.Дж., Шмитген Т.Д. Анализ данных относительной экспрессии генов с использованием количественной ПЦР в реальном времени и метода 2 (-4Delta Delta C (T)). Методы. 2001; 25: 402–408. DOI: 10.1006 / meth.2001.1262. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 39.Кеслер Т., Сандху Р.С., Кришнамурти С. Гепатология: гепатоцеллюлярная карцинома у молодого человека, вторичная по отношению к злоупотреблению андрогенными анаболическими стероидами. J Gastroenterol Hepatol. 2014; 29: 1852. DOI: 10.1111 / jgh.12809. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 40. Боада Л.Д., Зумбадо М., Торрес С., Лопес А., Диас-Чико Б.Н., Кабрера Дж. Дж., Лусардо ОП. Оценка острых и хронических гепатотоксических эффектов анаболического андрогенного стероида станозолола у взрослых самцов крыс. Arch Toxicol. 1999. 73: 465–472. DOI: 10.1007 / s002040050636.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 41. Канаяма Дж., Хадсон Дж. И., Поуп Х. Дж., Младший. Долгосрочные психиатрические и медицинские последствия злоупотребления анаболическими андрогенными стероидами: надвигающаяся проблема общественного здравоохранения? Зависимость от наркотиков и алкоголя. 2008; 98: 1–12. DOI: 10.1016 / j.drugalcdep.2008.05.004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 42. Орниш Д., Лин Дж., Чан Дж. М., Эпель Э, Кемп С., Вайднер Дж., Марлин Р., Френда С. Дж., Магбануа М. Дж. М., Даубенмьер Дж. И др. Влияние всесторонних изменений образа жизни на активность теломеразы и длину теломер у мужчин с подтвержденным биопсией раком простаты низкого риска: 5-летнее наблюдение за описательным пилотным исследованием.Ланцет Онкол. 2013; 14: 1112–1120. DOI: 10.1016 / S1470-2045 (13) 70366-8. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 43. Мишра С., Кумар Р., Малхотра Н., Сингх Н., Дада Р. Мягкий окислительный стресс полезен для поддержания длины теломер сперматозоидов. World J Methodol. 2016; 6: 163–170. DOI: 10.5662 / wjm.v6.i2.163. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 44. Зар Т., Грэбер С., Перацелла М.А. Распознавание, лечение и профилактика токсичности пропиленгликоля. Semin Dial. 2007. 20: 217–219. DOI: 10.1111 / j.1525-139X.2007.00280.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 45. Djojosubroto MW, Chin AC, Go N, Schaetzlein S, Manns MP, Gryaznov S, Harley CB, Rudolph KL. Антагонисты теломеразы GRN163 и GRN163L подавляют рост опухоли и повышают химиочувствительность гепатомы человека. Гепатология. 2005; 42: 1127–1136. DOI: 10.1002 / hep.20822. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 46. Василаки Ф., Цицимпико Ц., Цароухас К., Германакис I, Царди М., Каввалакис М., Озкагли Э., Куретас Д., Цацакис А. М.. Кардиотоксичность у кроликов после длительного приема нандролона деканоата.Toxicol Lett. 2016; 241: 143–151. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2015.10.026. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 47. Пилати С., Летузе Э., Нолт Дж. К., Имбо С., Булай А., Кальдераро Дж., Пуссен К., Франкони А., Куши Дж., Моркретт Дж. И др. Геномное профилирование гепатоцеллюлярных аденом позволяет выявить повторяющиеся мутации, активирующие FRK, и механизмы злокачественной трансформации. Раковая клетка. 2014; 25: 428–441. DOI: 10.1016 / j.ccr.2014.03.005. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 49. Юнгерманн К., Кицманн Т. Зонирование паренхиматозного и непаренхиматозного метаболизма в печени.Анну Рев Нутр. 1996. 16: 179–203. DOI: 10.1146 / annurev.nu.16.070196.001143. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 50. Юнгерманн К. Метаболическое зонирование паренхимы печени. Semin Liver Dis. 1988. 8: 329–341. DOI: 10,1055 / с-2008-1040554. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 51. Сальвадор Дж. П., Санчес-Баеза Ф, Марко М. П.. Одновременное иммунохимическое определение станозолола и основного метаболита человека, 3′-гидроксистанозолола, в образцах мочи и сыворотки крови. Анальная биохимия. 2008; 376: 221–228. DOI: 10.1016 / j.ab.2008.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 52. Чилтон В.Л., Маркес Ф.З., Вест Дж., Канноуракис Дж., Берзиньш С.П., О’Брайен Б.Дж., Чарчар Ф.Дж. Острая физическая нагрузка приводит к регуляции генов, связанных с теломерами, и экспрессии микроРНК в иммунных клетках. PLoS One. 2014; 9: e 9018 9018 9018 9018 276 9018 9018 9018 9018 9018 9018 264 9018 9019 9018 9018 9018 9018 9019 9018 4 9018 9018 9018 9018 группа Ster 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018 Количество крыс Вес крыс при покупке (г) Контроль 1 259 2 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018 9018 4 264 5 282 Пропиленгликоль 1 255 2 261 5 272 Пропиленгликоль и упражнение 1 262 2 276 5 278 6 263 901 88 7 260 8 277 Стероидная группа 1 280 2 272 5 277 6 272 7 263 8 275 2 277 3 290 4 263 5 280 8 273 Таблица II Experi мысленный дизайн исследования. мл / кг пропиленгликоля в день Группы Количество крыс Подкожные инъекции Упражнение Контроль 5 Без инъекций Без упражнений Без упражнений Лечение станозололом 8 5 мг / кг станозолола в день Без упражнений Лечение пропиленгликолем и упражнения 8 1 8 1 8 1 кг пропиленгликоля в день Плавание: 20 мин / день, 5 дней в неделю Лечение станозололом и упражнения 8 5 мг / кг станозолола в день Плавание: 20 мин / день, 5 дней / неделя Плавание было выбрано в качестве модели упражнений (26, 27) и началось за 1 неделю до схемы лечения, чтобы мальчики адаптироваться.Крыс плавали в прямоугольном полиэтиленовом резервуаре (длина 120 см × глубина 50 см × ширина 43 см), наполненном водой при 29 ± 1 ° C. Во время экспериментов в течение 20 минут в день, 5 дней в неделю крыс подвергали плаванию после периода адаптации в течение 1 недели. Животных адаптировали к процессу плаванием в воде в течение 5 минут в течение первых 2 дней, а затем время плавания постепенно увеличивали до 5 минут в день до конечной продолжительности 20 минут на 5 день. Пропиленгликоль (PG ) (Tekkim, Стамбул, Турция) использовался в качестве носителя для станозолола (Sigma, Schnelldorf, Германия).Известно, что PG является хорошим проводником для экспериментальных исследований in vivo (28,29). Однако сообщалось, что высокие концентрации PG могут вызывать повреждение ДНК в эукариотических клетках и ооцитах мышей (30,31). Подкожное введение было выбрано, а дозы были выбраны в соответствии с предыдущими исследованиями (32–34). Группы, подвергшиеся воздействию, получали однократную дозу PG (1 мл / кг) и ST (5 мл / кг) подкожно в течение 5 дней в неделю. После 28 дней лечения животным была проведена легкая анестезия с использованием процента 1.9% диэтиловый эфир в анестезиологической камере и эвтаназия путем шейного вывиха, проводимая обученным персоналом. Были собраны образцы ткани печени и разделены на 2 секции. Один срез немедленно замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° C, а другой фиксировали 10% забуференным формалином и залитым парафином для гистохимического анализа. Жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (ЖХ-МС) анализ Стандарты станозолола, 3′-гидроксистанозолола и 16-β-гидроксистанозолола в концентрациях 0,0.1, 0,25, 0,5 и 1 частей на миллион были приготовлены из стандартных исходных растворов с концентрацией 20 частей на миллион. Туринабол (LGC, Лидс, Великобритания) использовали в качестве внутреннего стандарта (IS) с целевыми ионами m / z 317,25 и m / z 335,25. Калибровочные кривые были получены путем измерения отношения площадей пиков целевых ионов к IS следующим образом: для станозолола m / z 370,4 , 352,3 и 329,35, для 3′-гидроксистанозолола m / z 386,4 , 345,35, для 16-β- гидроксистанозолол m / z 386,4 , 366,3 и 345,35 для IS туринабол () (ион m / z, используемый для количественной оценки, выделен жирным шрифтом).Образцы печени необработанных животных, которые дали отрицательные результаты ( Таблица III Параметры анализа ЖХ-МС. Агент Rt m / z target m / z m / z Mw 4α-гидроксистанозолол 9 386.4 345,35 4β-hydroxystanozolol 9,3 386,4 345,35 3-hydroxystanozolol 10,15 386,4 345,35 344,49 16-β-гидроксистанозолол 10,45 386,4 366,3 345,35 344,49 Станозолол 12.95 370,4 352,3 329,35 328,49 Туринабол (IS) 13,9 317,25 335,25 334 каждого животного Примерно по 0,1 механическая гомогенизация на высокой скорости в течение 2 мин с 1,0 мл воды. Гомогенаты сильно встряхивали и затем инкубировали в ультразвуковой бане в течение 10 мин. Затем добавляли 1,5 мл этилацетата и проводили экстракцию аналитов в течение 10 мин.Образцы центрифугировали при 1820 × g в течение 2 мин при 4 ° C. Супернатанты переносили в пустую пробирку и упаривали досуха в атмосфере азота при 30 ° C. После выпаривания добавляли 100– мкл л ацетонитрила и сильно встряхивали. Супернатанты переносили во флаконы, и 10 мкл мкл из них вводили в систему ЖХ-МС для анализа. Система ЖХ-МС состоит из бинарного насоса ЖХ (Shimadzu Prominence, Киото, Япония), вакуумного дегазатора, автоматического пробоотборника и термостата для колонок.В качестве подвижной фазы был выбран градиент 0,1% муравьиной кислоты в воде (растворитель A) и ацетонитриле (растворитель B). Разделение аналитов было достигнуто на колонке для ВЭЖХ Discovery C18 (250 × 4,6 мм, 5 мкм, м), термостатированной при 30 ° C. Масс-спектрометр (LCMS-2010 EV; Shimadzu Prominence) в сочетании с интерфейсом химической ионизации при атмосферном давлении (APCI) и одиночным квадрупольным масс-фильтром использовался в выбранном положительном режиме ионного мониторинга (SIM). Температура интерфейса, CDL и теплового блока составляла 400, 200 и 200 ° C соответственно.Напряжение детектора составляло 1,5 кВ, поток распыляющего газа составлял 2,5 л / мин, а осушающий газ составлял 0,02 МПа. Анализ активности теломеразы Определение активности теломеразы в образцах ткани печени крысы выполняли количественно с использованием набора teloTAGGG telomerase PCR ELISA PLUS (Roche Diagnostic GmbH, Mannheim, Germany). Протокол набора следовал для оценки активности теломеразы, как описано ранее (35,36). Оценка экспрессии гена Выделение РНК проводили из залитых парафином срезов ткани печени крысы с использованием выделения РНК High Pure FFPET (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя.Для синтеза кДНК использовали фиксированное количество РНК из каждого образца. кДНК получали с использованием набора Transcriptor First Strand cDNA Synthesis (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. Уровни экспрессии генов TERT и PTEN анализировали с помощью количественной (в реальном времени) полимеразной цепной реакции (кПЦР) с использованием аппарата Light Cycler 480 (Roche Diagnostic GmbH) с анализом каталога Real Time Ready (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. Последовательности праймеров были следующими: PTEN прямой, 5′-AGAACAAGATGCTCAAAAAGGACAA-3 ‘и обратный, 5′-TGTCAGGGTGAGCACAAGAT-3′; TERT вперед, 5’-GACATGGAGAACAAGCTGTTTGC-3 ‘; и наоборот, 5’-ACAGGGAAGTTCACCACTGTC-3 ‘; и GAPDH прямой, 5’-TTCAACGGCACAGTCAAGG-3 ‘и обратный, 5′-CTCAGCACCAGCATCACC-3’.ПЦР-амплификации выполняли в соответствии с инструкциями производителя в трех экземплярах. Реакционную смесь без матрицы кДНК использовали в качестве отрицательного контроля. Уровни экспрессии (2 -ΔΔCt ) рассчитывали, как описано ранее (37,38). Иммуногистохимический (ИГХ) анализ ИГХ-анализы были выполнены с использованием наборов для определения ультра стрептавидина HRP [BioLegend Sig-32248, набор для определения ультра стрептавидина HRP (Multi-Specation, DAB)] и BioLegend Sig-32250, набор для определения ультра стрептавидина HRP (Multi-views, AEC) (BioLegend, San Diego, CA, USA) для уровней экспрессии PTEN и TERT соответственно.Залитые парафином срезы помещали на предметные стекла Superfrost (Menzel-Gläser, Брауншвейг, Германия). После сушки в течение ночи был проведен ИГХ-анализ PTEN и TERT с использованием метода меченой стрептавидин-биотин-пероксидазы. Предметные стекла обрабатывали ксилолом и регидратировали в растворах этанола возрастающих классов. Извлечение антигена осуществляли путем кипячения предметных стекол в течение 5 мин / 3 раза в цитратном буфере (0,01 М). Для подавления активности эндогенной пероксидазы срезы ткани обрабатывали блокирующим реагентом 1 в течение 15 минут и промывали PBS.Все срезы инкубировали с блокирующим реагентом 2 в течение 5 минут при комнатной температуре, чтобы избежать неспецифического связывания. Инкубации поликлональных антител PTEN (251264) и TERT (250509) (оба от Abbiotec, Aachen, Germany) проводили в течение ночи при 4 ° C с разведениями 1/100. Слайды инкубировали со связывающим реагентом 4, а затем с реагентом для маркировки 5 в течение 20 минут при комнатной температуре. Слайды визуализировали хромогенами DAB и AEC, контрастировали гематоксилином Майера и, наконец, монтировали.Уровни экспрессии PTEN и TERT оценивали под световым микроскопом (Olympus BX40F4; Olympus, Токио, Япония). Анализы TERT и PTEN IHC были классифицированы невооруженным глазом на 4 категории на основе интенсивности окрашивания следующим образом: 0 — нет окрашивания; +, слабое окрашивание; ++, умеренное окрашивание; и +++, сильное окрашивание). Анализ проводился с использованием считывающего устройства для одного слайда для минимизации вариабельности из-за субъективной оценки. Статистический анализ Средние значения ± стандартное отклонение и медиана были использованы для экспрессии уровней станозолола и его метаболитов, а также для PTEN, TERT и относительной теломеразной активности в процентах.Изменения между двумя значениями были выражены в виде относительных изменений в процентах или иным образом на основе следующей формулы: (фактическое изменение / контрольное значение) * 100%. Тест Колмогорова-Смирнова с поправкой Лилиэфорса применялся для проверки нормальности непрерывных переменных. R Спирмена применяли для измерения двумерных корреляций между двумя непрерывными переменными (например, относительная активность теломеразы в процентах по сравнению с уровнями экспрессии гена 3′-гидроксистанозолола TERT). Непараметрический тест Краскела-Уоллиса и параметрический односторонний дисперсионный анализ ANOVA применялись для сравнения различий в уровнях станозолола и его метаболитов между исследуемыми группами (контрольная, станозолол, PG и группы упражнений).Непараметрические апостериорные сравнения оценивали с использованием тестов Данна (непараметрические) и HSD Тьюки для параметрических тестов. Для статистического анализа использовалось программное обеспечение IBM SPSS Statistics 21.0 (IBM Corp., Армонк, Нью-Йорк, США). Уровень 0,05 был установлен для принятия или отклонения нулевой гипотезы (статистическая значимость). Размеры выборок для отдельных анализов незначительно различались из-за того, что некоторые недостающие значения возникли из-за условий эксперимента. Результаты Тесты на нормальность Тесты на нормальность показали, что только процентная относительная активность теломеразы сохранила нулевую гипотезу, предполагая нормальное распределение данных (P = 0.137). Все другие протестированные непрерывные переменные, такие как TERT, PTEN и 3′-гидроксистанозолол, не следовали нормальному распределению (P <0,01) (данные не показаны). Биоаккумуляция станозолола и его метаболитов в тканях печени Результаты суммированы в. Уровни станозолола и его метаболитов были незначительно выше в группе STE по сравнению с группой ST (P> 0,05). Таблица IV Уровни концентрации (нг / мг) станозолола и его метаболитов в группах станозолола (ST) и станозолола в сочетании с упражнениями (STE). Агент Группа ST (среднее ± стандартное отклонение) Группа ST (среднее ± стандартное отклонение) Манна-Уитни (значение P) % относительное изменение Станозолол (нг / мг ) 2,98 ± 1,01 3,89 ± 1,09 0,240 30,5 3′-гидроксистанозолол (нг / мг) 0,34 ± 0,06 0,44 ± 0,18 0,418 0,44 16-β-гидроксистанозолол (нг / мг) 0.25 ± 0,11 0,32 ± 0,15 0,485 28,0 Оценка теломеразной активности и экспрессии генов Уровни экспрессии генов PTEN и TERT и относительная теломеразная активность в процентах в исследуемых группах представлены в. Значительная разница наблюдалась для экспрессии гена TERT в различных группах (χ 2 = 17,585, df = 4, P <0,001). На основании теста Данна, упражнения снижали экспрессию TERT на (71,0%; P = 0,001), а введение ST увеличивало экспрессию TERT на (160%; P <0.001) по сравнению с группой PG. Следует отметить, что вызванное станозололом увеличение экспрессии TERT по сравнению с группой станозолола было ограничено (68,0%; P = 0,042) у животных, подвергшихся физической нагрузке. Аналогичная картина наблюдалась и для процентной активности теломеразы. На экспрессию гена PTEN практически не влияли ни упражнения, ни прием станозолола. Следует отметить, что не все значения, представленные выше, показаны в из-за большого количества попарных сравнений. Таблица V Уровни экспрессии генов PTEN и TERT (2 -ΔΔCt ) и% относительной активности теломеразы на группу. 9019 Обработка пропиленгликолем 5188 9019 9018 Параметры Группы N Среднее SD Сравнение групп Экспрессия гена PTEN (2 -ΔΔCt ) Контроль Kruskal-Wallis Обработка пропиленгликолем 5 0,37 0,25 χ 2 = 3,643, Обработка станозололом 6 40 0,42 df = 4, P = 0,456 Лечение пропиленгликолем и упражнения 5 0,98 1,62 Станозолол 1,16 0,86 Экспрессия гена TERT (2 -ΔΔCt ) Контроль 5 0,40 0,41 Краскал-Уоллис 8 2,66 χ 2 = 17,585, Лечение станозололом 6 7,25 1,40 df = 4, P = 0,001 упражнения 0,81 0,96 Лечение станозололом и упражнения 6 2,29 0,97 % относительная теломеразная активность30 0,58 ANOVA: Обработка пропиленгликолем 5 1,92 0,96 F = 3,015, df = 4, 9018 93 P = 0,040 Лечение пропиленгликолем и упражнения 5 0,76 0,61 Лечение станозололом и упражнения 6 1.33 0,96 Умеренная корреляция между относительной процентной активностью теломеразы и уровнями экспрессии гена TERT наблюдалась с использованием коэффициента корреляции Спирмена (r = 0,424, P = 0,028) (). Уровни 3′-гидроксистанозолола, измеренные в группах ST и STE, имели тенденцию отрицательно коррелировать с относительной процентной активностью теломеразы (r Спирмена r = -0,566, P = 0,055) (). Не наблюдалось корреляции между какими-либо параметрами, отслеживаемыми с помощью станозолола и 16-β-гидроксистанозолола (данные не показаны). Диаграмма разброса экспрессии гена TERT и относительной активности теломеразы в процентах. TERT, обратная транскриптаза теломеразы. Диаграмма рассеяния 3′-гидроксистанозолола и относительная активность теломеразы в процентах. Анализы ИГХ Изображения окрашивания ИГХ показаны в, а результаты суммированы в. Уровни экспрессии гена PTEN наблюдались вокруг центральной вены и паренхимы. В группе STE окрашивание гепатоцитов, окружающих эти области, было умеренным.Анализ TERT IHC выявил сильное окрашивание в группе ST вокруг портального поля, центральной вены и паренхимы, в то время как упражнения ослабляли увеличение экспрессии гена TERT (умеренное окрашивание в группе STE). Таким образом, наши результаты показали, что упражнения оказывают положительное влияние на экспрессию гена PTEN, как показано на рис. Иммуногистохимическое окрашивание белков PTEN и TERT во всех экспериментальных группах (шкала, 50 мкм мкм). Группы крыс были следующими: i) контрольная (C) группа; ii) группу обработки пропилена (PG); iii) группу обработки станозололом (ST); iv) группа лечения и упражнений с пропиленом (PGE); и v) группа лечения станозололом и физических упражнений (STE).PTEN, белок-гомолог фосфатазы и тензина, TERT, обратная транскриптаза теломеразы. Таблица VI Результаты подсчета для иммуногистохимических анализов PTEN и TERT. Группы Оценка PTEN IHC a Оценка TERT IHC a Контроль + + Лечение станозололом + +++ Лечение пропиленгликолем и упражнения + + Лечение станозололом и упражнения ++3 ++ ++ ++ ++ ++ Обсуждение Станозолол — широко используемый и наиболее мощный ААС, ответственный за ряд побочных эффектов, включая сердечно-сосудистые, репродуктивные, поведенческие эффекты и гепатотоксичность (17).Насколько нам известно, это первое исследование, посвященное изучению вызванных станозололом молекулярных путей активности теломеразы в печени крыс и любых соответствующих эффектов физических упражнений. Станозолол вызывает внутрипеченочные структурные изменения с холестазом и увеличивает риск ГЦК (37). Кроме того, было обнаружено, что злоупотребление ААС в целом является причиной гепатоцеллюлярных аденом (12,39). Несмотря на то, что механизмы, ответственные за вызванную станозололом гепатотоксичность, еще четко не идентифицированы, пролиферативные эффекты на клетки печени могут играть центральную роль в наблюдаемой гепатотоксичности (12,40,41).В нашем предыдущем исследовании мы продемонстрировали, что станозолол оказывает повреждающее действие на ДНК в лимфоцитах периферической крови, что, вероятно, связано с изменениями активности теломеразы (35). Хотя известно, что различные факторы окружающей среды повышают и понижают активность теломеразы, влияние физических упражнений на активность теломеразы еще не было четко идентифицировано (42). Было показано, что на длину теломер и активность теломеразы влияет несколько факторов, включая оксидативный стресс, психологический стресс и социально-экономический статус.Одним из возможных механизмов укорочения теломер является окислительный стресс из-за продуктов окисления оснований ДНК (8-OHdG) в гуаниновых или белковых аддуктах (43,44). Согласно недавним исследованиям, повышенная активность теломеразы обнаруживается почти в 90% случаев рака человека и в 80% случаев ГЦК. Кроме того, хорошо задокументировано, что большинство здоровых клеток не проявляют активности теломеразы (19,20,45). Результаты этого исследования продемонстрировали повышенные уровни относительной активности теломеразы в тканях печени в группе ST, в соответствии с нандролоном, другим хорошо известным ASS, который продемонстрировал аналогичные эффекты за счет увеличения активности теломеразы в зависимости от дозы как при ткань сердца и моноциты периферической крови (2,46).Это может представлять собой компенсирующий механизм восстановления на тканевом уровне, в то время как повышенные уровни циркулирующей активности теломеразы могут указывать на системное воспаление. Связь повышенной активности и экспрессии теломеразы с пролиферативными эффектами в этом исследовании вряд ли возникла из-за короткого времени воздействия (28 дней). В целом механизмы, лежащие в основе влияния ААС на активность теломеразы, не выяснены и остаются практически неизвестными. TERT представляет собой каталитическую субъединицу теломеразы, которая играет роль в ее регуляции на уровне транскрипции.Сообщалось, что мутации TERT связаны с переходом от аденомы к карциноме в печени (47). Следовательно, изменения в регуляции и экспрессии TERT играют важную роль при ГЦК (48). Было показано, что ген-супрессор опухолей PTEN отрицательно коррелирует с белком TERT человека в тканях HCC (21). Следовательно, PTEN и TERT играют противоположные роли в канцерогенезе. Сообщалось, что PTEN косвенно регулирует активность TERT через путь PI3K-PKB / Akt при ГЦК человека (21).Согласно результатам настоящего исследования, не наблюдалось значительных изменений уровней экспрессии PTEN между группами. Однако экспрессия гена TERT была значительно увеличена при лечении ST. Упражнения обращали вспять увеличение экспрессии TERT, вызванное станозололом, особенно в паренхиме, где сообщается о метаболической зональности: высвобождение глюкозы из гликогена и посредством глюконеогенеза, утилизация аминокислот и детоксикация аммиака, защитный метаболизм, образование желчи и синтез определенных белков плазмы, такие как альбумин и фибриноген, происходят в основном в перивенальной зоне, тогда как утилизация глюкозы, метаболизм ксенобиотиков и образование других белков плазмы, таких как альфа-1-антитрипсин или альфа-фетопротеин, происходят преимущественно в перивенальной зоне (49,50). В этом исследовании уровни 3′-гидроксистанозолола и 16-β-гидроксистанозолола, основных метаболитов станозолола, были определены в образцах ткани печени животных, получавших станозолол, и были определены доза-ответная связь между активностью теломеразы и TERT / PTEN. экспрессия генов была определена. Измеренные уровни 3′-гидроксистанозолола в группах ST и STE были связаны с процентной относительной теломеразной активностью, тогда как для уровней станозолола или 16-β-гидроксистанозолола никакой связи не наблюдалось.Это может быть связано с тем, что 3′-гидроксистанозолол является наиболее мощным метаболитом станозолола (2,51). Несколько исследований показали, что физические упражнения увеличивают активность теломеразы в различных типах клеток (52,53). Однако, насколько нам известно, на сегодняшний день нет доступных исследований, изучающих влияние станозолола на активность теломеразы в присутствии / отсутствии упражнений, за исключением нашего предыдущего исследования, которое было сосредоточено на циркуляции активности теломеразы в мононуклеарных клетках периферической крови (PBMCs). ) (35).Наши результаты показали повышение активности теломеразы и экспрессии TERT в ткани печени, что может быть связано либо с повышенным риском пролиферации из-за лечения станозололом (10), что маловероятно для такого короткого периода воздействия, либо может представлять собой механизм противодействия ( 54). Упражнения обращают вспять вызванное станозололом повышение активности теломеразы. Ряд исследований подтвердил, что упражнения обладают гепатопротекторным действием. Huang и др. продемонстрировали, что 12-недельная программа упражнений по плаванию подавляла маркеры старения и подавляла регуляцию воспалительных медиаторов в тканях печени у крыс, вызванных D-галактозой (55).Yi и др. продемонстрировали, что как острые, так и хронические упражнения оказывают профилактическое действие на печень крыс с диабетом 2 типа (56). С другой стороны, сообщалось, что физические упражнения увеличивают количество печеночных ферментов у людей (57), и существуют опасения относительно влияния физических упражнений на портальную гипертензию у пациентов с циррозом печени (58). В заключение, станозолол индуцирует активность теломеразы на молекулярном уровне, и упражнения обращают эту индукцию, по крайней мере, в отношении экспрессии TERT.Это может отражать преждевременное старение тканей из-за снижения активности теломеразы. Необходимы дальнейшие исследования для изучения механизмов, с помощью которых упражнения могут быть использованы для предотвращения неблагоприятного воздействия станазолола на здоровье, и для выяснения молекулярных гепатоцеллюлярных механизмов побочных эффектов, вызванных станозололом. Благодарности Авторы хотели бы поблагодарить доктора Алегакиса Афанасиоса за его ценную помощь в статистических советах и ​​комментариях. Аббревиатуры . DOI: 10.1371 / journal.pone.00. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 53. Ludlow AT, Gratidão L, Ludlow LW, Spangenburg EE, Roth SM. Острая физическая нагрузка активирует p38 MAPK и увеличивает экспрессию генов, защищающих теломеры, в сердечной мышце.Exp Physiol. 2017; 102: 397–410. DOI: 10.1113 / EP086189. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 54. Вардавас А.И., Стивактакис П.Д., Цацаракис М.Н., Фрагкиадаки П., Василаки Ф., Царди М., Дацери Г., Циаусис Дж., Алегакис А.К., Цицимпику С. и др. Длительное воздействие циперметрина и пиперонилбутоксида вызывает воспаление печени и почек и индуцирует генотоксичность у новозеландских белых кроликов-самцов. Food Chem Toxicol. 2016; 94: 250–259. DOI: 10.1016 / j.fct.2016.06.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 55.Хуан С.К., Чианг В.Д., Хуанг В.К., Хуанг С.Й., Сюй М.К., Лин В.Т. Гепатопротекторные эффекты упражнений по плаванию на крысиной модели индуцированного D-галактозой старения. Evid Based Complement Alternat Med. 2013; 2013: 275431. DOI: 10.1155 / 2013/275431. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 56. Yi X, Cao S, Chang B, Zhao D, Gao H, Wan Y, Shi J, Wei W., Guan Y. Влияние острых и хронических упражнений на сигнальный путь лептин-AMPK-ACC в печени у крыс с диабетом 2 типа . J Diabetes Res. 2013; 2013: 946432.DOI: 10.1155 / 2013/946432. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 57. Петтерссон Дж., Хиндорф Ю., Перссон П., Бенгтссон Т., Мальмквист Ю., Веркстрём В., Экелунд М. Мышечные упражнения могут вызывать крайне патологические тесты функции печени у здоровых мужчин. Br J Clin Pharmacol. 2008. 65: 253–259. DOI: 10.1111 / j.1365-2125.2007.03001.x. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 58. Brustia R, Savier E, Scatton O. Физические упражнения у пациентов с циррозом: к реабилитации в листе ожидания трансплантации печени.Систематический обзор и метаанализ. Клин Рес Гепатол Гастроэнтерол. 2017 ноябрь 18; Epub впереди печати. [PubMed] [Google Scholar] Как злоупотребление анаболическими стероидами влияет на поведение? Агрессия Отчеты о случаях и небольшие исследования показывают, что анаболические стероиды увеличивают раздражительность и агрессию, 75 , хотя результаты могут быть искажены личностными чертами, которые чрезмерно представлены у потребителей стероидов (т. Е. Антисоциальное, пограничное и истерическое расстройство личности) 78 и использование другие препараты. 79 Люди, злоупотребляющие анаболическими стероидами, сообщают о большем гневе, чем те, кто их не употребляет, 80 , а также о большем количестве драк, словесной агрессии и насилия по отношению к своим близким, 81 , иногда называемого «буйной яростью». Одно исследование предполагает, что настроение и поведенческие эффекты, наблюдаемые при злоупотреблении анаболическими андрогенными стероидами, могут быть результатом вторичных гормональных изменений. 82 Ученые попытались проверить связь между анаболическими стероидами и агрессией, назначая добровольцам высокие дозы стероидов или плацебо в течение нескольких дней или недель, а затем оценивая поведенческие симптомы.В одном из таких исследований исследователи обнаружили, что тестостерон в течение шестинедельного периода был связан с повышенной агрессией, что было оценено с помощью анкеты и компьютерной модели агрессивного поведения. 83 Кроме того, высокие дозы стероидов вызывали большее чувство раздражительности и агрессии, чем плацебо, 84 , хотя эффекты, по-видимому, сильно различаются у разных людей, 19 и другие исследования не показали этого эффекта. 85 Одно из возможных объяснений, по мнению исследователей, заключается в том, что некоторые, но не все анаболические стероиды увеличивают раздражительность и агрессию. Психиатрические расстройства Пользователи анаболических стероидов чаще, чем те, кто их не употребляет, сообщают о тревоге. 34,86 От умеренных до высоких доз анаболических стероидов также связаны серьезные расстройства настроения, такие как мания, гипомания, 87 и большая депрессия. 86,87 В одном исследовании маниакальные симптомы не были одинаковыми у разных людей, большинство из них демонстрировали незначительные психологические изменения, тогда как некоторые из них продемонстрировали заметные эффекты. 19 Употребление других наркотиков Пользователи анаболических стероидов чаще употребляют такие наркотики, как марихуана, рецептурные опиоиды, кокаин, 88 или героин. 86 В исследовании мужчин, поступивших на лечение по поводу расстройств, связанных с употреблением опиоидов, 25 процентов сообщили, что ранее принимали анаболические стероиды. Некоторые рассказали, что впервые узнали об опиоидах от друзей в спортзале, и что они сначала купили опиоиды у того же человека, который продал им анаболические стероиды. 89 В исследовании потребителей анаболических стероидов, зависимых от инъекционного опиоидного анальгетика налбуфина, большинство из них сообщили, что они начали использовать налбуфин для лечения боли при травмах, связанных с тяжелой атлетикой.Они также описали широкое использование налбуфина в своих спортзалах. 90 Исследования также показывают, что некоторые пользователи могут обратиться к другим препаратам, чтобы облегчить некоторые из негативных эффектов анаболических стероидов. Например, исследование 227 мужчин, поступивших в 1999 году в частный лечебный центр по поводу зависимости от героина или других опиоидов, показало, что 9,3 процента ранее злоупотребляли анаболическими стероидами. Большинство из них сообщили об использовании опиоидов для противодействия бессоннице, раздражительности, депрессии и отмене анаболических стероидов. 91 Станозолол против туринабола, станозолола против анавара — Профиль — Intymag Forum Станозолол против туринабола, станозолол против анавара — Купить стероиды онлайн на рынке, и был разработан Organon как идеальное решение для заместительной гормональной терапии. Предназначен для того, чтобы дать пользователю постоянно повышенный уровень тестостерона в крови в течение месяца и, таким образом, устранить необходимость частых поездок к врачу для инъекций.Сустанон 250 таблеток кауфена → купите сейчас в Интернете ← эффективный для мускусного кауфена, умеренного урожая и высокого качества сустанона 250 мг осинового инъекционного анаболического стероида. Сустанон (смесь тестостерона) является стероидом, применяемым в медицине. Сустанон 250 от hi tech — одна из самых сильнодействующих пищевых добавок, доступных сегодня на рынке, которая поможет вам добиться максимального мышечного развития и увеличить прирост силы. В отличие от других производителей мышечной массы, представленных на рынке, hi tech привносит свой фармацевтический опыт в индустрию бодибилдинга и спортивного питания.Testosteron spielt eine sehr wichtige rolle im leben eines mannes. Es ist verantwortlich für die funktion der hoden, der erektilen Potenz, der prostata und der samenbläschen. Männern mit niedrigem sexyhormonspiegel wird empfohlen, sustanon 250 zu kaufen. Sustanon injectie vergoeding — суст 250 мг суст — это стероид для инъекций, который содержит гормон тестостерон в четырех различных эфирах, что в сумме составляет 250 мг. Форма выпуска: суст 250 мг 1 мл. Сустанон 250 — это мощная смесь четырех тестостеронов (сложных эфиров коротких, средних и длинных эфиров), которые работают вместе, чтобы обеспечить больше преимуществ в цикле набора массы и сокращения.Сустанон для инъекций 250 мг используется для лечения мужского гипогонадизма. Прочтите о инъекциях сустанона 250 мг, побочных эффектах, дозировке, цене, составе и заменителях. Производится компанией «Органон» (Индия). Часто искали цена сустанон 250. Продажа Сустанон 250. Ознакомьтесь с уникальными кодами. Любые циклы сустанона 250 из нашего магазина стероидов прошли необходимую производственную сертификацию. Если это не какая-то ужасная подделка, брендовые омнадрены от надежных поставщиков не из дешевых. Мыслите ясно, поднимайте внутреннюю силу, покупайте сустанон онлайн — испытайте свои собственные желания уже сегодня.️ сустанон 250 — торговая марка тестостерона. ️ инъекции обычно делаются один раз в три недели. Хотя чаще всего вы найдете сустанон 250 в продаже, вы также можете найти сустанон 270, 300, 350 и даже 500 в Интернете и в других местах. По большей части продаваемый сустанон 250 для инъекций является наиболее удобным выбором, поскольку вы можете снизить и / или увеличить дозу по мере необходимости с помощью тщательного измерения. В 1000 таблеток анаболика для бодибилдинга b. Geoenergy forum — профиль участника> страница профиля. Пользователь: бодибилдинг anabolika kur test enanthate 250, anabolika pulver kaufen, название: новый участник, о: бодибилдинг анаболика kur test enanthate 250, anabolika pulver kaufen — legale steroide zum verkauf &.Дозирование сустанона во время стероидного цикла, как правило, следует разделить, по крайней мере, на две инъекции в неделю, а более предпочтительно, по крайней мере, на три. Послекурсовая терапия настоятельно рекомендуется после любого стероидного курса, включая курс сустанона. Производитель приложил немало усилий для производства этих продуктов, поскольку они содержат широкий спектр сильнодействующих ингредиентов, станозолол против туринабола. Станозолол против анавара Халотестин против мастерона против винстрола при травмах, но кажется, что винстрол — единственный, который имеет репутацию причинения травм? Имею ли я это право или у винстрола есть некоторые свойства, которые означают, что он конкретно влияет на суставы? Галотестин против туринабола для набора мышечной массы? они очень похожи, выбирайте то, что дешевле.(turinabol) голосов: 1 25. Туринабол чрезвычайно эффективен для использования в спорте и, как утверждается, на протяжении многих лет был предпочтительным анаболическим стероидом для сборной Восточной Германии по легкой атлетике. История и обзор станозолола: станозолол, несомненно, является одним из самых популярных анаболических стероидов, которые когда-либо производились. Почти все знают это по имени. Туринабол — бесполезный стероид. Я знаю, что у американцев есть лучший вид угл «туринабол» (из-за примеси в нем дианабола и винстрола), но настоящий туринабол работает только в очень высоких дозах, близких к 100 мг / день, и в любом случае эффект довольно слабый.Станозолол — намного дешевле, но для суставов он оказывает очень сухое действие. Т-бол — тоже популярный. Мы не знаем, что на самом деле было дано спортсменам гдр. Винстрол, также называемый станозололом или винни, представляет собой 17-альфа-алкилированный анаболический андрогенный стероид. Это один из наиболее часто используемых атлетов средств повышения производительности. Впервые он был выпущен на рынок в 1960-х годах. Станозолол был разработан для лечения множества заболеваний, таких как остеопороз. Станозолол представляет собой анаболический андрогенный стероид, полученный из дигидротестостерона (dht), или, более конкретно, его структурно измененная форма.Станозолол — это гормон dht с двумя структурными изменениями, которые дают нам соединение винстрола. Первым изменением является введение присоединенной пиразольной группы в а-кольцо гормона, заменяющей 3-кетогруппу. Станозолол также может быть анаболическим стероидом для наращивания мышечной массы и особенно привлекателен для спортсменов. Врачи утверждали, что для спортсменов использовать этот препарат — безумие. Винстрол (станозолол) был самым популярным стероидом среди многих спортсменов, поскольку они считают, что он относительно безопасен и мягок как для мужчин, так и для женщин.С другой стороны, анадрол представляет собой соединение, производное от dht, и 17-альфа-алкилированный стероид. Первоначально он был изготовлен, чтобы помочь людям, страдающим анемией. Примоболан, тестоцип, туринабол и провирон (промежуточный цикл безжировой массы и силы) этот цикл специально разработан для тех, кто стремится к долгосрочному повышению качества с наименьшими возможными побочными эффектами. только тогда мы сможем обсудить, что лучше, в более конкретных терминах, и, скорее всего, это то, что вам нужно, станозолол против туринабола. Станозолол против туринабола, станозолол против анавара Давайте рассмотрим это прямо. В конечном итоге вы получите то, чего хотите, в зависимости от ваших конкретных упражнений и целей бодибилдинга. Вы можете выбирать из широкого спектра легальных альтернатив стероидам. Некоторые из них могут помочь вам нарастить мышцы, в то время как другие помогут вам сосредоточиться на сокращении жира, станозолол или туринабол. Наконец, есть продукты, которые помогут быстро набраться сил. Юридический справочник по стероидам, разрешенные стероидные стеки для продажи Станозолол также может быть анаболическим стероидом для наращивания мышечной массы и особенно привлекателен для спортсменов.Врачи утверждали, что для спортсменов использовать этот препарат — безумие. Мария Грабовецкая сдала положительный тест на запрещенные вещества дегидрохлорметилтестостерон (туринабол), оксандролон и станозолол. Ирина Кулеша, которая участвовала в соревнованиях по тяжелой атлетике среди женщин до 75 кг, была дисквалифицирована после положительного результата теста на запрещенное вещество дегидрохлорметилтестостерон (туринабол). Винстрол (станозолол) был самым популярным стероидом среди многих спортсменов, поскольку они считают, что он относительно безопасен и мягок как для мужчин, так и для женщин.С другой стороны, анадрол представляет собой соединение, производное от dht, и 17-альфа-алкилированный стероид. Первоначально он был изготовлен, чтобы помочь людям, страдающим анемией. Станозолол или винстрол — это хорошо известный анаболический стероид, полученный из тестостерона с несколькими молекулярными изменениями, которые придают ему его уникальные свойства. Выпускается как в таблетках, так и в инъекциях. Бодибилдеры и спортсмены ставят станозолол на третье место среди лучших анаболических стероидов после тестостерона и тренболона. Туринабол различается в зависимости от типа углеводов в составе.Есть добавки с легкоусвояемыми простыми углеводами, а есть такие, которые усваиваются надолго. Людям с избыточным весом, а также склонным к полноте регулярное употребление туринабола противопоказано. Туринабол — это модифицированная форма дианабола, но, хотя дианабол, как правило, обладает умеренными эстрогенными эффектами, у туринабола их нет. Это результат присоединения хлорной группы к позиции № углерода. 4 в структуре стероида, который блокирует фермент ароматазу от превращения туринабола в эстроген.Что такое станозолол: факты, которые вы должны знать, прежде чем покупать его в Интернете. Станозолол — синтетический анаболический стероид, полученный из дигидротестостерона. Он был разработан американской фармацевтической компанией Winthrop Laboratories (стерлинговый препарат) в 1962 году и был одобрен FDA для использования человеком. На нашем сайте представлены роиды ведущих компаний. Цена на станозолол может быть значительно ниже его сильного потенциала. Увеличивайте свой потенциал, мыслите ясно. Купите винстрол в таблетках — быстрее добьетесь желаемого. Таблетки винстрола от надежных производителей не могут быть более дешевыми.Просто проверьте номера защиты. Когда цель состоит в том, чтобы полностью измельчить, варианты бесконечны и включают анавар, трен, кленбутерол, примоболан, мастерон и туринабол. Не забывайте о диете и тренировках! преимущества цикла. Действующее вещество винстрола станозолол связывается рецепторами андрогенов, расположенными в костной и мышечной ткани тела. Станозолол обладает наихудшей токсичностью для печени (гепатотоксичность) среди всех оральных стероидов в дозировке мг на мг. Кроме того, его пагубное влияние на ваш липидный профиль (холестерин) также очень выражено, даже при низких дозах — 6 мг станозолола в день могут снизить HDL (хороший холестерин) на 33% и повысить LDL (плохой холестерин) на 29% (12 ) Самые популярные продукты: АНАДРОЛ 50 мг (100 таблеток) Иранский гормон Мастерон энантат 100 мг Сустанон 250 флакон 10 мл / 250 мг на 1 мл Para Pharma Europe Domestic Трен Табс 1 мг (50 таблеток) Сустанон 250 мг / мл x 10 мл Метандиенон Maha Pharma Провирон 25 мг (50 таблеток) Анавар — 50 мг Мастерон 100 мг / мл x 10 мл Дека дураболин 250 мг / мл x 10 мл Arimidex 1 Maha Pharma Масторал 10 мг (50 таблеток) Масторал 10 мг (50 таблеток) 70 мг 5000 МЕ ХГЧ + Бактериальная вода Dragon Pharma Миболерон Метенолон энантат 100 мг / мл 10 мл флакон Сустанон 250 таблеток, станозолол против анавара Станозолол против туринабола, цена купить стероиды онлайн бодибилдинговые препараты.Его регулярно рекомендуют пациентам с атрофией мышц. Препарат необходимо принимать в относительно больших дозах, чтобы заметны эффективные результаты, — станозолол по сравнению с туринаболом. У большинства людей необходимая дозировка составляет 50 мг. Однако обычно мужчины принимают 80 мг в день. Женщины редко принимают более 20 мг в день из-за негативных побочных эффектов, которые он оказывает на их организм. https://byounite.world/community/profile/sarms15630542/ Testo Max содержит несколько соединений, таких как пажитник, который может увеличить стимуляцию выработки тестостерона в организме, станозолол по сравнению с туринаболом.Станозолол против туринабола, лучшие стероиды для продажи PayPal. На самом деле, употребляя очень мало калорий, все, что они делают, это лишают свой метаболизм энергии, станозолол против анавара. https://holospeak.co/community/profile/sarms14724266/ Sustanon 250 tabletten kaufen → перейти в наш интернет-магазин ← sustanon kaufen für einen schnellen muskelaufbau √ preis ab 96,3 € für 1 fläschung sustan √ dos 250 кауфенов в немецком языке «sicher und diskret √ hersteller organon». Geoenergy forum — профиль участника> страница профиля.Пользователь: бодибилдинг anabolika kur test enanthate 250, anabolika pulver kaufen, название: новый участник, о: бодибилдинг анаболика kur test enanthate 250, anabolika pulver kaufen — legale steroide zum verkauf &. Сустанон ампул не ише ярар сустанон 250 нил египет сустанон 250 мг цена сустанон инъекционная доза сустанон 250 таблеток сколько сустанон 250 вводить для бодибилдинга результаты инъекций тестостерона энантата сустанон 250 против пропионата. Трудно выключить мозг терапевта во время просмотра сериалов / фильмов.Что представляет собой препарат сустанон 250 и для чего он применяется. Сустанон 250 представляет собой прозрачный бледно-желтый раствор для инъекций, содержащий активный ингредиент тестостерон в 4 отдельных формах (250 мг / мл). Активные вещества сустанона 250 (см. Раздел 6 «Что содержит сустанон 250») превращаются вашим организмом в тестостерон. Tu salud capilar foro — perfil del usuario> perfil página. Использование: дека стероид кауфен, тестостерон, тестостерон энантат 250 мг, кауфен, название: новый член, тестостерон, тестостерон энантат, 250 мг, кауфен — кауфен с анаболом стероид онлайн и п.Продажа Сустанон 250. Ознакомьтесь с уникальными кодами. Любые циклы сустанона 250 из нашего магазина стероидов прошли необходимую производственную сертификацию. Если это не какая-то ужасная подделка, брендовые омнадрены от надежных поставщиков не из дешевых. Мыслите ясно, поднимайте внутреннюю силу, покупайте сустанон онлайн — испытайте свои собственные желания уже сегодня. При поиске отзывов о тестостероне сустанон 250 вы найдете широкий диапазон, который на первый взгляд может показаться подавляющим. При поиске обзоров любого продукта обращайте внимание как на плюсы, так и на минусы.Щелкните здесь >>> Стероид для бодибилдинга Ersatz Anavar 50mg dragon pharma, sustanon kaufen — kaufen sie anabole steroide online бодибилдинг стероид ersatz anavar 50mg dragon pharma anavar — высоко ценимый стероид в мире бодибилдинга из-за его способности сокращать, наращивать и улучшать мышечную силу . Сустанон 250 инъекций цена в Индии сустанон 250 фунтов. Йога — это профилактическая практика, побуждающая пользователя соединяться с телом и разумом. Было изучено, что он полезен при многих состояниях, которые лечат пациенты.Sustanon 250 является лучшим тестостероном на рынке, vorausgesetzt es handelt sich um echtes sustanon 250 und nicht um eine der vielen schlechten fälschungen die zeitweise den markt überschwemmen. Durch diese wurde der «gute ruf» von sustanon 250 schwer angeschlagen. Анаболика кауфен, метил-1-тестостерон, сустанон 300 кауфен. Sustanon-valmistetta voidaan käyttää pakkaukseen merkittyyn viimeiseen käyttöpäivämäärään asti. Säilytä alle 30 ºc. Pakkaukset ja valmisteen kuvaus Дека дураболин (200-400 мг) + тестостерон этанат (500 мг) + дианабол (30 мг) ‘8 недель.Принимая во внимание, что Кломид следует начинать сразу же с точки зрения ПКТ, сустанон 250 таблеток. Только тренболон: тренболон — один из самых сильных стероидов в мире. https://scvirtualbusinesscenter.com/community/profile/sarms46518060/ Чаще всего их поиски приводят их к перекрестку, где им приходится стоять и решать, следует ли им принимать стероиды, использовать другой подход или просто продолжать как они есть, станозолол против анавара. Если они решат использовать стероиды, они могут начать задаваться вопросом, какие анаболические стероиды наиболее безопасны для использования.И поскольку они безопасны в использовании и легальны, эти продукты намного проще получить, станозолол или анавар. Итак, какие из доступных юридических стероидов являются лучшими? Мы хотим, чтобы вы действительно поняли стероиды и выяснили, что это такое: станозолол или анавар. Как они работают и каковы на самом деле некоторые из лучших советов, советов и рекомендаций по стероидным курсам. Вот где мы подходим к смеси, станозолол и анавар. Видите ли, в сегодняшней статье мы рассмотрим некоторые из лучших анаболиков для мужчин, доступных в настоящее время на черном рынке.Несмотря на репутацию средства для набора массы, стероиды можно использовать в качестве средства для похудания. Они чрезвычайно эффективны в снижении потери мышечной массы, веса тела и улучшении мобилизации жира, станозолол по сравнению с туринаболом. Вы также сэкономите 20 процентов при покупке в стопке, а не при покупке этих продуктов по отдельности. Этот стек продлится вам 4 недели, станозолол против анавара. Как мы уже сказали, не из лучших. Они просто продолжают выкрикивать свое имя как своего рода психологическую уловку, чтобы заставить вас думать, что станозолол против анавара действительно хорош.Таким образом, цена умеренной прибыли очень высока. Тем не менее, анварол намного дешевле по сравнению со станозололом и составляет всего 55 долларов (что является долей от стоимости фармацевтического анавара, которая обычно составляет несколько сотен долларов). Несмотря на то, что он имеет несколько преимуществ, он также имеет некрасивую сторону, поэтому вы должны быть осторожны при использовании стероидов на основе тестостерона, станозолола против мастерона. Его использование может усилить половое влечение, уменьшить яички и даже вызвать облысение. Таким образом, холестерин и артериальное давление будут колебаться больше, чем на тестостероне или дека-дураболине; но меньше, чем другие анаболические стероиды, станозолол против анавара.Подавление тестостерона почти наверняка. Быстрая доставка: Нью-Йорк, Лос-Анджелес, Чикаго, Хьюстон, Феникс, Филадельфия, Сан-Антонио, Сан-Диего, Даллас, Детройт, Сан-Хосе, Индианаполис, Джексонвилл, Сан-Франциско, Хемпстед, Колумбус, Остин, Мемфис, Балтимор, Шарлотта, Форт-Уэрт, Милуоки, Бостон, Эль-Пасо, Вашингтон, Нэшвилл-Дэвидсон, Сиэтл, Денвер, Лас-Вегас, Портленд, Оклахома-Сити, Тусон, Альбукерке, Атланта, Лонг-Бич, Брукхейвен, Фресно, Новый Орлеан, Сакраменто, Кливленд, Меса, Канзас-Сити, Вирджиния-Бич, Омаха, Окленд, Майами, Талса, Гонолулу, Миннеаполис, Колорадо-Спрингс.Аризона, Калифорния, Колорадо, Округ Колумбия, Флорида, Джорджия, Гавайи, Иллинойс, Индиана, Луизиана, Мэриленд, Массачусетс, Мичиган, Миннесота, Миссури, Небраска, Невада, Нью-Мексико, Нью-Йорк, Северная Каролина, Огайо, Оклахома, Орегон, Пенсильвания, Теннесси, Техас, Вирджиния, Вашингтон, Висконсин, Алабама, Алабама, Аляска, AK, Аризона, Аризона, Арканзас, АР, Калифорния, Калифорния, Колорадо, Колорадо, Коннектикут, Коннектикут, Коннектикут, Коннектикут, Делавэр, Делавэр, Округ Колумбия, Округ Колумбия, Флорида, Флорида, Джорджия, Джорджия, Гавайи, Гавайи, Айдахо, Айдахо, Иллинойс, Иллинойс, Индиана, Индиана, Айова, Айова, Канзас, Канзас, Кентукки, Кентукки, Луизиана, Лос-Анджелес, Мэн, Мэн, Мэриленд, Мэриленд, Массачусетс, Массачусетс, Мичиган, Мичиган, Миннесота, Миннесота, Миссисипи, МС, Миссури, Миссури, Монтана, MT, Небраска, NE, Невада, Невада, Невада, Нью-Гэмпшир, NH, Нью-Джерси, Нью-Джерси, Нью-Мексико, Нью-Мексико, Нью-Йорк, Нью-Йорк, Северная Каролина, Северная Каролина, Северная Дакота, Северная Дакота, Огайо, Огайо, Оклахома, Оклахома, Орегон, Орегон, Пенсильвания, Пенсильвания, Род-Айленд, Род-Айленд, Южная Каролина, Южная Каролина, Южная Дакота, Южная Дакота, Теннесси, Теннесси, Теннесси, Техас, Техас, Юта , Юта, Вермонт, Вирджиния, Вирджиния, Вашингтон, WA, Западная Вирджиния, WV, Висконсин, WI, Вайоминг, WY Доставка по всему миру: США, Италия, Великобритания, Германия, Австралия, Испания, Франция, Нидерланды, Ирландия, Швейцария, Япония, Дания, Швеция, Австрия, Норвегия, Новая Зеландия, Греция, Бельгия blabla Злоупотребление стероидами сотрудниками правоохранительных органов Руководство по пониманию опасностей анаболических стероидов март 2004 г. Злоупотребление анаболическими стероидами, которое когда-то считалось проблемой, строго связанной с бодибилдерами, любителями фитнеса и профессиональными спортсменами, вошло в сообщество правоохранительных органов.Сотрудники правоохранительных органов использовали стероиды как по физическим, так и по психологическим причинам. Идея повышенной физической силы и выносливости обеспечивает «непобедимый склад ума» при исполнении служебных обязанностей. Краткосрочные неблагоприятные физические эффекты злоупотребления анаболическими стероидами достаточно хорошо известны. Однако долгосрочные неблагоприятные физические эффекты злоупотребления анаболическими стероидами не изучались и как таковые не известны. Кроме того, такое злоупотребление может привести к вредным побочным эффектам, а также к серьезным травмам и смерти.Обидчик в большинстве случаев не подозревает об этих скрытых опасностях. Это руководство поможет вам понять, почему злоупотребляют анаболическими стероидами и как вы можете информировать сотрудников правоохранительных органов и других лиц об опасности этих наркотиков. В этом руководстве также обсуждаются опасные медицинские эффекты, связанные со злоупотреблением стероидами. Работая вместе, мы можем значительно сократить злоупотребление анаболическими стероидами. Важно осознавать эту проблему и просвещать наших сотрудников в правоохранительных органах. Что такое анаболические стероиды? Анаболические стероиды — это синтетические варианты встречающегося в природе мужского гормона тестостерона. И у мужчин, и у женщин тестостерон вырабатывается в организме: у мужчин — в семенниках, у женщин — в яичниках и других тканях. Полное название этого класса препаратов — андрогенные (способствующие мужским качествам) анаболические (наращивание тканей) стероиды (класс препаратов). Некоторые из стероидов, которыми больше всего злоупотребляют, включают Дека-Дураболин®, Дураболин®, Эквипойз® и Винстрол®.Распространенные уличные (сленговые) названия анаболических стероидов включают арнольды, леденцы для спортзала, памперс, роиды, укладчики, тренажеры для веса и сок. Два основных эффекта тестостерона — это андрогенный эффект и анаболический эффект. Термин «андрогенный» относится к физическим изменениям, которые испытывает мужчина в период полового созревания, в процессе развития до зрелого возраста. Андрогенные эффекты аналогичным образом наблюдаются у женщин. Это свойство отвечает за большинство побочных эффектов при употреблении стероидов.Термин анаболический относится к стимулированию анаболизма, фактическому наращиванию тканей, в основном мышц, за счет стимулирования синтеза белка. Почему злоупотребляют стероидами? Анаболические стероиды в основном используются бодибилдерами, спортсменами и любителями фитнеса, которые утверждают, что стероиды дают им конкурентное преимущество и / или улучшают их физическую работоспособность. Также известно, что эти препараты принимают люди, занимающиеся видами деятельности, требующими повышенной физической силы (телохранители, строительные рабочие и сотрудники правоохранительных органов).Стероиды предназначены для увеличения безжировой массы тела, силы и агрессивности. Также считается, что стероиды сокращают время восстановления между тренировками, что позволяет тренироваться усерднее и тем самым дополнительно улучшать силу и выносливость. В результате этих заявлений другие лица, в том числе сотрудники правоохранительных органов, использовали стероиды в личных и профессиональных целях. Профессия правоохранительных органов сложна как умственно, так и физически. В результате сотрудники правоохранительных органов ищут средства правовой защиты и решения для более эффективного выполнения своих повседневных задач.Анаболические стероиды — препарат выбора, потому что они известны тем, что они быстрее и легче увеличивают размер и силу мышц, а также повышают выносливость при выполнении физических нагрузок. Некоторые сотрудники правоохранительных органов могут полагать, что стероиды дают им физическое и психологическое преимущество при выполнении своей работы. Где взять стероиды? Врачи могут назначать стероиды пациентам в законных медицинских целях, таких как потеря функции яичек, рак груди, низкое количество эритроцитов, задержка полового созревания и ослабленные состояния, возникшие в результате хирургического вмешательства или болезни.Ветеринары назначают стероиды животным (например, кошкам, крупному рогатому скоту, собакам и лошадям) в законных целях, таких как повышение эффективности корма и улучшение набора веса, силы и шерсти. Они также используются в ветеринарной практике для лечения анемии и противодействия разрушению тканей во время болезней и травм. Для целей незаконного использования есть несколько источников; наиболее распространенным незаконным источником является контрабанда стероидов в Соединенные Штаты из других стран, таких как Мексика и страны Европы.Ввоз контрабанды из этих мест проще, потому что для покупки стероидов не требуется рецепт. Реже стероиды, обнаруженные на незаконном рынке, утекают из законных источников (например, кражи или неправильное назначение) или производятся в подпольных лабораториях. Как принимаются стероиды? Анаболические стероиды, отпускаемые для законных медицинских целей, вводятся несколькими способами, включая внутримышечную или подкожную инъекцию, через рот, имплантацию гранул под кожу и путем нанесения на кожу (например,грамм. гели или пластыри). Эти же пути используются для злоупотребления стероидами, причем наиболее распространены инъекции и пероральный прием. Люди, злоупотребляющие стероидами, могут принимать от 1 до 100 раз больше обычных терапевтических доз анаболических стероидов. Это часто включает одновременный прием двух или более стероидов, практика, называемая «суммированием». Злоумышленники часто чередуют периоды (от 6 до 16 недель) приема высоких доз стероидов с периодами приема низких доз или вообще без наркотиков. Эта практика называется «езда на велосипеде».»Продолжительность пребывания стероидов в организме варьируется от пары дней до более 12 месяцев. Опасности физического и психологического характера Возрастает озабоченность по поводу возможных серьезных проблем со здоровьем, связанных со злоупотреблением стероидами, включая как краткосрочные, так и долгосрочные побочные эффекты. Краткосрочные неблагоприятные физические эффекты злоупотребления анаболическими стероидами достаточно хорошо известны. Кратковременные побочные эффекты могут включать сексуальные и репродуктивные расстройства, задержку жидкости и сильные угри.Краткосрочные побочные эффекты у мужчин обратимы после прекращения приема стероидов. Эффекты маскулинизации, наблюдаемые у женщин, такие как снижение голоса, рост волос на теле и лице, увеличение клитора и облысение, необратимы. Долгосрочные неблагоприятные физические эффекты злоупотребления анаболическими стероидами у мужчин и женщин, кроме маскулинизирующих эффектов, не изучались и как таковые не известны. Однако предполагается, что возможные долгосрочные эффекты могут включать неблагоприятные сердечно-сосудистые эффекты, такие как повреждение сердца и инсульт. Возможные физические побочные эффекты включают следующее: Высокий уровень холестерина в крови — высокий уровень холестерина в крови может привести к сердечно-сосудистым проблемам Угри тяжелой степени Истончение волос и облысение Удержание жидкости Высокое кровяное давление Заболевания печени (поражение печени и желтуха) Стероиды могут повлиять на развитие плода во время беременности Риск заражения ВИЧ и другими заболеваниями, передающимися через кровь, при совместном использовании инфицированных игл Сексуальные и репродуктивные расстройства: AAS анаболический андрогенный стероид TERT теломераза обратная транскриптаза TERC 9018 компонент теломеразы 9018 9183 9018 9183 , компонент теломеразы мира HCC гепатоцеллюлярная карцинома PG пропиленгликоль IS внутренний стандарт APCI APCI химическая ионизация при атмосферном давлении PB11 ПБК на периферической крови Финансирование Это исследование было поддержано Научно-исследовательскими проектами Стамбульского университета (грант №54169-24416). Доступность данных и материалов Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по разумному запросу. Вклад авторов EO, MK, AMT, BA и DAS разработали и разработали исследование, написали рукопись и внесли ценные предложения при ее подготовке. MK, TK, PF и MNT выполнили LC-MS анализ, оценку активности теломеразы и экспрессии генов; CT, PDS и DT выполнили статистический анализ и интерпретацию данных.EO, MK и BA внесли свой вклад в заявку на финансирование. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи. Одобрение этики и согласие на участие Эксперименты на животных были одобрены Комитетом по этике экспериментов на животных Стамбульского университета, HADYEK (разрешение № 2013/100). Согласие на публикацию Не применимо. Конкурирующие интересы DAS является главным редактором журнала, но не принимал личного участия в процессе рецензирования или какого-либо влияния с точки зрения вынесения окончательного решения по этой статье. Ссылки 1. Balcells G, Matabosch X, Ventura R. Обнаружение метаболитов O- и N-сульфата станозолола и их оценка в качестве дополнительных маркеров в допинг-контроле. Анальный тест на наркотики. 2017; 9: 1001–1010. DOI: 10.1002 / dta.2107. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 2. Цицимпико Ц., Василаки Ф., Царохас К., Фрагкиадаки П., Царди М., Гутзурелас Н., Непка Ц., Калогераки А., Херетис I, Эпитропаки З. и др. Нефротоксичность у кроликов после длительного приема нандролона деканоата. Toxicol Lett.2016; 259: 21–27. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2016.06.1122. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3. Всемирное антидопинговое агентство Список запрещенных веществ и методов за 2017 год. https://www.wada-ama.org/. Проверено 14 февраля 2018 г. 4. Kioukia-Fougia N, Georgiadis N, Tsarouhas K, Vasilaki F, Fragiadaki P, Meimeti E, Tsitsimpikou C. Синтетические и натуральные пищевые добавки: «союзники» здоровья или риски для общественного здоровья. Недавние открытия Pat Inflamm Allergy Drug. 2017; 10: 72–85. DOI: 10,2174 / 1872213X10666160 3700.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 5. Цицимпику С., Хрисостому Н., Папалексис П., Царухас К., Цацакис А., Джамуртас А. Использование пищевых добавок спортсменами-любителями в Афинах, Греция. Int J Sport Nutr Exerc Exerc Metab. 2011; 21: 377–384. DOI: 10.1123 / ijsnem.21.5.377. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6. Саго Д., Мольде Х., Андреассен С.С., Торсхайм Т., Паллесен С. Глобальная эпидемиология использования анаболических андрогенных стероидов: метаанализ и мета-регрессионный анализ. Ann Epidemiol. 2014; 24: 383–398.DOI: 10.1016 / j.annepidem.2014.01.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 7. Ампуэро Дж., Гарсия Э.С., Лоренцо М.М., Калле Р, Ферреро П., Гомес МР. Вызванный станозололом мягкий холестаз. Гастроэнтерол Гепатол. 2014; 37: 71–72. DOI: 10.1016 / j.gastrohep.2013.09.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8. Баусерман Л.Л., Сарителли А.Л., Герберт П.Н. Влияние кратковременного приема станозолола на липопротеины сыворотки крови при печеночной липазной недостаточности. Обмен веществ. 1997; 46: 992–996. DOI: 10.1016 / S0026-0495 (97) -5. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9.Эль-Сераг HB, Крамер Дж., Дуан З., Канвал Ф. Расовые различия в прогрессировании цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы у ветеранов, инфицированных ВГС. Am J Gastroenterol. 2014; 109: 1427–1435. DOI: 10.1038 / ajg.2014.214. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 10. Hansma P, Diaz FJ, Njiwaji C. Смертельный разрыв кисты печени из-за использования анаболических стероидов: презентация случая. Am J Forensic Med Pathol. 2016; 37: 21–22. DOI: 10.1097 / PAF.0000000000000218. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Харкин К.Р., Коуэн Л.А., Эндрюс Г.А., Басараба Р.Дж., Фишер Дж.Р., Дебоуз Л.Дж., Руш Дж.К., Гульельмино М.Л., Кирк, Калифорния.Гепатотоксичность станозолола у кошек. J Am Vet Med Assoc. 2000. 217: 681–684. DOI: 10.2460 / javma.2000.217.681. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Сокас Л., Зумбадо М., Перес-Лусардо О., Рамос А., Перес С., Эрнандес Дж. Р., Боада Л. Д.. Гепатоцеллюлярные аденомы, связанные со злоупотреблением анаболическими андрогенными стероидами у бодибилдеров: отчет о двух случаях и обзор литературы. Br J Sports Med. 2005; 39: e27. DOI: 10.1136 / bjsm.2004.013599. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13. Стимак Д., Милич С., Динтиньяна Р.Д., Ковач Д., Ристич С.Андрогенный / анаболический стероид-индуцированный токсический гепатит. J Clin Gastroenterol. 2002. 35: 350–352. DOI: 10.1097 / 00004836-200210000-00013. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Дешмук Н.И., Захар Г., Петроци А., Секели А.Д., Баркер Дж., Нотон Д.П. Определение станозолола и 3′-гидроксистанозолола в шерсти, моче и сыворотке крыс с использованием тандемной масс-спектрометрии с жидкостной хроматографией. Chem Cent J. 2012; 6: 162. DOI: 10.1186 / 1752-153X-6-162. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Mateus-Avois L, Mangin P, Saugy M.Использование газовой хроматографии с ионной ловушкой и множественной масс-спектрометрии для обнаружения и подтверждения следовых уровней 3′-гидроксистанозолола в моче для допинг-контроля. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2005; 816: 193–201. DOI: 10.1016 / j.jchromb.2004.11.033. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Бюттнер А., Тим Д. Побочные эффекты анаболических андрогенных стероидов: патологические данные и взаимосвязь между структурой и активностью. Handb Exp Pharmacol. 2010; 195: 459–484. DOI: 10.1007 / 978-3-540-79088-4_19.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18. Рентукас Э., Царухас К., Капланис I, Короу Э, Николау М., Марафонитис G, Коккиноу С., Халиассос А., Мамалаки А., Куретас Д. и др. Связь активности теломеразы в МКПК с маркерами воспаления и эндотелиальной дисфункции у пациентов с метаболическим синдромом. PLoS One. 2012; 7: e35739. DOI: 10.1371 / journal.pone.0035739. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Zhou X, Zhu H, Lu J. Экспрессия генов PTEN и hTERT и корреляция с гепатоцеллюлярной карциномой человека.Pathol Res Pract. 2015; 211: 316–319. DOI: 10.1016 / j.prp.2014.11.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 23. Ян Ц., Ли С., Ван М., Чанг А.К., Лю И, Чжао Ф, Сяо Л., Хань Л., Ван Д., Ли С., Ву Х. PTEN подавляет онкогенную функцию AIB1 за счет снижения стабильности его белка с помощью механизма, включающего Fbw7 альфа. . Молочный рак. 2013; 12:21. DOI: 10.1186 / 1476-4598-12-21. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24. Jung S, Li C, Jeong D, Lee S, Ohk J, Park M, Han S, Duan J, Kim C, Yang Y и др.Онкогенная функция p34SEI-1 через NEDD4 1 опосредована убиквитинизацией / деградацией PTEN и активацией пути PI3K / AKT. Int J Oncol. 2013; 43: 1587–1595. DOI: 10.3892 / ijo.2013.2064. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25. ОЭСР. Руководящий документ по распознаванию, оценке и использованию клинических признаков в качестве гуманных конечных точек для экспериментальных животных, используемых при оценке безопасности. ОЭСР; Париж: 2000. [Google Scholar] 26. Черичи Камарго IC, Баррейрос де Соуза Р., Фатима Паккола Мескита С., Чуффа Л.Г., Фрей Ф.Гистология яичников и оценка фолликулов у самок крыс, получавших деканоат нандролона и подвергавшихся физическим нагрузкам. Acta Biol Hung. 2009. 60: 253–261. DOI: 10.1556 / ABiol.60.2009.3.2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 27. де Алмейда Чуффа Л.Г., де Соуза Р.Б., Фрей Ф., де Фатима Паккола Мескита С., Камарго IC. Деканоат нандролона и физическое усилие: гистологическая и морфометрическая оценка в матке взрослой крысы. Анат Рек (Хобокен) 2011; 294: 335–341. DOI: 10.1002 / ar.21314. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 28.Гопинатан С., О’Нил Э, Родригес Л.А., Чемпион Р., Филлипс М., Нуралдин А., Вендт М., Уилсон Эйдж, Крамер Дж. Токсикология наполнителей in vivo, обычно используемых при открытии лекарств на крысах. J Pharmacol Toxicol Methods. 2013; 68: 284–295. DOI: 10.1016 / j.vascn.2013.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 29. Healing G, Sulemann T, Cotton P, Harris J, Hargreaves A, Finney R, Kirk S, Schramm C, Garner C, Pivette P, Burdett L.Данные о безопасности 19 транспортных средств для использования в доклинических исследованиях на грызунах в течение 1 месяца: Введение гидроксипропил-β-циклодекстрина вызывает почечную токсичность.J Appl Toxicol. 2016; 36: 140–150. DOI: 10.1002 / jat.3155. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 30. Aye M, Di Giorgio C, De Mo M, Botta A, Perrin J, Courbiere B. Оценка генотоксичности трех криопротекторов, используемых для витрификации человеческих ооцитов: диметилсульфоксида, этиленгликоля и пропиленгликоля. Food Chem Toxicol. 2010; 48: 1905–1912. DOI: 10.1016 / j.fct.2010.04.032. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 31. Бертло-Рику А., Перрин Дж., Ди Джорджио С., де Мео М., Ботта А., Курбьер Б. Оценка генотоксичности 1,2-пропандиола (PrOH) на ооциты мышей с помощью анализа комет.Fertil Steril. 2011; 96: 1002–1007. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2011.07.1106. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 32. Каннингем Р.Л., Макгиннис М.Ю. Физическая провокация самцов крыс, подвергшихся воздействию пубертатных анаболических андрогенных стероидов, вызывает агрессию по отношению к самкам. Horm Behav. 2006; 50: 410–416. DOI: 10.1016 / j.yhbeh.2006.05.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 33. Matrisciano F, Modafferi AM, Togna GI, Barone Y, Pinna G, Nicoletti F, Scaccianoce S. Повторное лечение анаболическими андрогенными стероидами вызывает обратимые антидепрессантами изменения гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой оси, уровней BDNF и поведения.Нейрофармакология. 2010. 58: 1078–1084. DOI: 10.1016 / j.neuropharm.2010.01.015. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 34. Tucci P, Morgese MG, Colaianna M, Zotti M, Schiavone S, Cuomo V, Trabace L. Нейрохимические последствия злоупотребления стероидами: моноаминергические изменения, вызванные станозололом. Стероиды. 2012; 77: 269–275. DOI: 10.1016 / j.steroids.2011.12.014. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 35. Кара М., Озджагли Э., Фрагкиадаки П., Котил Т., Стивактакис П.Д., Спандидос Д.А., Цацакис А.М., Альпертунга Б. Определение повреждения ДНК и активности теломеразы у крыс, получавших станозолол.Exp Ther Med. 2017; 13: 614–618. DOI: 10.3892 / etm.2016.3974. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 36. Цицимпико Ц., Цацаракис М., Фрагкиадаки П., Коваци Л., Стивактакис П., Калогераки А., Куретас Д., Цацакис А. М.. Гистопатологические поражения, окислительный стресс и генотоксические эффекты в печени и почках после длительного воздействия диазинона и пропоксура на кроликов. Токсикология. 2013; 307: 109–114. DOI: 10.1016 / j.tox.2012.11.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 37. Сольбах П., Поттхофф А., Раатшен Х.Дж., Суда Б., Леманн Ю., Шнайдер А., Гебель М.Дж., Маннс М.П., ​​Фогель А.Гепатоцеллюлярная карцинома с положительным тестостерон-рецептором у 29-летнего бодибилдера с историей злоупотребления анаболическими андрогенными стероидами: отчет о болезни. BMC Gastroenterol. 2015; 15:60. DOI: 10.1186 / s12876-015-0288-0. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 38. Ливак К.Дж., Шмитген Т.Д. Анализ данных относительной экспрессии генов с использованием количественной ПЦР в реальном времени и метода 2 (-4Delta Delta C (T)). Методы. 2001; 25: 402–408. DOI: 10.1006 / meth.2001.1262. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 39.Кеслер Т., Сандху Р.С., Кришнамурти С. Гепатология: гепатоцеллюлярная карцинома у молодого человека, вторичная по отношению к злоупотреблению андрогенными анаболическими стероидами. J Gastroenterol Hepatol. 2014; 29: 1852. DOI: 10.1111 / jgh.12809. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 40. Боада Л.Д., Зумбадо М., Торрес С., Лопес А., Диас-Чико Б.Н., Кабрера Дж. Дж., Лусардо ОП. Оценка острых и хронических гепатотоксических эффектов анаболического андрогенного стероида станозолола у взрослых самцов крыс. Arch Toxicol. 1999. 73: 465–472. DOI: 10.1007 / s002040050636.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 41. Канаяма Дж., Хадсон Дж. И., Поуп Х. Дж., Младший. Долгосрочные психиатрические и медицинские последствия злоупотребления анаболическими андрогенными стероидами: надвигающаяся проблема общественного здравоохранения? Зависимость от наркотиков и алкоголя. 2008; 98: 1–12. DOI: 10.1016 / j.drugalcdep.2008.05.004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 42. Орниш Д., Лин Дж., Чан Дж. М., Эпель Э, Кемп С., Вайднер Дж., Марлин Р., Френда С. Дж., Магбануа М. Дж. М., Даубенмьер Дж. И др. Влияние всесторонних изменений образа жизни на активность теломеразы и длину теломер у мужчин с подтвержденным биопсией раком простаты низкого риска: 5-летнее наблюдение за описательным пилотным исследованием.Ланцет Онкол. 2013; 14: 1112–1120. DOI: 10.1016 / S1470-2045 (13) 70366-8. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 43. Мишра С., Кумар Р., Малхотра Н., Сингх Н., Дада Р. Мягкий окислительный стресс полезен для поддержания длины теломер сперматозоидов. World J Methodol. 2016; 6: 163–170. DOI: 10.5662 / wjm.v6.i2.163. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 44. Зар Т., Грэбер С., Перацелла М.А. Распознавание, лечение и профилактика токсичности пропиленгликоля. Semin Dial. 2007. 20: 217–219. DOI: 10.1111 / j.1525-139X.2007.00280.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 45. Djojosubroto MW, Chin AC, Go N, Schaetzlein S, Manns MP, Gryaznov S, Harley CB, Rudolph KL. Антагонисты теломеразы GRN163 и GRN163L подавляют рост опухоли и повышают химиочувствительность гепатомы человека. Гепатология. 2005; 42: 1127–1136. DOI: 10.1002 / hep.20822. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 46. Василаки Ф., Цицимпико Ц., Цароухас К., Германакис I, Царди М., Каввалакис М., Озкагли Э., Куретас Д., Цацакис А. М.. Кардиотоксичность у кроликов после длительного приема нандролона деканоата.Toxicol Lett. 2016; 241: 143–151. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2015.10.026. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 47. Пилати С., Летузе Э., Нолт Дж. К., Имбо С., Булай А., Кальдераро Дж., Пуссен К., Франкони А., Куши Дж., Моркретт Дж. И др. Геномное профилирование гепатоцеллюлярных аденом позволяет выявить повторяющиеся мутации, активирующие FRK, и механизмы злокачественной трансформации. Раковая клетка. 2014; 25: 428–441. DOI: 10.1016 / j.ccr.2014.03.005. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 49. Юнгерманн К., Кицманн Т. Зонирование паренхиматозного и непаренхиматозного метаболизма в печени.Анну Рев Нутр. 1996. 16: 179–203. DOI: 10.1146 / annurev.nu.16.070196.001143. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 50. Юнгерманн К. Метаболическое зонирование паренхимы печени. Semin Liver Dis. 1988. 8: 329–341. DOI: 10,1055 / с-2008-1040554. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 51. Сальвадор Дж. П., Санчес-Баеза Ф, Марко М. П.. Одновременное иммунохимическое определение станозолола и основного метаболита человека, 3′-гидроксистанозолола, в образцах мочи и сыворотки крови. Анальная биохимия. 2008; 376: 221–228. DOI: 10.1016 / j.ab.2008.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 52. Чилтон В.Л., Маркес Ф.З., Вест Дж., Канноуракис Дж., Берзиньш С.П., О’Брайен Б.Дж., Чарчар Ф.Дж. Острая физическая нагрузка приводит к регуляции генов, связанных с теломерами, и экспрессии микроРНК в иммунных клетках. PLoS One. 2014; 9: e Мужчины Женщины Атрофия (истощение тканей или органов) яичек Потеря полового влечения Уменьшение или уменьшение количества сперматозоидов производство Увеличение груди и простаты Пониженный уровень гормонов Бесплодие Нарушения менструального цикла Бесплодие Эффекты маскулинизации, например, лица волосы, уменьшение размера груди, постоянно пониженный голос, а также увеличение клитора. Возможные психологические расстройства включают следующее: Перепады настроения (включая маниакальные симптомы, ведущие к насилию) Нарушение суждения (проистекающее из чувства непобедимости) Депрессия Нервозность Сильная раздражительность Заблуждения Враждебность и агрессия Законы и наказания за злоупотребление анаболическими стероидами Закон о контроле над анаболическими стероидами 1990 года поместил анаболические стероиды в Список III Закона о контролируемых веществах (CSA) с 27 февраля 1991 года.В соответствии с этим законодательством анаболические стероиды определяются как любое лекарственное средство или гормональное вещество, химически и фармакологически связанное с тестостероном (кроме эстрогенов, прогестинов и кортикостероидов), которое способствует росту мышц. Владение или продажа анаболических стероидов без действующего рецепта является незаконным. Простое хранение незаконно полученных анаболических стероидов влечет за собой максимальное наказание в виде одного года тюремного заключения и минимум 1000 долларов штрафа, если это первое правонарушение, связанное с наркотиками.Максимальное наказание за торговлю людьми составляет пять лет тюрьмы и штраф в размере 250 000 долларов, если это первое уголовное преступление, связанное с наркотиками. Если это второе уголовное преступление, связанное с наркотиками, максимальный срок тюремного заключения и максимальный штраф удваиваются. Хотя перечисленные выше наказания относятся к федеральным правонарушениям, отдельные штаты также ввели штрафы и взыскания за незаконное использование анаболических стероидов. Альтернативные стероиды На незаконном рынке анаболических стероидов обычно можно найти множество нестероидных препаратов.Эти вещества в основном используются по одной или нескольким из следующих причин: 1) служить альтернативой анаболическим стероидам; 2) для облегчения краткосрочных побочных эффектов, связанных с употреблением анаболических стероидов; или 3) для маскировки употребления анаболических стероидов. Примеры лекарств, выступающих в качестве альтернативы анаболическим стероидам, включают кленбутерол, гормон роста человека, инсулин, инсулиноподобный фактор роста и гамма-гидроксибутират (GHB). Примерами лекарств, используемых для лечения краткосрочных побочных эффектов злоупотребления анаболическими стероидами, являются эритропоэтин, хорионический гонадотропин человека (ХГЧ) и тамоксифен.Кроме того, мочегонные и урикозурические средства могут использоваться для маскировки приема стероидов. За последние несколько лет ряд метаболических предшественников тестостерона или нандролона был продан в качестве пищевых добавок в США. Эти диетические добавки можно купить в магазинах здорового питания без рецепта. Некоторые из этих веществ включают андростендион, андростендиол, норандростендион, норандростендиол и дегидроэпиандтростерон (ДГЭА), которые в организме могут превращаться в тестостерон или подобное соединение.Неизвестно, способствуют ли они росту мышц. Вызывают ли анаболические стероиды зависимость? Неустановленный процент лиц, злоупотребляющих стероидами, может стать зависимым от препарата, о чем свидетельствует их продолжение приема стероидов, несмотря на физические проблемы, негативное влияние на социальные отношения или нервозность и раздражительность. Пользователи стероидов могут испытывать такие симптомы отмены, как перепады настроения, усталость, беспокойство и депрессия. Известно, что без лечения некоторые депрессивные симптомы, связанные с отменой анаболических стероидов, сохраняются в течение года или более после того, как обидчик прекращает прием наркотиков. Злоупотребление стероидами в правоохранительных органах Несмотря на незаконность приема стероидов без рецепта и известные опасности злоупотребления стероидами, проблема в правоохранительных органах продолжает расти. В Миннеаполисе сержант полиции был обвинен в хранении стероидов. Он признался, что употреблял стероиды. В Майами полицейский был арестован за покупку у дилера наборов гормона роста человека (HGH). Дилер также сообщил федеральным властям, что полицейский еще четыре раза покупал у него анаболические стероиды.В Тампе полицейский был приговорен к 70 месяцам тюремного заключения за обмен 1000 таблеток экстази из полицейского участка на стероиды. Как мы можем сократить их злоупотребления? Наиболее важным аспектом сокращения злоупотреблений является просвещение относительно опасных и вредных побочных эффектов и симптомов злоупотребления. Сотрудники правоохранительных органов должны понимать, что они могут выполнять свою работу и иметь отличное тело без стероидов. Им следует сосредоточиться на правильном питании, отдыхе и хорошем общем психическом и физическом здоровье.Все эти факторы являются факторами того, как тело сформировано и обусловлено. Для получения дополнительной информации о стероидах посетите наш веб-сайт: www.DEAdiversion.usdoj.gov . Представлено как государственная услуга: Управление по борьбе с наркотиками Управление переадресации Вашингтон, округ Колумбия 20537 Туринабол и метан в бодибилдинге Туринабол обладает преимущественно анаболическими качествами в сочетании с относительно низкой андрогенной активностью.Опять же, если мы сравним его с метаном, последний имеет гораздо более высокий анаболический и андрогенный индекс, что позволяет нам охарактеризовать Туринабол как «мягкий ». Пресс-релиз — 23 октября 2012 г. 23 октября 2012 г. (Newswire.com) — В гонке за превосходство в спортивной фармакологии во всем мире проводились исследования, чтобы создать лучший метод использования стероидов. Тогда наиболее распространенными стероидами были тестостерон и метандростенолон.В России были проведены исследования по поиску наилучшей схемы использования этих дженериков. Опытным путем установлена ​​наиболее эффективная доза метана для спортсмена. Исходя из этого, советские спринтеры начали использовать курсы длительностью около 35 мг в день. В ходе этих экспериментов было обнаружено так называемое явление «рецепторной блокировки». В конечном итоге происходит сброс защиты от длительного чрезмерного раздражения рецептора и закрытие некоторых из них в попытке сохранить постоянство внутренней среды (гомеостаз).Чтобы поддерживать тот же уровень стимуляции, необходимо было увеличивать дозировку или непрерывно до тех пор, пока побочные эффекты не установятся на верхнем пределе, а затем продолжать прием лекарства, чтобы вернуться к норме, или изменить лекарство или его комбинацию с любым другим. для поддержки сродства к рецепторам. Россиянин не может решить эту проблему и принял концепцию «ключевого во время спортивных достижений», принимая стероиды в течение 1-2 лет, а затем отменяя, чтобы быть на пике фитнеса в течение всего года. В Восточной Германии подошли к проблеме иначе.Они просто изобрели и разработали новый препарат — систему, основанную на приеме 0,125 мг препарата на килограмм безжировой массы тела. Их оптимальная доза была намного меньше советской и действовала несколько лет. Они также использовали циклы стероидов для поддержания сродства к рецепторам. Туринабол проявил себя в новую эпоху в профессиональном спорте, это был настоящий фармакологический прорыв. Появление хлордегидрометилтестостерона ознаменовало переход к следующему этапу эволюции допинга, особенно сильно повлиявшего на Туринабол на спортивные результаты в легкой атлетике. Туринабол обладает преимущественно анаболическими качествами в сочетании с относительно низкой андрогенной активностью. Опять же, если сравнивать его с метаном, последний имеет гораздо более высокий анаболический и андрогенный индекс, что позволяет нам охарактеризовать Туринабол как «мягкий» (и даже «слабый») фармпрепарат. Чтобы более полно представить себе силу и эффективность Туринабола, нужно сравнить его с другими лекарствами, действие которых нам хорошо известно. Для этого представьте себе некую фармакологическую шкалу, в которой сначала будут располагаться самые слабые лекарства, а дальше будут размещаться более сильные стероиды, т.е. чем дальше от начала шкалы находится лекарство, тем оно сильнее.Раньше на этом динамометре мы видим оксандролон и оральный вариант Примо, затем восходящие — Станозолол и Метан, в конце шкалы обнаруживаются Анадрол, Халотест и прочая тяжелая артиллерия. Так что Туринабол органично вписался между станозололом и метаном. В исполнении он представляет собой нечто среднее между анаболиками. Конечно, это очень примитивная иллюстрация, подобная виртуальная модель силы и качества воздействия фармацевтических препаратов позволяет химикам-новичкам все преимущества и недостатки хлордегидрометилтестостерона. Туринабол широко распространен во всех спортивных дисциплинах. После того, как этот препарат попал в тяжелую атлетику и легкую атлетику, медленно, но верно, начал просачиваться в рок-бодибилдинг, где со временем и нашел свою нишу. Казалось бы, любимым пероральным препаратом бодибилдеров, который используется в курсах набора массы, всегда был Дианабол, а туринабол, но слабый на практике был хорошим «строителем мышц». Бодибилдеры круглый год принимают андрогены, употребляют Туринабол как анаболическое дополнение к своим курсам.Туринабол — это традиционная комбинация с тестом и колодой. В таких курсах есть андрогенные и анаболические компоненты, за короткое время можно значительно увеличить вес бодибилдера. Одной из особенностей применения Туринабола бодибилдерами является использование чрезмерных доз. No related posts. Добавить комментарий Отменить ответ Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены * Комментарий * Имя * Email * Сайт